Download presentation
Presentation is loading. Please wait.
1
流式细胞仪 分析测试中心 刘萍 2015.11.20
2
汇 报 内 容汇 报 内 容 讲座内容 仪器构造和原理 仪器应用领域 样品准备
3
什么是流式？ 流式细胞术（ Flow Cytometry) 是一种可以快速、准确地检测直线 流动状态中单个微粒的 多项物理及生物学特性并加以定量分析的技 术，同时可以对特定群体进行分选。
4
仪器结构 液流系统光学系统 数据处理 系统
5
仪器结构 laser Laser Sample Nozzle Sheath
6
液流系统 液流车
7
光路系统 荧光 散射光
9
人外周血流式细胞仪双参数散点图
10
荧光信号 自发荧光：样品自身内的物质经激 光照射后发出的荧光，如藻类的叶 绿体， GFP 等。 染料荧光：外源染料经激光照射 后发出荧光， 如 FITC, PI 等。
11
荧光信号的强弱，反映了目标检测物的含量多少 FL-1 直方图 散点图 荧光信号 十字象限区分单阳，双阳区
12
分选
13
分选原理 + - +
14
流式细胞仪的应用举例
15
细胞内 ROS,pH 值，膜电位等生理指标的变化 ab c a - 对照组 b - 低剂量组 c - 高剂量组 1 、药理毒理研究 ROS 检测结果
16
2 、血细胞分型研究 艾滋病检测：患者 CD4/CD8 降低
17
3 、细胞周期和细胞凋亡研究 PI 单染 双染 G0/G1 S G2/M Apotosis
18
4 、微生物、藻类及血 细胞分群研究 海水微型生物分群 血细胞分群
19
5 、藻类，细菌，血细胞等计数研究 绝对计数： 相对计数： 临床血液分析计数白细胞， 淋巴细胞等含量 药物作用后各组细胞数量的相对变化
20
6 、细胞群体单路、多路分选，单细胞分选
21
样 品 准 备 样 品 准 备
22
1 、样品荧光染料染色 （藻类样品含有自发荧光） 1 ） BD 流式细胞仪 Aria I 激光器 488nm 和 633nm ，荧光染料有多 种，选择时要注意染料的最大激发波长选在 488 或 633 附近的以保 证荧光强度。 2 ）多种染料染色时尽量选择光谱 距离远的染料 样品准备
23
3 ）样品绝对计数准备 Trucount 计数微球 4 ） PI 等有毒的荧光染料注意自身防护，不要污染 操作区域。 样品准备
24
2 、样品浓度 动植物细胞，培养的细菌，藻类浓度控制在 10 5 /mL, 样品浓度过大会 出现相反的结果。样品体积 500uL 左右 。（海水样品分析直接上样） 样品准备 随机收集 10000-20000 个微粒 3 、样品过虑 喷嘴 70 μm, 100 μm ，所有样品上机前过 300 目筛网
Similar presentations
