任务2.4 微生物生长曲线的测定.

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1 任务2.4 微生物生长曲线的测定

2 微生物特别是单细胞微生物，体积很小，个体的生长很难测定，而且也没有什么实际应用价值。因此，在微生物学的研究和应用中，通常是测定群体的增加量，即群体的生长。
测定不同种类、不同生长状态微生物的生长情况，需要选用不同的指标。通常对单细胞微生物来说，既可测定细胞数目，又可测定生长量；而对多细胞微生物(尤其是丝状真菌)，则常以菌丝生长的长度等作为生长指标。

3 微生物细胞数目的测定 －－适用于单细胞微生物或丝状微生物的孢子
微生物细胞数目的测定 －－适用于单细胞微生物或丝状微生物的孢子 直接计数法－－总菌计数 血球计数板计数法 间接计数法－－活菌计数 平板菌落计数法 其他计数法 1、比浊法 2、膜过滤法

4 微生物生长量的测定 直接法 1、测体积法 2、称重法 间接法 1、含氮量测定法 2、DNA含量测定法 3、其他生理指标法

5 单细胞微生物的生长曲线 多数细菌的繁殖速度很快。大肠杆菌在适宜的条件下繁殖48h，其子代总重可达2.2×10 31g，这是一个巨大的数字。然而，实际情况是不可能的。那么，细菌的群体生长规律到底怎样呢?

6 生长曲线 将少量单细胞纯培养物接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养，定时取样测定细胞含量，如果以培养时间为横坐标，以细胞数目的对数或生长速度为纵坐标作图，可以得到一条曲线，称为生长曲线。

7 微生物的典型生长曲线 Ⅰ.延滞期 Ⅱ.指数期 Ⅲ.稳定期 Ⅳ.衰亡期 细菌数目（个/ml）对数 总菌数 活菌数 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 培养时间/h

8 （一）延滞期 延滞期出现的原因 把少数单细胞微生物接种到新鲜的培养基中培养时，细胞并不立即进行分裂繁殖，微生物的增殖数为０，这时细胞需要合成多种酶，辅酶和某些中间代谢产物，因此要经历一个调整和适应过程。

9 延滞期的特点 影响延滞期长短的因素 缩短延滞期的方法 2、细胞形态变大或增长； 3、细胞内的RNA含量增高； 4、合成代谢十分活跃；
1、生长速率常数为零； 生长速率常数R：指细胞每小时的分裂次数 2、细胞形态变大或增长； 3、细胞内的RNA含量增高； 4、合成代谢十分活跃； 5、对外界不良环境反应敏感。 影响延滞期长短的因素 1.菌种特性； 2.接种龄； 3.接种量； 4.培养基成分 缩短延滞期的方法 1、接种对数生长期的菌种，采用最适菌龄； 2、加大接种量； 3、用营养丰富的天然培养基等。

10 （二）指数期 指数期的特点 1、活菌数和总菌数接近 2、生长速率常数最大，代时(generation time，G)最短
3、细胞进行平衡生长，细胞的化学组成及形态， 生理特性比较一致 4、酶系活跃，代谢旺盛 该期的微生物生产中多被用做种子和科学试验材料

11 （三）稳定期 稳定期的特点 1、生长速率常数R等于零，活菌数达到最高峰， 并保持相对稳定。 2、微生物细胞内代谢物积累达到最高峰。
3、芽孢杆菌这时开始形成芽孢。 4、这是产物（菌体或与菌体生长相平行的代谢 产物）的最佳收获时期。

12 稳定期到来的原因 1、营养物尤其是生长限制因子的耗尽 2、营养物的比例失调 3、有害代谢产物的积累 4、pH值等理化条件不适宜

13 （四）衰亡期 衰亡期的特点 1、微生物死亡数大于增殖数，活菌数大大减少， 群体衰落 2、细胞出现多形态,大小不等的畸形,变成衰退型
3、细胞死亡,出现自溶现象。 4、有的微生物在此期合成或释放次生代谢物。 5、芽孢杆菌在此期释放芽孢。