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微生物实验 电子科技大学生命科学与技术学院 郑雪莲
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实验注意事项 无菌概念 预习 操作注意事项 实验环境、安全 领用登记 清洁 微生物实验
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实验报告 实验原理：简明扼要，忌长篇抄写实验指导内容。 实验目的：1-2点即可 实验内容：
实验器材（设备、元器件）： 应包含试剂、药品和器材；但只写主要的。 实验步骤：只写主要步骤，简要 微生物实验
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实验结果及数据分析：详细的、原始的实验结果记录，有图附图，有表附表；需要计算的给出计算过程。
实验结论：根据实验结果的图表及计算结果，给出的结论。一定要下结论。 总结及心得体会：要写，根据自己实验的效果分析实验成败的原因等。 建议：鼓励大家写，根据自己的体会去写，利于今后实验的改进。 微生物实验
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实验一 培养基的配制和灭菌 实验目的 了解培养基的配制原理和过程，掌握其配制方法。 了解高压蒸汽灭菌的原理和方法，掌握操作步骤。 微生物实验
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湿热灭菌： 高压蒸汽灭菌 干热灭菌 辐射灭菌 过滤灭菌 化学灭菌 渗透压灭菌 微生物实验
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实验内容 配制三种培养基 牛肉膏蛋白胨培养基（LB培养基） 高氏一号培养基 马铃薯-蔗糖培养基（PDA培养基） 培养基灭菌 微生物实验
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实验方法和步骤 计算 称量 溶解 定容 调节pH值 移入三角瓶，加入琼脂 高压灭菌 微生物实验
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实验任务 配制三种培养基 每4-5人一组，每组配制： 牛肉膏蛋白胨培养基200-250ml，可倒8-10个平板
PDA培养基50ml ，可倒2个平板 微生物实验
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注 意 事 项 配制培养基一般用常温的水，对于难以溶解的药品可用磁力加热搅拌器促溶。 需要调节pH的培养基，一定要调pH值。
琼脂粉末定容后加入灭菌的三角瓶即可，无需提前溶解。灭菌后需充分摇匀。 无需分装，灭菌后直接倒平板。 微生物实验
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思 考 题 微生物培养基应具备哪些条件和成分？ 培养基中加入琼脂的作用是什么？ 培养基配制好后为什么必须立即灭菌？如果不能立即灭菌应怎么办？
如何检查培养基灭菌是否彻底？ 微生物实验
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实验二 环境微生物的检测 实验目的 了解周围环境中微生物的分布状况。 牢固树立“无菌”概念。 学会无菌操作倒平板培养基的方法。 微生物实验
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实验内容 倒平板（LB、高氏一号、PDA平板） 微生物的接种 微生物实验
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实验方法和步骤 倒平板 标记 土壤微生物的分离 微生物实验
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环境或人体微生物的接种 或其他你感兴趣来源的微生物接种 接种后平板封口 倒置培养（28℃或37℃） 微生物实验
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结 果 举 例 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 微生物实验
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微生物实验
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微生物实验
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微生物实验
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微生物实验
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微生物实验
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微生物实验
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实验任务 土壤微生物分离 每小组接种LB、PDA、高氏平板各2个，共计6个。 其他微生物检测 每小组接种2个LB平板，注意两个平板间的对照。
微生物实验
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注 意 事 项 培养基温度降低到50℃左右才倒平板。 倾倒平板时培养基量要适中。 严格无菌操作。 微生物实验
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思 考 题 为什么培养基要在50℃左右才能倒平板，不可太高也不可太低？ 为什么接种好的平板要倒置培养？
通过本实验后，谈谈你对微生物分布及数量的认识。 微生物实验
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实验三 最低抑菌浓度(MIC)的测定 实验目的 了解MIC测定的原理。 掌握滤纸片法的操作方法。 （K-B法或透明圈法） 微生物实验
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实验内容 检测常见抗生素对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抗性。 微生物实验
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实验方法和步骤 √ 微生物实验
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将200ul菌液用涂布棒均匀的涂布在LB平板表面； 吹干，待表面无液体流动；
将镊子在酒精灯火焰上灼烧灭菌，冷却后夹取灭菌的滤纸圆片，放于平板表面的适宜位置； 用小枪头滴加5ul左右不同的抗生素及无菌水于滤纸片上，做好标记 平板封口，倒置培养。 微生物实验
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结果分析 敏感 sensitive 抗性resistant 抑菌圈 inhibition 微生物实验
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实验任务 每小组LB平板4-6个，大肠杆菌（E.coli），金黄色葡萄球菌（S.aure）各一管。
每小组抗生素一组，浓度均为2mg/ml，包括： 氨苄西林（Amp，Ampcillin） 头孢霉素（Cef， Cefotaxime ） 链霉素（Stm， Streptomycin ） 卡那霉素（Kan，Kanamycin） 青霉素（Pen，Penicillin） 每个人均需动手，选一个菌株做一个平板，每组至少做2个大肠杆菌、2个金黄色葡萄球菌。 微生物实验
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注 意 事 项 涂布平板时，涂布棒灼烧灭菌后一定要自然冷却，以免烫死细菌。 药物必须混匀，否则将影响结果准确性。
滤纸片放入相应位置，做好标记，可用无菌水做对照。 微生物实验
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思 考 题 用MIC法进行药敏实验时，培养基中菌细胞的量对结果有什么影响？ 课后了解MIC法的实际应用。 微生物实验
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下次实验请带 实验服：避免染液污染衣物 直尺：用于这次实验结果的观察测量 拍照工具：相机、手机，用于结果记录 微生物实验
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实验四 细菌的简单染色和 革兰氏染色 实验目的 掌握细菌涂片和简单染色的方法。 学习并掌握革兰氏染色的基本原理和制片技术。 微生物实验
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实验内容 对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌进行简单染色和革兰氏染色观察，并记录结果。 微生物实验
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实验方法和步骤 详见实验指导书 染液的量、染色时间均需要自行调节 固定、脱色 低倍镜下观察 高倍油镜下观察 微生物实验
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实验任务 每组完成对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的染色观察 描述并绘制（拍摄）简单染色后，两种菌的颜色和形态
描述并绘制（拍摄）革兰氏染色后，两种菌的颜色，根据结果判定两种菌是革兰氏阳性还是阴性。 微生物实验
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注 意 事 项 载玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。 挑菌量宜少，涂片宜薄。 革兰氏染色成败的关键是脱色时间。注意随时调节脱色时间。
染色过程中勿使染色液干涸。 微生物实验
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结 果 举 例 大肠杆菌简单染色结果 微生物实验
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G- G+ 微生物实验
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思 考 题 涂片为什么要固定？固定的目的之一是杀死菌体，这与用自然死亡的菌体进行染色有何不同？
革兰氏染色的关键是哪一步？为什么？你如何控制这一步的？ 不经复染能否区别革兰氏阳性菌和阴性菌？ 微生物实验
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实验五 微生物的显微镜 直接计数法 实验目的 掌握血球计数板进行微生物计数的方法。 微生物实验
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实验任务 对给定的酵母菌液进行细胞计数 微生物实验
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实验方法和步骤 微生物实验
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计 算 公 式 细胞数/ml＝每小格细胞数×4000×1000×稀释倍数 25中格计数板：
16中格计数板： 细胞数/ml＝每中格细胞数×16×10×1000×稀释倍数 微生物实验
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注 意 事 项 加菌液时，量不应过多，不能产生气泡。 由于酵母菌菌体无色透明，计数观察时应仔细调节光线。
为了减少误差，应避免重复和遗漏，对线上的菌体采取科学的方法计数。 微生物实验
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思 考 题 为什么计数室不能有气泡？ 显微镜直接计数法有什么优缺点。 试分析本实验结果的误差来源，提出改进措施。 微生物实验
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实验一：微生物的分离与检测 内容：3种培养基的配制、土壤微生物的分离、环境微生物的检测。 实验试剂、器材：包括培养基配方 结果：
记录本实验所配制培养基的名称和数量。 记录高压蒸汽灭菌的结果。 结合其他小组的情况，记录分离接种实验结果（表格见实验指导p9）。 结论：关于微生物的分布等 微生物实验
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实验二：MIC测定 结果： 分别记录两个抑菌平板抑菌圈的大小（直径） 结论： 5种抗生素的抗性比较 两种细菌对不同抗生素敏感性的比较
微生物实验
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实验三 染色 结果： 结论： 拍摄或者绘制两种细菌简单染色的结果，描述其形态和颜色 拍摄或者绘制两种细菌革兰氏染色的结果，描述其形态和颜色
两种细菌经简单染色后，观察到的差异 经革兰氏染色后，观察到的差异，及革兰氏阴性、阳性菌的判定。 微生物实验
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实验四 计数 结果： 实验指导p16的计数原始记录表格 结论： 根据公式计算菌细胞数的过程及结果 重复实验的，取平均数 微生物实验
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谢 谢 请将实验报告于6月30日前交至学习委员或周建平老师、陈苗苗老师处 微生物实验
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