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北京市海淀区疾病预防控制中心 微生物检验科 刘方遥
实验室生物安全培训 北京市海淀区疾病预防控制中心 微生物检验科 刘方遥
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主要内容 生物安全相关法律法规 生物安全防护 感染性物质的运送与接收 实验室检测设备的生物安全及应急处置 www.med126.com
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生物安全相关法律、法规 《中华人民共和国传染病防治法》 《医疗废物管理条例》 《病原微生物实验室生物安全管理条例》
《医疗卫生机构医疗废物管理办法》 《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》 《人间传染的病原微生物名录》 《医疗废物分类名录》 《医疗机构临床实验室管理办法》 《北京市与人健康有关的实验室生物安全事件应急处置工作方案》 《医学实验室安全要求》 《实验室生物安全通用要求》 《北京市与人体健康有关的实验室生物安全事件应急处置工作方案》
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人间传染的病原微生物名录 中华人民共和国卫生部 2006.1.11
人间传染的病原微生物名录 中华人民共和国卫生部
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各级生物安全实验室的个人防护要求 BSL－1实验室 工作人员实验时应穿工作服，戴手套,必要时戴防护眼镜。
离开实验室,必须脱下工作服,留在实验区,不得穿着进入办公区 工作服应定期消毒
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BSL-1
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各级生物安全实验室的个人防护要求 BSL－2实验室 除符合BSL－1的要求外，还应该符合下列条件： 1.在实验室中应穿专用工作服或防护服。
2. 如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室。工作完全结束后方可除去手套。 -- 一次性手套不得清洗和再次使用。 3. 当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行，而必须采取外部操作时，为防止感染性材料溅出或雾化危害，必须使用面部保护装置（护目镜、面罩、个体呼吸保护用品或其他防溅出保护设备）。
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BSL-2
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生物安全防护-穿戴防护用品顺序 实验服 口罩 帽子 防护眼镜 鞋套 第一层手套 防护服 第二层手套 1、大小尺寸 2、N95的合理使用
3、气密性检测 4、用后回收消毒处理
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口罩 www.med126.com www.med126.com
口罩仅可以保护部分面部免受生物危害物质如血液、体液、分泌液以及排泄物等喷溅物的污染 仅适用于一、二级防护中使用 N95 使用者在使用前需试戴、测试
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正确佩戴和卸下外科口罩示意图 www.med126.com www.med126.com
一般在使用时可同时佩戴面罩，以组合使用的方法保护整个面部, 单独使用不能对工作人员提供呼吸保护。 正确佩戴和卸下外科口罩示意图
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口罩-气密性检测 正确佩戴N95口罩 使用要点： 1. 佩戴时选择合适和合格的口罩 2. 遮盖住鼻子、口和下颚
3. 用橡皮筋（松紧带）固定在头部 4. 调整在合适的面部位置并加以检验 5. 吸气时防毒面具应该有塌陷状 6. 呼气时在面具周围不应该漏气
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穿戴防护用品顺序 实验服 口罩 帽子 防护眼镜 鞋套 第一层手套 防护服 第二层手套 1、大小尺寸 2、漏气检查 3、套在防护服外
乳胶手套 1、大小尺寸 2、漏气检查 3、套在防护服外 4、不可重复使用
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穿戴防护用品顺序 实验服 口罩 帽子 防护眼镜 鞋套 第一层手套 防护服 第二层手套 1、大小尺寸 2、防护等级需求
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实验服、防护服 连体防护 隔离衣 实验服
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安全脱卸个人防护装备 考虑要点部位和区域：污染、清洁 口罩 第一层手套 帽子 实验服 鞋套 防护眼镜 防护服 第二层手套 防护服 第一层手套
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防护服 第一层手套 帽子 第二层手套 鞋套 防护眼镜 口罩 实验服
消毒 洗手 防护服 第一层手套 帽子 第二层手套 鞋套 防护眼镜 口罩 实验服 消毒 洗手 所有个人防护装备消毒，放入黄色垃圾袋中集中处理
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样本转运交接中的生物安全 人间传染的病原微生物名录 中华人民共和国卫生部 2006.1.11 www.med126.com
人间传染的病原微生物名录 中华人民共和国卫生部
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感染性物质的运送 良好沟通 充分准备 规范包装 依法运送 目的 种类 事前联系 数量 www.med126.com
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准运证书 规范包装 依法运送 良好沟通 充分准备
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规范包装 依法运送 良好沟通 充分准备
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主容器
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辅助容器（A类）
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外层包装（A类）
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规范包装 依法运送 良好沟通 充分准备 X X X
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感染性物质的接收 环境设施 合理准备 物资器具 双人接收 固定收样室 专用电梯
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勿忘询问 接收和拆封 清洁区内打开外包装 清洁区内做好评价记录 清洁区内完成接收程序
做好防护 清洁区内打开外包装 BSC内打开辅助容器 擦拭消毒辅助容器 清洁区内做好评价记录 清洁区内完成接收程序
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勿忘询问 接收和拆封 清洁区内打开外包装 清洁区内做好评价记录 清洁区内完成接收程序
做好防护 清洁区内打开外包装 BSC内打开辅助容器 擦拭消毒辅助容器 清洁区内做好评价记录 清洁区内完成接收程序
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勿忘询问 接收和拆封 清洁区内打开外包装 清洁区内做好评价记录 清洁区内完成接收程序
做好防护 清洁区内打开外包装 BSC内打开辅助容器 擦拭消毒辅助容器 清洁区内做好评价记录 清洁区内完成接收程序 口罩仅可以保护部分面部免受生物危害物质如血液、体液、分泌液以及排泄物等喷溅物的污染 仅适用于一、二级防护中使用 N95 使用者在使用前需试戴、测试 核对信息
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勿忘询问 接收和拆封 清洁区内打开外包装 清洁区内做好评价记录 清洁区内完成接收程序
做好防护 清洁区内打开外包装 BSC内打开辅助容器 擦拭消毒辅助容器 清洁区内做好评价记录 清洁区内完成接收程序 双方签字，开具接收回执
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勿忘询问 接收和拆封 清洁区内打开外包装 清洁区内做好评价记录 清洁区内完成接收程序
做好防护 清洁区内打开外包装 BSC内打开辅助容器 擦拭消毒辅助容器 清洁区内做好评价记录 清洁区内完成接收程序 终未消毒与实验废物规范处置！
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单位内部感染性物质运送要求 单位内部不同建筑物间感染性物质运送可以使用两层包装系统。（如：病房与病房之间、采样点到实验室以及大楼内部的样品转移。）
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生物安全柜 生物安全柜VS超净工作台 超净工作台提供的是对样品的保护，对操作者和环境是不提供保护的；广义上的生物安全柜同时提供对操作者、环境和样品的保护。所以，从您需要的保护情况上，可以得出正确的选择
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生物安全柜原理等级和种类 原理: 气流原理和实验室通风橱一样，不同之处在于排气口安装有HEPA（高效空气粒子过滤器）过滤器。由前窗操作口向内吸入的负压气流保护人员的安全，而排出的气流须经HEPA过滤来保护环境不受污染。 保护样品 保护实验者 保护环境
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原理等级和种类 等级： 生物安全柜biosefety cabinets 共分为三个级别共六种型号 种类： I级
II级：A1型、A2型、 B1型、B2型 III级
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生物安全柜（BSC）种类 BSC 排气 循环 进风(m/s) 送风(m/s) 排处 连接 Ⅰ 100% 0% 0.38 室外 硬管 Ⅱ A1
室外 硬管 Ⅱ A1 30% 70% 0.4 室内 无 Ⅱ A2 套管 Ⅱ B1 0.5 Ⅱ B2 Ⅲ 不适 均可
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Ⅰ级生物安全柜原理图 Ⅰ级生物安全柜不能保护样品 目前已较少使用 A：前开口， B：可视窗， C：排风HEPA过滤器， D：压力排风系统。
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Ⅱ级生物安全柜 二级生物安全柜是目前应用最为广泛的柜型，是有前窗操作口的安全柜，操造者可以通过前窗操作口在安全柜内进行操作，对操作过程中的人员、产品及环境进行保护。
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Ⅱ级A1型生物安全柜原理图 A：前开口；B：窗口； C：排风HEPA过滤器； D：后面的压力排风系统； E：送风HEPA过滤器；F：风机
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Ⅱ级A2型生物安全柜原理图 70%气体循环使用 30%气体排出，既可以接管道外排，也可以不接管道直接排放在实验室 环境空气 污染的空气
HEPA 过滤的空气 含压的污染空气
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Ⅱ级B2型生物安全柜原理图 “全排” 0% 气体循环利用. 100% 气体外排，适用于P3实验室 环境空气 污染的空气 HEPA 过滤的空气
負压的污染空气
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Ⅱ级B2型生物安全柜
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Ⅱ级B2型生物安全柜
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Ⅲ级生物安全柜 三级生物安全柜是为4级实验室生物安全等级而设计的，柜体完全气密，工作人员通过连接在柜体的手套进行操作，俗称手套箱，试验品通过双门的传递箱进出安全柜以确保不受污染，适用于高风险的生物试验。
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Ⅲ级生物安全柜
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生物安全柜操作 个人防护 使用安全柜时必须穿防护服、戴手套、口罩和帽子，手套应套在防护服的外面。 操作前准备
紫外灯照射30分钟，关闭紫外灯。打开安全柜的日光灯和风机5分钟以上。将实验用品集中消毒擦拭后按从洁净区到污染区的方向摆放。
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生物安全柜操作 理想的工作台摆放原则（清洁——污染区） 干净的物品 废弃物托盘 垃圾袋 被污染的区域
在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行 干净的物品 废弃物托盘 垃圾袋 被污染的区域
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生物安全柜操作 工作时操作规范 双臂垂直缓慢进入前面的开口，在生物安全柜中等待大约一分钟，以使安全柜调整完毕后才可对物品进行处理。
所有操作应在离前窗10cm以外的工作区进行。 废弃物应丢弃在生物安全柜内的处理容器。
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操作注意事项 缓慢移动原则：为了避免影响正常的风路状态，柜内操作时手应该尽量平缓移动。
物品平行摆放原则：为了避免物品和物品之间的交叉污染现象产生，在柜内摆放的物品应该尽量呈横向一字摆开，避免回风过程中造成交叉污染。同时避免堵塞背部回风隔栅影响正常风路。 避免震动原则：柜内尽量避免震动仪器（例如离心机、旋涡振荡器等）的使用，因为震动会使得积留在滤膜上的颗粒物质抖落，导致操作室内部洁净度降低，同时如果在前操作面平衡失败还会引起安全柜对操作者的污染。
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操作注意事项 不同样品柜内移动原则：柜内两种及以上物品需要移动时，一定遵循低污染性物品向高污染性物品移动原则，避免污染性高的物品在移动过程中产生对柜体内部的大面积污染。 明火使用原则：柜内尽量不要使用明火！因为在明火使用过程中产生的细小颗粒杂质将被带入滤膜区域，这些高温杂质会损伤滤膜。无法避免一定需要使用的时候，宜使用低火苗的本生灯或电热灭菌器。
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操作注意事项 工作结束后 要求继续运行安全柜至少3分钟完成净化。柜内物品应使用消毒剂擦拭后才能移出柜外，然后全面擦拭生物安全柜的内壁和台面。等待5分钟后，关闭前窗，关灯，关风机，紫外灯照射30分钟。
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操作注意事项 生物安全柜维护保养 保持生物安全柜表面清洁和无污染状态 用75%酒精或者合适的消毒剂擦拭内壁和工作台面；
如果使用漂白剂等腐蚀性消毒剂后，需要用无菌水再次进行 擦拭除去残余的消毒剂； 定期抬起工作台面对其下面的区域进行清洁； 消毒后，用玻璃清洁器对前窗玻璃和紫外灯进行清洁 定期保养 用湿布擦拭内壁和工作台面。 每年按需要更换紫外灯和日光灯。
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操作注意事项 污染清除 甲醛、过氧化氢熏蒸等方法应由有资质的专业人员来完成。 在以下情况下需要进行熏蒸： 在检查和维修之前；
在更换HEPA滤器之前； 在移动安全柜之前； 安全柜被严重地污染； 变换使用目的； 长时间未用； 需要熏蒸的其它时间。
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应急处置 操作时被针头刺伤、吸入气溶胶、摄入微生物、接触污染物 微生物可通过消化道、呼吸道、损伤或健康皮肤、眼结膜等进入人体
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感染性物质溢洒应急处理程序 1. 启动“微生物实验室生物安全应急预案 ”，设立“生物危害，禁止进入”的标识，即时划定警戒区，封闭实验室。
2.尽快脱掉已污染的防护服、手套、鞋套放入有“生物安全”标识的垃圾袋内封好，注意防止次生污染。 3.用纸巾从外围向中心将溢洒区域覆盖后，由外围向中心倾倒消毒剂，消毒面积至少为污染区面积的二倍。 4.用应急电话如实详细向实验室领导汇报事件进展情况。包括事件涉及病原体类别、发生时间、地点、溢洒面积、暴露人数、原因、已采取的措施等。 5. 撤离实验室。撤离前脱去个体防护装备，将已污染的防护服放入黄色垃圾袋内封好，洗手后关门离开（紫外照射）。
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感染性物质溢洒应急处理程序 6. 实验室负责人应即时通知生物安全员，并告知科内全体人员关注事件、禁入警戒区。
7.实验室主管领导通知保卫科、医务科、感染办、消毒科等相关人员应对事件。 8. 准备相应消毒物品和清理用具。 9.佩戴个体防护装备（鞋、防护服、口罩、双层手套）后进入实验室。需要两人共同处理溢洒物。 10. 使消毒剂与溢洒物混合并作用至少30分钟。 11. 小心由外围向中心收集吸收了溢洒物的纸巾及溢洒物，放到黄色垃圾袋中，破碎的玻璃（锐器）要用镊子夹取到有“生物安全”标识的利器盒，最后反复用新的吸收材料将剩余物质擦净。
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感染性物质溢洒应急处理程序 12.处理的溢洒物以及处理工具（包括收集锐器的镊子等）全部置于专用的收集袋或容器内封好。
13.终末消毒：用消毒剂喷洒或擦拭可能被污染的区域（包括手套、鞋套和防护服前部及肘腕部）。 14.脱去个体防护装备，将暴露部位向内折，置于专用的收集袋中，封好。 15.洗手。 16.填写“实验室暴露事故记录”表。 《北京市与人体健康有关的实验室生物安全事件应急处置工作方案》
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应急处置
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应对突发
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应对突发
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应急物资储备 急救箱：包括常用的伤口处理药品和特殊的解毒剂等 应急电话：安装在缓冲区 房间消毒设备，如喷雾器和甲醛熏蒸器
划分危险区域界限的器材和警告标示 全套防护服（ *连体防护服、手套和头套—用于涉及第一类和第二类病原微生物的事故） 有效防护化学物质和颗粒的全面罩式防毒面具 溢洒处理工具
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谢谢大家！
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