药物分析 第六章 药物的含量测定.

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1 药物分析 第六章 药物的含量测定

2 主要内容 容量分析法 紫外－可见分光光度法 薄层扫描法 气相色谱法 高效液相色谱法 典型药物测定实例

3 第六章 药物含量测定 第一节 药物含量测定方法
第六章 药物含量测定 第一节 药物含量测定方法 药品的含量测定是指准确测定药品有效成分或指标性成分的含量。含量测定是评价药品质量、判断药物优劣和保证药品疗效的重要手段。现行版药典收载的3214种药品中，有1419种涉及到含量测定。 常用的含量测定方法有化学分析法、紫外-可见分光光度法、原子吸收分光光度法、气相色谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法等。

4 一、容量分析法 容量分析法即滴定分析法，是根据一种已知浓度的试剂溶液和被测物质完全作用时所消耗的体积，来计算被测物质含量的方法。 容量分析通常用于测定较高含量或中含量组分，即被测组分的含量一般在1%以上，有时也可用于测定微量组分。容量分析比较准确，测定的相对误差可达0.1%。

5 根据标准溶液和被测物质发生的反应类型和介质的不同，可将容量分析法分为下列几类：
（一）、酸碱滴定法 （二）、沉淀法 (三)、络合滴定法 (四)、氧化还原法 铈量法、碘量法、溴酸钾法、高锰酸钾法、高碘酸钾法及亚硝酸钠法

6 (五)、非水溶液滴定法 1.非水碱量法 （1）非水碱量法原理 某些药物由于在水液中显示的碱性较弱，不能进行酸碱滴定。而在非水介质中，就能显示出较强的碱性，可以顺利地进行。多半在冰醋酸或醋酸中进行滴定，滴定剂多为高氯酸的冰醋酸溶液。一般应用电位法指示终点， 2.非水酸量法 （1）非水酸量法原理 某些药物如羧酸类、酚类、巴比妥类、磺胺类、烯醇类，由于在水溶液中显示的酸性较弱，CKa<10-8，不能进行酸碱滴定。而在非水介质中，就能显示出较强的酸性，用强碱滴定。多半在无水甲醇中进行，滴定剂多为甲醇钠的苯—甲醇溶液。

7 二、紫外－可见分光光度法 1.测定原理 定量分析的理论依据是朗伯-比耳定律。 当一束平行的单色光垂直照射到待测物质的稀溶液时，光中所含有的一部分能量被待测物吸收，其余光则透过溶液，照在检测器上。在一定浓度范围内，待测物对这束光的吸收度（A）与该物质的浓度（c）和液层的厚度（L）（光路长度，即光程）成正比，其关系如下： A = EcL E为吸收系数，其物理意义是当溶液浓度为1%（即1 g / 100 ml），液层厚度为1cm时的吸收度数值，通常用表示。E是个常数。因此，当液层厚度固定不变时，物质的吸收度与其浓度成正比。

8 2、定量分析方法 （1）对照品比较法 对照品比较法按下式计算供试品中被测溶液的浓度： cx为供试品溶液的浓度； Ax为供试品溶液的吸收度； cR为对照品溶液的浓度； AR为对照品溶液的吸收度。

9 （2）吸收系数法 A 为测得的吸收度； 为比吸收系数； W为所称样品的重量，g。

10 三、薄层色谱扫描法 薄层色谱扫描法是指用一束一定波长、一定强度的紫外或可见光对薄层板进行扫描，测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度或斑点经激发后所产生的荧光强度。所得到的图谱及积分数据可用于药品含量测定。 （一）薄层吸收扫描法 测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度的方法 （二）薄层荧光扫描法 测定样品斑点经激发后所产生的荧光强度的方法

11 其中扫描方式有以下几种： （1） 反射法与透射法 反射法是指测定样品斑点对照射光的反射情况进行测定的方法 透射法则是测定照射光穿透样品斑点后光的吸收情况。 （2）单波长和双波长 单波长薄层扫描适合于分离度好，背景干扰小的薄层色谱。双波长薄层扫描时用测定波长和参比波长分别扫描薄层板，测定样品斑点在两波长下的吸收度之差。 （3）线性扫描和锯齿扫描 线性扫描一般采用一束比待测斑点略宽的狭窄光带沿展开方向做单向等速扫描，它适于形状较规则斑点的扫描。锯齿扫描是使用微小正方形光束沿展开方向扫描的同时，在垂直于展开方向进行往复式扫描.

12 四、气相色谱法 （一）概述 1.载气钢瓶（N2）；2.氢气钢瓶；3.空气钢瓶；4.减压阀；5.干燥器；6.稳压阀；7.压力表；8.针形阀；9.转子流量计；10.进样器及汽化室；11.色谱柱（虚线表示恒温室）；12.氢火焰离子化检测器（虚线表示恒温室）；13.微电流放大器，14.记录器

13 （二）定量分析方法 1.外标法 精密称取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密量取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量： cx为待测成分的浓度； Ax为待测成分的峰面积（或峰高）； cR为对照品的浓度； AR为对照品的峰面积（或峰高）。

14 2.内标法加校正因子 精密称取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成测定校正因子所用的对照溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积（或峰高），按下式计算校正因子f： AS为内标物质的峰面积（或峰高）； AR为对照品的峰面积（或峰高）； cS为内标物质的浓度； cR为对照品的浓度。

15 再取含内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分（或杂质）和内标物质的峰面积（或峰高），按下式计算含量：
f为校正因子； Ax为供试品中待测成分的峰面积（或峰高）； AS为内标物质的峰面积（或峰高）； cx为供试品中待测成分的浓度； cS为内标物质的浓度。

16 3.面积归一化法。 取一定量注入气相色谱仪，记录相当于主成分峰保留时间数倍的色谱图，计算各成分峰面积及其总和以及被测组分峰面积总和所占的百分比。用本法测定时，溶剂峰不计算在总面积中。 被测组分％＝（∑Ai／∑A）×100％ 式中，∑Ai为被测组分峰面积之和； ∑A为全部峰面积之和。

17 五、高效液相色谱法 （一）概述

18 HPLC常用的流动相：其主要成分是水、甲醇、乙腈、醋酸铵溶液、磷酸溶液、磷酸二氢铵溶液等。
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶（应用最广泛），常简称为ODS柱或C18柱。除C18外，药典中还用到了苯基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶等。

19 正相色谱是指以亲水性的填料做固定相、以疏水性溶剂或混溶的溶剂做流动相的HPLC类型。
反相色谱是指以强疏水性的填料做固定相、以可以和水混溶的有机溶剂做流动相的HPLC类型。反相色谱最常用的固定相是ODS柱，最常用的流动相是水、甲醇、乙腈等。这一模式在HPLC中应用极广，类似于一种通用型的液相色谱方法。

20 （二）定量分析方法 高效液相色谱法的定量分析方法同气相色谱法。

21 第二节 药物含量测定示例 一、碘量法 《中国药典》（2005年版）收载的用直接碘量法测定含量的原料药和制剂有维生素C及其制剂、二巯丙醇、二巯丙磺钠及其注射剂、安乃近及其制剂等。

22 例6-1 《中国药典》（2005年版）中维生素C的含量测定。
1.测定原理：维生素C具有强还原性，在酸性溶液中可被弱氧化剂碘氧化为去氢维生素C，当维生素C被I2氧化后，微过量的I2可使淀粉指示剂变蓝色，以溶液显蓝色并持续30s不褪为终点。 2.测定方法：取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色在30s内不褪，即得。每1ml碘滴定液(0.1 mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。

23 3.数据处理： 维生素C的百分含量为 c为滴定时碘滴定液的实际浓度，mol/L； V为所消耗碘滴定液的体积，ml； W为样品的重量，g。 若为维生素C片剂时，则维生素C的百分标示含量为 为平均片重，g；

24 二、亚硝酸钠法 例6-2 《中国药典》（2005年版）中盐酸普鲁卡因的含量测定。 1.测定原理。在盐酸酸性条件下，亚硝酸钠液与盐酸普鲁卡因的芳伯氨基定量发生重氮化反应，反应式为： 用永停滴定法指示终点，由消耗亚硝酸钠滴定液的用量计算盐酸普鲁卡因的含量。

25 2. 测定方法。取本品约0. 6g，精密称定，照永停滴定法（2005年版附录ⅦA），在15～25℃，用亚硝酸钠滴定液 (0
2.测定方法。取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（2005年版附录ⅦA），在15～25℃，用亚硝酸钠滴定液 (0.1 mol/L)滴定。每1ml的亚硝酸钠滴定液(0.1 mol/L)相当于27.28mg的C13H20N2O2·HCl。 3.数据处理。 c为亚硝酸钠滴定液的实际浓度，mol/L； 　　　 V为消耗亚硝酸钠滴定液的体积，ml； 　 W为所称样品的重量，g。

26 V为测定时消耗硝酸银滴定液的体积，ml； W为所称样品的重量，g。
三、银量法 例6-3 《中国药典》（2005年版）中氯化钠的含量测定。 1.测定原理 以AgNO3为滴定液，用荧光黄作为吸附指示剂，测定NaCl的含量。 2．测定方法 取本品约0.12g，精密称定，加水50ml溶解后，加糊精溶液(1→50)5ml与荧光黄指示液5～8滴，用AgNO3液(0.1mol/ L)滴定，即得。每1mlAgNO3液(0.1 mol/ L)相当于5.844mg的NaCl。 数据处理 c为硝酸银滴定液的浓度，mol/L； V为测定时消耗硝酸银滴定液的体积，ml； W为所称样品的重量，g。

27 四、酸碱滴定法 例 6-9 《中国兽药典》（2005年版）中乙酰水杨酸（阿司匹林）的含量测定。 1.测定原理。将本品溶于中性乙醇后，以酚酞为指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠液直接滴定。滴定反应式如下： 2.测定方法。取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇(对酚酞指示液显中性)20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠液(0.1mol/L)滴定。每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4。

28 3.数据处理。 c为氢氧化钠滴定液的实际浓度，mol/L； 　　　V为消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； 　　　W为所称供试品的重量，g。

29 五、非水滴定法 《中国药典》（2005年版）中采用此法测定的药物有：癸氟奋乃静及其注射剂、盐酸乙胺丁醇及其片剂和胶囊剂、盐酸乙基吗啡、盐酸二甲双胍、盐酸二氧丙嗪、盐酸丁卡因、盐酸三氟拉嗪、盐酸马普替林、盐酸去氯羟嗪、盐酸可卡因、盐酸可乐定、盐酸丙米嗪、盐酸布比卡因及其注射剂、盐酸布桂嗪、盐酸卡替洛尔、盐酸甲氧明、盐酸甲氯芬酯、盐酸尼卡地平、盐酸地芬尼多等。

30 例6-5 《中国药典》（2005年版）氢氯噻嗪的含量测定。
（1）测定原理。氢氯噻嗪含有两个磺酰胺基，联结在N上的氢原子较活泼，具弱酸性。采用甲醇钠非水溶液滴定法，用偶氮紫指示液，滴定终点为蓝色。 （2）测定方法。取本品约0.12g，精密称定，加二甲基甲酰胺40ml溶解后，加偶氮紫指示液3滴，在氮气流中，用甲醇钠滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液恰显蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml甲醇钠滴定液（0.1mol/L）相当于14.89mg的C7H8ClN3O4S2。

31 （3）数据处理。 氢氯噻嗪的百分含量为 c为滴定时甲醇钠液的浓度，mol/L； V为滴定供试品时所消耗甲醇钠液的体积，ml； V0为空白试验时所消耗甲醇钠液的体积，ml； T为每1ml甲醇钠液(0.1mol/L)相当于被测物的质量，mg； W为所称样品的重量，g。

32 六、紫外分光光度法 例6-6《中国兽药典》（2005年版）中盐酸氯苯胍片标示含量计算。 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸氯苯胍25 mg），置50 ml棕色量瓶中，加甲醛30 ml，振荡使溶解，用甲醛稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在352 nm波长处测定吸收度。另取盐酸氯苯胍对照品约25 mg，同法测定，计算即得。

33 七、原子吸收分光光度法 例6-7《中国药典》（2005年版）中龙牡壮骨颗粒含量测定 1.含量测定。对照品溶液的制备 精密称取经110℃干燥至恒重的碳酸钙对照品约60mg，置100ml量瓶中，加水10ml湿润后，加稀盐酸5ml使溶解，加水至刻度，摇匀，精密量取25ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、和3.0ml，分别置25ml量瓶中，各加镧试液1ml，加水至刻度，摇匀，即得。 2.供试品溶液的制备。取本品装量差异项下的内容物，研细，取0.5g，精密称定，置100ml量瓶中，加水10ml湿润后，加稀盐酸5ml使溶解，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，加镧试液1ml，加水至刻度，摇匀，即得。 测定法 取对照品溶液与供试品溶液，照原子吸收分光光度法，在422.7nm的波长处测定，计算，即得。 3.本品每袋含钙（Ca）不得少于45.0mg。

34 八、气相法 例6-8《中国药典》（2005年版）维生素E的含量测定。 1.色谱条件与系统适用性试验。载气为氮气；以聚硅氧烷（OV-17）为固定液，涂布于经酸洗和硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球上，涂布浓度为2％；柱温为265℃；检测器为氢火焰离子化检测器（FID）。理论塔板数按维生素E的色谱峰计算应不低于500，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2。 2.校正因子测定。取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每lml中含1.0mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置于棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解；取1～3 µL注入气相色谱仪，计算校正因子。 3.测定法。取维生素E样品约20mg，精密称定，置于棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解；取1～3μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

35 九、液相法 例6-9《中国药典》（2005年版）盐酸林可霉素的含量测定。 1.色谱条件与系统适用性实验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 0.05mol/L硼砂溶液（用85％磷酸溶液调节pH为6.0）-甲醇（4∶6）为流动相；检测波长为214nm。理论塔板数按林可霉素计算应不低于1500，林可霉素峰与林可霉素B峰的分离度应不小于2.6。林可霉素B峰为林可霉素峰相对保留时间的0.5～0.7。 2.测定方法。取本品约50mg，精密称定，置于25ml容量瓶中，用适量流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸林可霉素对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中林可霉素的含量。