细胞工程实验 齐迎春 Email yingchunqi@mail.hzau.edu.cn 谢婷婷 Email tingtingxie@yahoo.cn.

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1 细胞工程实验 齐迎春 Email yingchunqi@mail.hzau.edu.cn 谢婷婷 Email

2 实验总体要求 实验学时数：20学时 总体要求： 理解并观察细胞全能性。
在实验操作上掌握细胞工程技术中的核心，无菌操作技术以及通过一定的实验技巧控制培养的技术。 通过实验观察、结果分析初步学会本领域的实验设计、实验分析及其完整实验论文的撰写。

3 实验课注意事项 按照课表安排时间进行实验，不得随意调课； 实验课不得缺课； 实验过程必须有详细记载；
遵守实验室管理，爱护实验仪器和一切用具； 每次实验结束后，个人使用的物品须自己清洗干净； 班长负责安排值日生做好清洁卫生。

4 实验课总体安排 实验1 实验技术概览 培养基的配制 实验2 实验4 实验5 愈伤组织诱导 植物脱毒 茎尖剥离 实验3 分化及其植株再生
人工种子制备 与论文撰写 植物脱毒 茎尖剥离 实验3 实验技术概览 植物离体 操作技术

5 实验成绩的记录方法 平时操作和实验记录记做平时成绩 实验论文撰写记做期中成绩 以上两个成绩占《细胞工程》课程的40%

6 一、培养基配制

7 愈伤组织诱导培养基配制 培养基配方： MS + BA 2mg/L + NAA 2mg/L 附加：蔗糖20g/L，琼脂8g/L

8 培养基母液配制 按附表配方配制MS培养基母液：大量元素配20×，微量元素和其它成分配制成200×，母液贮存于4℃的冰箱中。

9 MS培养基母液配制 成 分 1L母液用量（mg/l） 大量元素（ 20×） NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O
成 分 1L母液用量（mg/l） 大量元素（ 20×） NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4 33000 38000 8800 7400 3400 微量元素（ 200×） KI H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 166 1240 4460 1720 50 5 维生素（200×） 烟酸 VB1 VB6 100 20 肌醇 （200 ×） 2000 铁盐*（200×） FeSO4·7H2O Na2·EDTA·7H2O 5560 7460 甘氨酸 400

10 实验操作 每4个学生一组，配制500ml愈伤组织诱导培养基 向容量瓶中顺序加入培养基母液： 大量元素（20X） 微量元素（200X）
BA和NAA （250X） 加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水(约400ml)，加入10g蔗糖后搅拌使其溶化，用0.5N的NaOH和0.5N的HCl调整pH至 。 加入4g琼脂，将烧杯置于电炉上，搅拌加热使琼脂完全溶化，然后用蒸馏水定容至终体积500ml，继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中。 分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力1.1kg/cm2，灭菌时间20min.左右。灭菌后的培养基置于无菌室保存备用。 25ml 2.5ml 各2.5ml 各2.0ml

11 影响培养基凝固的因素 pH 琼脂的用量 琼脂溶化程度

12 本实验注意事项 所有用品（量筒/三角瓶/瓷杯/注射器）使用前无须清洗，用完以后及时清洗 大量元素（25ml）用量筒量取
其他试剂（2.5ml or 2.0ml）使用移液管，注意一种溶液用一根移液管，不可混用以防溶液交叉污染 琼脂要充分煮沸，要求边煮边用玻棒不断搅动，以防琼脂糊底，煮沸3-5次直至溶液透明 培养基分装使用注射器，每瓶分装18ml，注意不要粘在瓶口，如不小心粘上，应用草纸檫拭干净 新皮筋封口只缠两圈

13 观察污染等各种情况并洗瓶（按组打分）