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实验室大型仪器介绍 刘武江博士 北京大学泌尿外科研究所
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总体介绍 IVIS Specturm 主要 原理 应用范围 收费标准 联系方式 网上预约 流式 动物活体成像 前言 酶联斑点 蛋白液相
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总体介绍 冷光 In Vitro 原理 适用范围 In Vivo 荧光 具体应用 操作注意 问题 活体三維影像輸出功能
多螢光分析及自動螢光背景扣除功能 三維立體影像 重建及訊號深度偵測功能。 小鼠動物器官模型套圖及訊號位置分析功能 冷光細胞株，菌株絕對定量分析、量測功能。 螢光細胞株，菌株絕對定量分析、量測功能。 活體動物，植物冷光絕對定量分析、量測功能(In Vivo Bioluminescence quantification) 冷光 In Vitro 荧光 In Vivo 具体应用 适用范围 原理 问题 操作注意 1.完成IPv6技术在物联网感知延伸层的关键技术；2.开发简化IPv6协议栈；3.研制支持 和802.11的IPv6无线传感器节点；4.研制物联网多协议网关样机并实现IPv4/IPv6互通；5.组网测试
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底物及探针
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主要操作界面
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BD Influx BD Influx
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BD Influx特点 强大的检测能力 超高性能的分选功能 安装3个激光器 相对较小的鞘液压力，保持细胞活性 可完全更换的液路，避免细胞污染
新的分选模式，如比例分选模式和位置分选模式
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BD Influx应用 检测： 细胞表面标记，细胞内表达蛋白，细胞凋亡，细胞周期，白 血病的分型，肿瘤细胞染色体的异倍性测定，细菌鉴定，病 毒感染细胞的识别和爱滋病感染者CD4、CD8细胞的记数。 分选： 细胞疗法研究，干细胞研究，药物发现与开发以及转基因细 胞的分选。 应用领域： 免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物 化学，药理学，海洋生物学等。
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荧光补偿
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多功能液相芯片分析系 统 （Luminex技术）
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Luminex技术是在有色微球、激光技术、应 用流体学及高速数字信号处理技术的基础上 发展起来的一种多功能的液相分析平台。
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捕获微球 聚苯乙烯材料，大小均一，直径5.6 um 标记了两种荧光染料，每种染料的浓度有10 个梯度，通过调整两种染料的比例可以获得 100种不同染色的微球 标记了针对检测物的捕获分子作为探针
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缺点：一次实验检测 的细胞因子种类有限 ；不能定量
常见的细胞因子检测方法 PCR 原位杂交 流式细胞术胞内染色 缺点：一次实验检测 的细胞因子种类有限 ；不能定量 ELISA ELISpot 免疫学功能研究 缺点：一次实验只能 检测一种细胞因子
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多功能液相芯片分析系统的优势 同时检测几种甚至十种以上细胞因子 快速鉴定Th1/Th2特异性免疫应答
需要的样本量少（50ul；血清、血浆、培养上 清等） 节省时间和经费
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荧光微球 颜色编码的微球 每种微球的地址由两种红色荧光颜料的掺入比例唯一决定
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红色染料浓度逐渐增大 紫色染色浓度逐渐增大
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检测原理 样本检测区
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液相芯片的应用 免疫学分析 核酸研究 细胞因子检测 受体－配体分析 酶分析 蛋白质－蛋白质相互作用分析 蛋白质－DNA相互作用分子
SNP检测 基因表达谱分析
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Luminex检测体系的组成 Luminex仪器 Luminex 检测试剂 Luminex试剂盒 Luminex 附件
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Luminex检测配套试剂盒 R&D: Fluorokine MAP系列，主要检测各种细胞因 子及MMP系列蛋白
Biosource：各种细胞因子、生长因子系列 Upstate: Beadlyte系列，主要检测细胞因子/趋 化因子、信号转导相关蛋白及激酶的活性 Linco：各种细胞因子和趋化因子检测 Cayman：检测前列腺素E2
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R&D配套Luminex试剂盒 human IFN- g mouse GM-CSF human IL-2 mouse CCL2
human TNF-a human TNF- Human CCL系列 Human VEGF mouse GM-CSF mouse CCL2 mouse IFN-g mouse IL-1 mouse IL-2 mouse IL-4 mouse IL-5 mouse IL-6 mouse IL-10 mouse TNF-a mouse VEGF
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Biosource配套试剂盒 Human/Mouse Th1/Th2 Cytokines Human/Mouse Chemokines
Human/Mouse Inflammatory Cytokines Human/Mouse Growth Factor
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Linco配套试剂盒 人/小鼠/大鼠 Cytokine/Chemokine 疾病相关研究试剂盒： 内分泌（糖尿病、肥胖病、垂体激素等）
脂肪组织分泌代谢 心血管疾病 皮肤疾病 细胞代谢 骨代谢等
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Upstate配套试剂盒 各种总/磷酸化的信号转导蛋白 Human/Mouse/Rat Cytokines
Human/Mouse Chemokines Human Growth factor
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ELISPOT
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ELISPOT检测方法特点 通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体 来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况 在分泌细胞原处捕获该细胞分泌的细胞因子
斑点可持久保存并进行计数分析
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优势 可在单细胞水平检测淋巴细胞对特异性抗原的反应能力 计数特异性抗原刺激下分泌性淋巴细胞产生的比例 有效、快速、灵敏度高
使用高吸附性的专用ELISPOT培养板 细胞因子的检测不易受非分泌细胞的干扰 比传统的ELISA和细胞内细胞因子染色法敏感20-200倍 易操作 样本量大的情况下实验结果可用计算机图象分析系统进行快速、客观的分析
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X坐标：106 APC中实际IFN-γ+T细胞数量
ELISPOT/FACS/ELISA 检测精确度比较 106抗原呈递细胞（APC）中混入特定数 量的IFN-γ+的T淋巴细胞 ，经下列方 法检测： ELISPOT 细胞内细胞因子染色（FACS） ELISA X坐标：106 APC中实际IFN-γ+T细胞数量 Y坐标： 各检测方法的检测结果
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基 本 原 理 Coating Ab 包被培养孔 并经BSA阻断 根据实验设 计加入淋巴 细胞及含或 不含刺激因 子的培养液 孵育
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活化的淋巴细胞可分泌细胞 因子与Coating Ab结合
洗除细胞，依次加入生物素 标记的抗细胞因子抗体及酶 标抗生物素抗体进行反应 加入酶底物显色形成斑点 （SPOT）
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主要用途 B细胞杂交瘤的筛选 化合物和药物免疫学反应的检测 优化树突细胞和T细胞的抗肿瘤活性 靶向疫苗的质控 自身免疫疾病的诊断和预后分析
自身免疫疾病免疫治疗的监控 过敏性疾病的脱敏治疗的监测 器官移植中排斥反应的预测 微量组织、肿瘤和免疫细胞分泌谱的分析 结核病的诊断
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美国CTL公司产品 适用于分析： 酶联斑点(Elispot) 克隆形成（CFU） 病毒斑（Viral Plaque）
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PubMed搜索关键词immunospot或ELISPOT或 ELISA-Spot所得历年文献数目
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Coating Ab 包被培养板 取外周血单核细胞 或脾淋巴细胞 根据实验要求， 培养液中加入 所需刺激物， 预先将所检测细胞
无菌 Coating Ab 包被培养板 取外周血单核细胞 或脾淋巴细胞 根据实验要求， 培养液中加入 所需刺激物， 预先将所检测细胞 孵育24-42小时 40C过夜 0.05%PBS-Tween20(PBST) 洗板5次 每孔加入1%BSA阻断 或者 370C孵育1小时 直接取外周血 脾淋巴细胞 单核细胞或 按实验设计 加入含或不含刺激剂的培养液 及一定数目细胞孵育5-24小时
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去除细胞，加入冰冻去离子水200ul/孔， 培养板置冰上10分钟 PBST洗板10次 加入生物素标记 的detector Ab
非无菌 去除细胞，加入冰冻去离子水200ul/孔， 培养板置冰上10分钟 PBST洗板10次 加入生物素标记 的detector Ab 370C孵育1小时后，PBST洗板5次 加入酶标抗生物素抗体(GABA) 370C孵育1小时后，PBST洗板5次 显微镜下观察至斑点形成， 去离子水清洗培养板 室温干燥后 在倒置显微镜下观察结果 40C暗处混合显色剂I和II, 加入显色剂I/II, 暗处室温孵育20-30分钟
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结果示范
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