第四节 精液的稀释 精液稀释，是往精液中加入适宜精子体外存活并保持受精子能力稀释保护液。只有经过稀释的精液，才适于保存、运输及输精等。所以，精液稀释处理是动物人工授精中的一个重要技术环节。精液稀释的目的，在于扩大精液的容量，延长精子的存活时间，增强受精能力，增加受配母畜头数，充分提高优良种公畜配种效率。

Presentation on theme: "第四节 精液的稀释 精液稀释，是往精液中加入适宜精子体外存活并保持受精子能力稀释保护液。只有经过稀释的精液，才适于保存、运输及输精等。所以，精液稀释处理是动物人工授精中的一个重要技术环节。精液稀释的目的，在于扩大精液的容量，延长精子的存活时间，增强受精能力，增加受配母畜头数，充分提高优良种公畜配种效率。"— Presentation transcript:

1 第四节 精液的稀释 精液稀释，是往精液中加入适宜精子体外存活并保持受精子能力稀释保护液。只有经过稀释的精液，才适于保存、运输及输精等。所以，精液稀释处理是动物人工授精中的一个重要技术环节。精液稀释的目的，在于扩大精液的容量，延长精子的存活时间，增强受精能力，增加受配母畜头数，充分提高优良种公畜配种效率。

2 精液稀释液中加入的糖类，一般常用的有果糖、葡萄糖、乳糖和蔗糖等，这些糖类主要作用是提供精子营养，补充精子能量。
一、稀释液中各种成分及作用 （一）糖类 　 精液稀释液中加入的糖类，一般常用的有果糖、葡萄糖、乳糖和蔗糖等，这些糖类主要作用是提供精子营养，补充精子能量。

3 （二）缓冲物质 以利于精子的存活，如磷酸二氢钾、磷酸二氢纳、碳酸氢纳等盐类。近年来还常用一些有机缓冲物质，如三羟基甲基甲烷（Tris）简称三基，及乙二胺四乙酸二钠（EDTA）等。

4 （三）蛋黄和奶类 在稀释液内加入一定量的蛋黄和奶类(包括鲜全乳、脱脂乳或纯奶粉)。这些物质具有调节渗透压、降低精液中电解质浓度、保护精子膜等作用，有利于精子存活。同时对精子也具有防冷抗冻的作用，这是因为卵黄和奶类中所含的卵磷脂，其熔点比精子内的缩醛磷脂低，这样卵磷脂进入精子体内后，可以代替缩醛磷脂，在低温下不易冻结，从而保护精子的生存。此外，脂蛋白以及含磷脂的脂蛋白复合物也具有防止冷休克的作用。

5 （四）抗冻害物质 一般多采用甘油和二甲基亚砜（DMSO）等，这些物质常被加入精液稀释液内。由于精液在冷冻或解冻过程中，精子内外环境的水分，必将经历液态和固态的转化过程，这物质转对精子的存活及为有害。而抗冻保护物质则有助于减轻或消除这种危害。

6 （五）抗生素 在精液稀释液中必须加入一定量的抗生素，如：青霉素、链霉素、卡那霉素、林肯霉素、多粘菌素、氯霉素等。在家畜人工授精过程中，各个环节即便在严格的操作下，有时精液也难免受到某些有害微生物的污染。在精液内加入抗生素的目的，就是达到保护精子的抗菌效果。在精液稀释液中加入抗生素，是抑制精液内细菌繁衍的一种常规方法。

7 （六）添加剂 １.酶类：如过氧化氢酶，它能分解精子代谢过程中产生的过氧化氢，消除其危害，有利于维持精子活率。加入β-淀粉酶具有促进精子获能，提高受胎率活率的作用。 2.激素类：添加催产素、前列腺素等，可促进母畜生殖道的蠕动，加快精子向受精部位运行，从而提高受胎率。 3 .维生素类：维生素B1、维生素B2、维生素C等，有利于精子存活。其他添加成分如CO2、乙酸、植物汁等，可降低精液稀释液的pH值，有助于精子常温保存。

8 二、稀释液种类 （一）现用稀释液 适用采集的鲜精液经稀释后立即输精。此类稀释液常以等渗糖类或奶类，也可用生理盐水。 （二）常温保存稀释液
适用于室内短期常温保存，具有pH值较低的特点。也有用含明胶的稀释液。

9 （三）低温保存稀释液 适用于精液低温保存，其成分较复杂，除含有糖类、卵黄外，还有甘油或甲基亚砜等抗冻害物质。 （四）冷冻保存稀释液 用于精液的冷冻保存，含有二甲基亚砜、甘油等抗冻物质。

10 精液稀释液的种类很多，但选择何种稀释液配方，应根据动物的种类、不同个体、保存方法、应用效果以及配方成分是否容易得到而定。一般现用现配。
三、稀释液的配制

11 （一）各种成分的准备 １.蒸馏水 应现用现制或应用灭菌蒸馏水，最好采用灭菌的双馏水。如果无蒸馏水，也可用离子交换水或冷却沸水代替。但沸水应在冷却后用脱脂棉和滤纸过滤2～3次，而使用沸水时应经精液保存试验后，证明对精子无不良影响后方可利用。

12 ２.化学药品 所用糖类和盐类等物质，一般应采用化学分析纯的药品，配制时称量要准确，待药品充分溶解后经过滤，密封后进行消毒（隔水煮沸消毒、蒸汽或高压灭菌消毒）。在消毒过程中应缓慢加热，以防玻璃容器爆裂

13 ３.奶类 所用的奶类（包括全奶和脱脂奶、纯奶粉或脱脂奶粉等）必须是新鲜的，而且不应含其它物质如糖、果汁、微量元素或其他添加剂等，以防影响精液的渗透压，影响精子的存活。将一定量的鲜奶或充分的奶粉溶液，经过滤后，再置于92℃～95℃的水中进行10min灭菌，取出降温去奶皮后备用。

14 ４.卵黄 取卵黄方法，是用最新鲜的鸡蛋，先将外壳洗净擦干，再用75%酒精消毒外壳，待酒精挥发后，轻轻破壳，尽量除去蛋清，再用灭菌注射器刺破卵黄，或者将卵黄倾倒于灭菌的滤纸或玻璃平皿内，以灭菌镊子挑破卵黄膜，轻轻倾出卵黄入灭菌量杯内，但注意不可混入蛋清和卵黄膜。

15 ５.抗生素 常用抗生素为青霉素钾盐和双氢链霉素。抗生素必须在灭菌稀释液冷却后方可加入，氨苯磺胺也是一种常用的抗菌物质，将其溶于少量蒸馏水中（用量要计入总量），单独加热至80℃，待完全溶解后加入稀释液内。一般用量为每毫升稀释液内，加入青霉素500～1000IU、链霉素500～1000mg氨苯磺胺的用量占稀释液的0.3%。

16 1.配制稀释液所用的一切量具及物品，事先均应彻底清洗、严格消毒。
（二）配制稀释注意事项 1.配制稀释液所用的一切量具及物品，事先均应彻底清洗、严格消毒。 2.精液稀释液必须新鲜，为此应现用现配。如有条件可将灭菌的稀释液，置入冰箱内保存数日。但卵黄、抗生素、奶类等成分，应在临用时现加入。

17 四、精液的稀释倍数 精液的适宜稀释倍数与家畜种类及稀释液种类有密切关系。确定精液的适宜稀释倍数应取决于：家畜精液的质量；输精的要求；稀释液种类及其对精子存活时间的检测结果等。

18 五、精液的稀释方法 精液稀释应在采集后尽快进行，不经稀释的精液不利于精子存活。特别是精液处理室温度较低时（20℃以下），精子受低温打击，易出现冷休克（freezing shock）。为此，要求在采精时，当外界气温较低的情况下，应注意集精杯的温度，使采出的精液维持在30℃左右，同时将采精的精液迅速置入30℃环境中存放，以利精子不受低温影响。一般最好在0.5h内稀释。

19 　 对采集的新鲜精液尽快进行精液品质检测，如精子活率及精子密度等指标，以便确定精液的稀释倍数。稀释前，必须调整稀释液的温度与精液温度一致。一般是将精液和稀释液处于同一温度（30℃左右）条件下，待预热后进行稀释。 稀释方法是按确定的稀释倍数，将一定量的稀释液沿瓶壁或沿插入的灭菌玻璃棒，缓慢倾入精液瓶内，轻轻搅匀，勿剧烈震荡。若稀释倍数大，应先低倍后高倍，分几次进行稀释。以防精子环境突然改变，造成稀释打击。精液稀释均匀后，随即取出一滴稀释精液，镜检精子活率。若出现活率下降，说明稀释液或稀释处理不当。 　

20 第五节 精液的液态保存 精液保存的目的：　 　　是为了延长精子的存活时间并维持其受精能力，便于长途运输，扩大了利用围增加受配母畜头数，提高优良公畜的配种效能。 精液保存方法：按精液保存时的物理状态，可分为液态和固态保存两种。 精液保存途径：基本是通过抑制精子代谢活动，降低能量消耗及适于生存的环境途径，来延长精子存活时间并维持其受精能力。

21 一、常温保存 常温保存是将精液保存在室温（15℃～25℃）条件下，允许温度有一定的变动幅度，因此又称变温保存或室温保存。常温保存时不需要特殊设置，便于普及。适用于各种家畜精液的短期保存，尤其适用猪的全份精液保存。

22 （一）精液常温保存原理 精子在弱酸性环境中活动被抑制，减少活动、降低消耗，一旦pH值恢复倒中性，精子即可复苏。因此，在精液稀释液中加入弱酸类物质，创造一定范围的酸性环境，来抑制精子的活动，或用明胶环境阻止精子运动，来减少其能量消耗并维持其授精能力，使精子处于可逆性的静止状态中加以保存。

23 为使稀释液达到所需要的适合酸性环境，一般用下列方法调节： 　　1．向稀释液内充入一定量的洁净CO2气体，可行碳酸，变为弱酸形溶液。 　　2．利用精子在自身代谢过程中长生的弱酸性环境。 　　3．向稀释液内加入酸类物质，如已糖稀释液（caprogen）及一些植物酸汁。

24 １.牛精液常温保存稀释液主要有IVT液， （二）常温保存用的稀释液
基础液：二水柠檬酸纳 2g、碳酸氢纳0.21g、氯化钾0.04g、葡萄糖0.3g、氯苯磺胺0.3g、蒸馏水100ml 稀释液：基础液90ml、卵黄10ml、青霉素1000IU/ml、双链霉素1000μg/ml．

25 ２.猪精液常温保存稀释液。目前生产上常用的稀释液配方有： 　　（１）奶－卵稀释液 鲜牛（羊）奶100ml　卵黄8ml　青霉素20万IU 鲜奶需经92℃～95℃水浴消毒20min，等温度降至40℃，加入卵黄和青霉素，混合均匀。 　　（２）奶－糖－柠稀释液 鲜牛（羊）奶30ml　5%葡萄糖30ml　2.9% 柠檬酸钠30ml　卵黄10ml　青霉素 20万 IU 鲜奶消毒方法同上。 　　（３）葡－柠稀释液 葡萄糖5g　柠檬酸钠0.3g　 EDTA钠0.1g　蒸馏水加至100ml

26 3.绵羊精液常温保存稀释液配方： 奶类稀释液（取自健康母牛、母羊的新鲜奶），经水浴（92℃～95℃）消毒15min，降温至40℃以下，加入青霉素10～20万IU/100ml。葡－柠－卵稀释液 葡萄糖3g　柠檬酸钠1.4g 蒸馏水加至100ml。卵黄20ml 青霉素 10万IU 。

27 （三）常温保存方法 将稀释后的精液，密封，用纱布或毛巾包好，至于室内避光处15℃～25℃温度环境中存放，若夏季室温较高，可在室内挖一个0.5cm左右的小地窖存放。

28 二、低温保存 各种动物的精液，均可进行低温（0℃～5℃）保存，一般比常温保存时间长。

29 （一）精液低温保存原理 精子在弱酸性环境中活动被抑制,精子随着温度的缓慢下降，其代谢机能和活动力逐渐减弱,当温度降至0℃～5℃则呈现休眠状态，利用低温能抑制精子活动，降低其代谢和能量消耗，同时也能抑制微生物生长，在精液内加入营养及抗低温物质，隔绝空气，就可延长精子存活时间，精液在低温保存一定时期内，当温度回升后精子又逐渐恢复正常代谢机能并维持其受精能力。

30 （二）低温保存用的稀释液 1.牛精液低温保存稀释液 　　二水柠檬酸钠1.4g，葡萄糖3g，加蒸馏渴100ml制成基础液，取80%基础液和20%卵黄再加上1000IU/ml青霉素和1000μg/ml双氢链霉素制成稀释液。

31 2.羊精液低温保存稀释液 （１）绵羊精液低温保存稀释液，其配方为：10g奶粉加100ml蒸馏水配成基础液，取90%基础液和10%卵黄再加上1000IU/ml青霉素和1000μg/ml．双氢链霉素制成稀释液。 （２）山羊精液低温保存稀释液，其配方为： 基础液：葡萄糖0.8g，二水柠檬酸钠2.8g，加蒸馏水100ml。 稀释液：基础液，80%；卵黄20%，青霉素1000IU/ml，双氢链霉素1000μg/ml。

32 3. 猪精液低温保存稀释液，其配方如下： 基础液：二水柠檬酸钠0
3.猪精液低温保存稀释液，其配方如下： 基础液：二水柠檬酸钠0.5g、葡萄糖5g加蒸馏水至100ml。 稀释液：基础液97%，卵黄3%，青霉素1000IU/ml，双氢链霉素1000μg/ml。

33 （三）低温保存前的精液处理 　1.稀释分装 　　按常规精液稀释液处理方法，将精液用低温保存稀释液按一定比例稀释后， 经缓慢降至室温即可进行分装。分装时通常按发情母畜的一次输精剂量为一头份，分装1瓶。有的家畜输精剂量较小（如羊），可按10～20头份，分装1瓶，每瓶分装后其瓶口密封，再继续缓慢降至低温保存的温度。

34 2. 降温处理 稀释后的精液，为避免精子发生冷休克，必须采取缓慢降低温度方法，从30℃降至5℃～0℃时，其降温速率应以每分钟下降0
2.降温处理 　　稀释后的精液，为避免精子发生冷休克，必须采取缓慢降低温度方法，从30℃降至5℃～0℃时，其降温速率应以每分钟下降0.2℃左右为宜，整个降温过程大约需1～2h完成。一般缓慢降温的具体处理方法，可将分装好的精液瓶，外用数层纱布或毛巾包缠好，在装入塑料袋，放在0℃～5℃冰箱内，也可将分装好的精液瓶放入30℃温水杯内，一起置入冰箱内，约经1～2h，精液温度降至0℃～5℃。

35 3.低温保存方法 　　最普通的方法是将精液瓶置入冰箱内的0℃～5℃格层上存放。应指出不论用何种低温保存法，都必须缓慢降温，低温保存的温度要求恒定，不可忽升忽降。
　4.低温保存精液利用 　　低温保存的精液在输精前取出，要进行升温处理，即将保存的精液瓿直接投入30℃温水升温，其升温的速率大小对精子复苏影响较小。当精液升温30℃时，擦干瓶上附着的水，再启开瓶口吸入输精器内待输精。

36 第六节 精液的冷冻保存 一、意义 （一）充分发挥优良种公畜的配种效能。 （二）制作冷冻精液适用于现代化自动生产
（三）精液冷冻保存便于家畜引种，促进各国和地区之间的种畜精液交流 （四）加快家畜的杂交改良和育种工作 （五）有利推动家畜繁殖新技术在生产上的应用 （六）建立动物精液基因库

37 二、原理 将精液特殊处理后，保存在超低温下，使 精子代谢活动受到抑制，处于生命相对静止状态，长期保存下来。一旦升温精子又能复苏并维持其原来的受精能力。 冰晶化是水在降温过程中的一定温度下，水分子重新按几何图形排列形成冰晶。冰晶可造成精子内部结构的机械损伤。精子外围溶质浓度和渗透压增高，引起细胞内脱水、原生质变干、酸碱度失去平衡，最后导致精子发生不可逆的变化而死亡。

38 一般精液内含85%～95%的水分，精子内也含有极少量的水分，这些水分在降温过程中在-0
一般精液内含85%～95%的水分，精子内也含有极少量的水分，这些水分在降温过程中在-0.6℃～-60℃温度区内缓慢降温能形成冰晶。降温速率越慢，所形成的冰晶越大，其中特别以-15℃～-25℃时冰晶形成最多。在冷冻精液过程中只有避开这个有害温度区，才能得以长期保存。

39 玻璃化是水在超低温度下，水分子仍然保持原来自然的无次序状态所呈现玻璃样的超微结晶均匀冻结。精子在玻璃化冻结状态下，不会发生细胞脱水，仍维持原来的正常结构，这样精子解冻后才能得以复苏和活动。玻璃化的形成也是有条件的，即只有急速降温在-60℃～-250℃的超低温度区（玻璃化温度）下才能形成。这样使水分快速越过有害温度区还来不及形成冰晶或只形成极小的冰晶而直接进入超低温区形成玻璃化冰结，此时精子也同样形成玻璃化冻结，才能长期保存。

40 三、冷冻保存稀释液 （一）牛精液冷冻保存稀释液
　1.细管 　　a.基础液2.9%柠檬酸钠100.0ml，卵黄10.0ml； 　　稀释液：取基础液41.75ml加果糖2.5g甘油7.0ml。 　　b.脱脂牛奶83.0ml，卵黄10.0ml，甘油7.0ml。 2.颗粒 　　a.12.0%蔗糖液75.0ml，卵黄20.0ml甘油5.0ml。 　　b.11%乳糖液75.0ml卵黄20.0ml甘油5.0ml。 　　c.2.9%柠檬酸钠73.0ml卵黄20.0ml甘油7.0ml。

41 （二）羊精液冷冻保存稀释液 颗粒 基础液：糖乳10g加蒸馏水100ml。 稀释液：取基础液72.5ml，卵黄25ml，甘油3.5ml加入100IU/ml青霉素和1000μg/ml。双青链霉素。

42 （三）猪精液冷冻保存稀释液 颗粒 基础液 ：葡萄糖8g、蒸馏水100ml。 稀释液： 取基础液77ml、卵黄20ml，甘油3ml，青霉素100IU/ml、双青链霉素1000μg/ml。

43 四、精液冷冻保存的常规步骤 各种家畜精液冷冻保存技术中在牛已经形成一整套定型技术程序，即采集精液的品种检查、精液稀释、分装、降温与平衡、冻结、解冻于检查，最后保存与运输。现将牛精液冷冻技术程序各环节简述如下：

44 （一）精液的质量检查 　 将新鲜的精液置于30℃环境中，迅速正确检查每天种公畜精液品质，其品质优劣与冷冻效果密切相关，牛冷冻精液国家标准要求新鲜，精子活率（下限）65%，精子密度(下限)8亿/ml，精子畸形率（上限）15%。

45 （二）精液稀释 1.一次稀释法 按常规稀释精液的要求，将精液冷冻保存稀释也按比例一次加入。 2.两次稀释法 精液冷冻前两次稀释是为了减少甘油对精子的损害作用，采用两次稀释法冷冻效果较好，但操作较为繁琐，常用于细管、安瓶的冷冻精液。两次稀释法的处理，一般将采集的精液先用不含甘油的基础稀释液至最终稀释倍数的一半，经1h缓慢降温至5℃，然后再用一次或两次加入或缓慢滴入等方法。经稀释的精液应取样检查测其精子活率，要求不应低于原精液的精液精子活率。

46 冷冻精液的分装，一般采用颗粒、细管和安瓶三种方法，亦称剂型。
（三）精液分装 冷冻精液的分装，一般采用颗粒、细管和安瓶三种方法，亦称剂型。 无毒塑料细管，这是目前采有的较为理想的方法，自动细管冻精分装装置可一次完成灌封和标记。

47 （四）降温和平衡 1.降温 　　为了使精子免受低温打击造成的损害，采用缓慢降温的冻前处理，即将稀释后以精液由30℃以上温度，经1h缓慢降温至3℃～5℃，然后在此温度下进行平衡。具体降温处理方法，可将盛装精液的试管或细管封好管口，置于30℃水温的烧杯内，送至冰箱内或盛装精液的试管或细管用6～8层纱布或毛巾过裹好入冰箱内，使精液在冰箱内3℃～5℃环境中进行降温平衡。

48 2.平衡 　　是指将经缓慢降温后的精液，放在一定的温度下预冷适应低温，经历一定时间，经过平衡处理后的精液可增强冻结效果，其机理未清楚。有关平衡处理的温度和看法也尚未统一，欧美各国通常为4℃～5℃，前苏联多主张在0℃，还有人主张-5℃下进行。时间是2～4h。我国一般平衡温度为3℃～5℃，降温平衡时间3～4ｈ。

49 （五）精液冻结 精液冻结方法，按采用的冷源有两种，干冰即固体二氧化碳（-79℃）埋藏法和液氮（-196℃）熏蒸法。 液氮熏蒸法 一般是将液氮盛于广口瓶或广口液氮容器内，在液氮表面上约1～3cm距离，悬置一个铜纱网或其他冻精器材，利用液氮蒸发的冷气（其温度维持在-80℃～-110℃之间）冷却冻精器材和冻结平衡的精液，制作冷冻精液。冷冻过程中的降温速率，是以调节精液与液氮面的距离和时间，来加以控制。

50 1.颗粒冷冻法 先将灭菌的铜纱网（或灭菌铝铁饭盒盖）悬置液氮面上一定距离，使之冷却并维持在-80℃～-110℃（猪的滴冻温度为-75℃～-80℃），或者用经过液氮浸泡5min冷却的灭菌聚氯乙烯塑料板，飘浮液氮面上。然后迅速将平衡后的精液按剂量整齐地滴于网（板）上，停留5min熏蒸冻结，当精液颜色变白时浸入液氮内，最后将镜检合格的颗粒冻精，收集在有标记的灭菌纱布代内每以包装量50或100粒，移入液氮内保存。

51 2.细管、安瓶精液冷冻法 其法与颗粒冷冻相似，将经平衡的细管，安瓿精液，平铺摆放在铜纱网上，停留约5～10min左右冻结，最后将合格的冻精移入液氮内贮存。目前国内有些大型种公牛站使用电脑程序控制降温速冻装置，可根据需要安排程序，自动控制精液的降温速率，具有很好的冷冻效果。在制作冷冻精液过程中，动作要快而准，严格控制好精液冻结的降温速率，以求达到最佳的冻结效果。此外还应每冻一批冷冻精液，必须随机取样检验，只有合格的冷冻精液才能作长期贮存。

52 （六）解冻与检查 1.解冻 　　解冻是利用冷冻精液的一个重要环节。解冻温度有三种：低温冰水解冻（0℃～5℃ ）、温水解冻（30℃～40℃）及高温水解冻（50℃～70℃）等，其中畜牧生产上通常采用温水解冻，取得较好的效果。

53 颗粒冷冻精液解冻：将颗粒冻精置预热至40℃的1.0ml解冻液的试管重水浴解冻，使冻精基本融化。
牛颗粒冻精解冻液的配方为：a、2.9%柠檬酸钠溶液。b、葡一柠溶液 葡萄糖3.0g 柠檬酸钠1.4g蒸馏水加至100ml、复方蔗柠溶液 蔗糖1.15g氨苯磺胺0.3g 蒸馏水加至100ml。解冻精液不宜在保存，最好尽快使用。 细管、安瓶冷冻精液解冻，方法简便快，即将其直接投入37℃的温水中，待管（瓶）内精液基本融化时，可取出备有。

54 家畜冷冻精液的解冻注意事宜： （１）精液宜临用时现解冻，立即输精。解冻后至输精之间的时间，最长不得超过1～2h。 （２）解冻时，事先预热好解冻试管及解冻液，在快速由液氮容器内取出1粒（支、瓿）冻精，冷冻精液尽快融化解冻。 （３）在解冻中切忌精液内混入水或其他不利精子生存的物质，同时避免有害气味等影响。 （４）解冻时要恰当掌握冷冻精液的融化程度，不能时间长，精液温度过高，影响精子的受精能力。 （５）在必要的情况下需要冷冻精液解冻后做短时间保存时，应采用含卵黄的解冻液，以10℃～15℃水温解冻，逐渐降到2℃～6℃环境中保存。

55 ２.检查 冷冻精液质量的检查，一般是在解冻后进行，其主要指标有：精子活率、精子密度、精子畸形率及顶体完整率和存活时间等。其中精子活率要求任何动物的冷冻精液，均应在0.30以上，其他指标应符合各种家畜冷冻精液的输精要求，方可用于配种，否则弃之。

56 （七）冷冻精液保存与运输 １.冷冻保存 冷冻精液的保存，将经抽样检验合格的各种剂型的冷冻精液，分别包装妥善并做好标记（站名、家畜品种、种畜号、冻精日期、剂型批号、精子活率、数量等），置入具有超低温的冷源（干冰或液氮）内长期保存备用。保存过程中，必须使保存温度恒定，精液品质不变，才能达到冷冻精液长期保存的目的。

57 （１）干冰保存法：将冷冻精液，按畜种、品种和畜号分别有序地置入盛装干冰的保温箱内，摆放整齐，以干冰埋严（最少深5cm以下）不得外露即可。要经常检查，及时补充干冰。
（２）利用液氮保存法：将各种家畜冷冻精液，按畜种、品种（不同品种的颜色标记）畜号、剂型、制作冻精批次，分别有秩序地装在各个小提筒内，并在提筒的柄端标记清楚。使提筒及其内冻精共同放入液氮容器里，始终浸入液氮内长期保存即可。对纱布袋装的颗粒冻精，也可用长线绳拴系直接吊入罐里液氮内，不用提筒。

58 ２.冻精运输　 冷冻精液的运输，应有专人负责，办好交接手续，附带运精单据。一般用液氮容器盛装冻精运输，运输之前液氮容器内充满液氮，其容器外围应有保护套，装卸时要小心轻拿轻放。装在车上要安放平稳并拴牢固，严防撞击和倾倒。切不可斜放和叠放或压入其他物品。运输途中要避免暴晒和强烈震动，如长途运输在途中要及时补充液氮。

59 第七节 人工输精 输精是将一定量的合格精液，适时而准确地输入到发情母畜的生殖道内适当部位以达到妊娠为目的操作技术。这是家畜人工授精的最后一个环节，又是保证获得较高的受胎率的关键。在输精操作技术中应严格遵守家畜人工授精技术规程，增强无菌观念，积极采取各种措施，提高家畜人工授精的受胎率。

60 一、输精前准备 (一)输精器材的准备 各种输精用具在使用之前必须彻底洗净消毒，用灭菌稀释液冲洗。输精管以每头母畜一支为宜。

61 运用输精的精液，必须符合各种家畜输精所要求的精量、精子活率及有效精子数等。
（二）精液的准备 运用输精的精液，必须符合各种家畜输精所要求的精量、精子活率及有效精子数等。

62 （三）母畜的准备 经发情鉴定确定需要配种的母畜，在输精前应适当实行站立保定；母畜保定后，将尾巴拉向一侧、对阴门及会阴部进行清洗消毒，即先用清水洗净，再用消毒液涂擦消毒，后用灭菌生理盐水冲洗，最后用灭菌布擦干。

63 输精人员要身着工作服，其手指甲剪短磨光，手洗擦干后以75％酒精消毒，完全挥发干再持输精器。
（四）输精人员的准备 　输精人员要身着工作服，其手指甲剪短磨光，手洗擦干后以75％酒精消毒，完全挥发干再持输精器。 带上长臂乳胶或塑料薄膜手套涂以灭菌稀释液以便润滑。

64 二、各种家畜输精要求和方法 （一）牛输精要求和方法 1.牛冷冻精液输精要求 （１）适宜输精时间：发情开始后10～12h。
　1.牛冷冻精液输精要求 （１）适宜输精时间：发情开始后10～12h。 （２）输精部位：子宫颈深部或子宫体内。 （３）输精量：0.25～1.0ml。 （４）输入有效精子输：0.1亿～0.12亿。 （５）输精次数：1～2次。 （６）输精间隔时间8～10h。

65 2.牛冷冻精液输精方法 采用直肠把握输精法：输精人员一支手臂带上长臂乳胶或塑料薄膜手套伸入直肠内，排出宿粪后，先握子宫颈后
端；另一支手持输精 器插入阴道，先向上 再向前，输精管前端 伸至宫颈外口，在两 只手协同动作时输精 管经螺旋状的子宫内 腔，其管前端达到子

66 宫颈内口或子宫体内注入精液。输精是要做轻插、适深、缓注、慢出，防止精液倒流。此法特点：用具简单，操作安全，母牛
无痛感，初配牛也适用， 输精部位较开膣器法深， 受胎率高。此外直检同时 做妊检，避免误配而造成 流产。

67 （二）羊的输精要求和方法 1.羊的输精要求 （１）适宜输精时间：发情开始后10～36h。 （２）输精部位：子宫颈外口。 （３）输精量：0.05～0.10ml（液态）；0.1～0.2ml（冻态）。 （４）输入有效精子数：0.7亿（液态）；0.5亿～0.7亿（冻态）。 （５）输精次数1～2次。 （６）输精间隔时间：8～10h。

68 2.羊的输精方法 一般采用开膣器输精法。即以手持开膣器扩开阴道，借助光源（手电筒或额灯），寻找子宫颈外口，然后用另一只手持输精管插入子宫颈口内深部，缓慢注入精液。

69 　 给羊输精，插入阴道内的输精管，先以其管的前端拨开子宫颈外口的上下2片或3片突出皱襞，再将输精管前端轻轻插入子宫颈外口内，直到不能前进为止，再注入精液。配种后的母羊要稍停留1～2min有利于精子的正常运行，同时在羊背上涂着有色标记，再放走羊只。

70 （三）猪的输精要求与方法 1.猪的输精要求 （１）适宜输精时间：发情后19～30h，或接受“压背试验”，过后8～12h。 （２）输精部位 子宫体内。 （３）输精量 30～40ml。 （４）输入有效精子数 10亿以上。 （５）输精次数 1～2次。 （６）输精间隔时间 12～16h.

71 2.猪输精方法 对母猪的输精一般采用输精管插入法，即手持输精管插入阴门，先向上再水平，边插入边逆时针旋转，经抽送2～3次，输精胶管一般即可经子宫颈内口达到子宫体内，即可缓慢注入精液。给猪输精时一定要缓慢进行，其时间为3～5min，最好不抽出输精管分2～3次注入精液，否则易发生精液逆流现象，应及时补输精液，以保证受胎率，多产仔猪。