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ThinPrep® 非妇科细胞学 演讲系列 非妇科标本制片 P/N B 版
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ThinPrep® 非妇科细胞学技术应用于非妇科标本有助于:
使细胞的保存得到优化 使标本制片标准化 简化玻片读片流程 可提供多样性检测，能够进行辅助实验
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材料 在本部分中，我们将回顾在使用 ThinPrep 2000 处理器制作非妇科标本时，将需要用到的所有材料。
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所需材料清单 ThinPrep® 2000 处理器 ThinPrep® 显微玻片 非妇科 过滤器（蓝色） Multi-Mix™ 振荡仪
CytoLyt® 和 PreservCyt® 溶液 这些物品可通过 Hologic 购买。
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所需材料清单 50 ml 容量的离心机 50 ml 离心管 玻片染色系统和试剂 1 ml 塑料移液器（分级） 标准实验室固定液
盖玻片和固定装置 用于故障排除的冰乙酸、DTT 和盐水 您的实验室中可能已经配备有这些物品。
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溶液 在本部分中，我们将讨论推荐使用的溶液，以及不推荐与 ThinPrep 系统一同使用的溶液。
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推荐使用的采集介质 CytoLyt® Plasma-Lyte® Polysol® 电解质平衡液 这些溶液是取得最佳结果的关键所在。
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不推荐使用的采集介质 Mucollexx® 乙醇 含有聚乙二醇 的液体 Saccomanno 液
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不推荐使用的采集介质 普通盐水 培养介质 RPMI PBS 含有甲醛的溶液
这些溶液并不是用于细胞保存的最佳溶液，并且会增加细胞形态不佳的概率。
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Hologic 溶液 CytoLyt 溶液 PreservCyt 溶液
为配合 ThinPrep 处理器并作为一整套系统来工作，Hologic 开发了这两种保存液。 我们现在将对其规格和用途进行讨论。
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Hologic 溶液 CytoLyt 溶液 甲醇缓冲型保存液 溶解红细胞 保护蛋白质沉淀 溶解粘液
使普通细胞学标本的形态在室温下保存 8 天 只要 CytoLyt 溶液与标本量的比率达到最低值 1:3，CytoLyt 便可使普通细胞学标本的形态在室温下保存 8 天。
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Hologic 溶液 CytoLyt 溶液 用作转移介质 在处理之前，可在标本制片过程中使用
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Hologic 溶液 PreservCyt 溶液
在使用 ThinPrep 2000 处理器进行转移和制片时，甲醇缓冲型溶液用于对细胞提供支持。 在处理之前，必须在 PreservCyt 溶液中完成标本的转移和存放工作
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Hologic 溶液 PreservCyt 溶液
PreservCyt 溶液中的细胞在 4°-37°C 的温度范围内大约可保存 3 周
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标本采集与制片 在以下部分中，我们将对理想的采集程序以及制片技术作出讨论。
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采集 细针抽吸 将整个标本放入 盛有 30 ml CytoLyt 溶液的离心管中漂洗；或将其放入电解质平衡液（如 Polysol 或 Plasma-Lyte）内
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采集 粘液标本 直接将采集物放入 30 ml CytoLyt 溶液内 如果刚刚完成采集，则应尽快加入 30 ml CytoLyt 溶液
“类粘蛋白”包括： 呼吸物标本及一些 GI 标本. 如果标本量较大 (> 20 ml)，则在加入 CytoLyt 溶液之前，应通过离心方式进行浓缩。 向标本中加入 30 ml Cytolyt；这有助于保存标本，以及进行最初的粘液溶解工作。
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采集 粘液标本 痰液： 将采集物直接放入 CytoLyt 溶液内 漂洗/灌洗： 采用电解质平衡液 (BES) 进行采集
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采集 液体标本 在加入 CytoLyt 溶液之前，通过离心的方式对刚采集到的标本进行浓缩
“液体”包括： 尿液、BCF、CSF 和胞囊液 在采用 T2 进行处理之前，需要对 CytoLyt 中的采集液进行漂洗。 我们将在稍后对此程序进行介绍…
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采集 表层标本 表层刷洗物和刮取物会被直接采集至 PreservCyt 溶液内
“表层标本”包括： 口腔刮取物、乳头溢液、肛门涂片和 tzanck 涂片等…
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制片 细针抽吸 离心浓缩 滤出上清液并重制细胞团悬液 对细胞团进行评估 将标本加入盛有 PreservCyt 溶液的标本瓶内
静置 15 分钟 使用“序列 2”，并在 ThinPrep 处理器上进行处理 固定、染色并评估 如果已将标本采集物放入 BES，则首先应向其中加入 30 ml CytoLyt。 在下一部分中，将对各制片步骤中的特殊注意事项进行讨论。
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制片 粘液标本 机械振荡 离心浓缩 滤出上清液并重制细胞团悬液 对细胞团进行评估 将标本加入盛有 PreservCyt 溶液的标本瓶内
静置 15 分钟 使用“序列 3”，并在 ThinPrep 处理器上进行处理 固定、染色并评估 DithioThreitol (DTT) 的使用情况表明：呼吸物中的粘液数量可得以减少。 要配合 ThinPrep 系统使用 DTT，则在制备储备液时，应向 30ml 的 CytoLyt 溶液中加入 2.5g DTT。 如果在室温（15-30 摄氏度）下存放，此溶液适合使用一周。 在振荡之前，应向标本中加入 1ml 的储备液。
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制片 液体标本 离心浓缩 CytoLyt 溶液漂洗 滤出上清液并重制细胞团悬液 对细胞团进行评估
将标本加入盛有 PreservCyt 溶液的标本瓶内 静置 15 分钟 使用“序列 2”，并在 ThinPrep 处理器上进行处理 固定、染色并评估 对于血液较多的溶液，只能先加入 10ml 新制液体。
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标本制片技术
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离心 600g x 10分钟 要将细胞物质同上清液分隔开来，应对细胞物质进行离心处理
请参阅《ThinPrep® 2000 Owners Manual》“离心转速”章节中的“非妇科”部分，并确定要取得 600g 离心力所需达到的正确转速
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机械振荡 粘液标本 方法 A 在“自动”振荡仪上，振荡 CytoLyt® 溶液 5 分钟 方法 B 混合 CytoLyt/标本混合液几秒钟
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滤出上清液 本步骤的目的是要对标本进行浓缩 以一个连贯的动作将离心管翻转 180°，滤出所有的上清液，然后将离心管恢复至原来的位置
如果未能将上清液全部滤出，则由于细胞团发生稀释，因此可能会造成细胞样本较为稀疏。
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振荡并 重制细胞团悬液 本步骤的目的是使细胞团随机分布，并提升 CytoLyt® 溶液漂洗步骤的效果
将离心管放入振荡器内，并搅动细胞团 3 秒钟；或使用塑料移液器，前后甩动细胞团，以手动进行振荡
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CytoLyt 溶液漂洗 本步骤的目的是使细胞形态能够得以保存，同时溶解红细胞、溶解粘液，并减少蛋白质沉淀
向细胞团中加入 30 ml CytoLyt 溶液、离心浓缩、滤出上清液，然后进行振荡并重制细胞团悬液 通常，一次漂洗便足以消除大多数的非妇科标本
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对细胞团进行评估 如果细胞团呈白色、淡粉色、棕褐色或无色，请 将标本加入盛有 PreservCyt 溶液的标本瓶中
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对细胞团进行评估 如果细胞团明显呈红色或棕色，则表明有血液存在 CytoLyt 溶液漂洗 加入 30ml CytoLyt 溶液 离心浓缩
滤出上清液 振荡并重制细胞团悬液
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对细胞团进行评估 要检测液体的形式，可抽取少量的标本至移液器内，然后重新将其滴入离心管中 如果液滴呈串状或胶状，则必须对粘液作进一步的溶解
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对细胞团进行评估 CytoLyt 溶液漂洗 加入 30ml CytoLyt 溶液 机械振荡 离心浓缩 滤出上清液 振荡并重制细胞团悬液
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将标本加入盛有 PreservCyt 溶液的标本瓶内
如果细胞团清晰可见，并且细胞团容量 < 1ml，则 对细胞团进行振荡，并向新制的 PreservCyt 溶液标本瓶中滴入两滴液体
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将标本加入盛有 PreservCyt 溶液的标本瓶内
如果细胞团容量 > 1ml，则 向离心管内加入 1ml CytoLyt 溶液，并快速振荡，重制细胞团悬液 向新制的 PreservCyt 溶液标本瓶中滴入一滴液体
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将标本加入盛有 PreservCyt 溶液的标本瓶内
如果细胞团无色或较少，则 将新制 PreservCyt 溶液标本瓶中的液体加入至离心管内，并快速振荡以使溶液混合 将所有标本倒回标本瓶内
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故障排除
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检查细胞量是否足够。 否则，如果有细胞团可供使用的话，应使用更多的细胞团。
粘液标本 检查细胞量是否足够。 否则，如果有细胞团可供使用的话，应使用更多的细胞团。 “标本过于稀释”消息 是 如果“是”，请检查细胞量是否足够。 否则，如果有细胞团可供使用的话，应使用更多的细胞团。 请使用“序列 3”进行制片。 否
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玻片上是否有细胞物质的“晕轮”以及/或白细胞？
粘液标本 稀释、然后加入至盛有 PreservCyt 溶液的标本瓶中。 如果新玻片上出现晕轮，请联系 Hologic 技术服务部。 玻片上是否有细胞物质的“晕轮”以及/或白细胞？ 是 如果“是”，请将标本稀释至 20:1。 然后，使用经过校准的移液器，将 1 ml 标本加入至盛有 PreservCyt 溶液的新标本瓶内。 请使用“序列 1”进行制片。 否
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玻片中的细胞是否稀少，以及是否含有粘液？
粘液标本 玻片中的细胞是否稀少，以及是否含有粘液？ 进行离心处理，滤出上清液并振荡。 使用 CytoLyt 溶液进行漂洗。 如果玻片中的细胞最终仍很稀少，请联系 Hologic 技术服务部。 是 如果“是”，请将 PreservCyt 标本瓶中的液体倒入离心管。 然后，进行离心浓缩。 滤出上清液并振荡，重制细胞团悬液。 此后，应进行 CytoLyt 溶液漂洗，并对细胞团的外貌作出评估。 如果细胞团中含有粘液，则应重复进行 CytoLyt 溶液漂洗。 将标本加入至 PreservCyt 标本瓶中，并使用“序列 2”进行制片 否 联系 Hologic 技术服务部
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检查细胞量是否足够。 否则，如果有细胞团可供使用的话，应使用更多的细胞团。
血液或 蛋白质标本 “标本过于稀释”消息 检查细胞量是否足够。 否则，如果有细胞团可供使用的话，应使用更多的细胞团。 是 “是”： 检查细胞量是否足够。 否则，如果有细胞团可供使用的话，应使用更多的细胞团。 请使用“序列 2”进行制片。 否
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血液或 蛋白质标本 玻片上是否有细胞物质的“晕轮”以及/或白细胞？
稀释、然后加入至盛有 PreservCyt 溶液的标本瓶中。 如果新玻片上出现晕轮，请联系 Hologic 技术服务部。 是 “是”： 将该标本稀释至 20:1。然后，将 1 ml 标本加入至盛有 PreservCyt 溶液的新标本瓶内。 请使用“序列 1”进行制片。 否
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血液或 蛋白质标本 玻片中的细胞是否稀少，以及是否含有血液、蛋白质或非细胞碎片？
进行离心处理，滤出上清液并振荡。 如果玻片中的细胞最终仍很稀少，请联系 Hologic 技术服务部。 “是”：请将 PreservCyt 标本瓶中的液体倒入离心管。 然后，进行离心浓缩。 滤出上清液并振荡，重制细胞团悬液。 如果标本中含有血液或非细胞碎片，请将 9 份 CytoLyt 溶液同 1 份冰乙酸混合；然后将 30 ml 此溶液加入至标本离心管内。 如果标本中含有蛋白质，请向离心管内加入 30 ml 盐水；然后进行浓缩、滤出和重制悬液处理（如果细胞团中仍含有血液或蛋白质，请重复这些步骤）。 将标本加入至 PreservCyt 标本瓶中，并使用“序列 2”进行制片。 否 是 联系 Hologic 技术服务部
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常见的干扰物质 胞核细节模糊 可能是将 PBS、盐水或 RPMI 作为采集液使用所致 将刚采集到的标本放入 CytoLyt® 溶液内，
或放入电解质平衡液内 问题： 胞核细节模糊。 可能是将 PBS、盐水或 RPMI 作为采集液使用所致。 解决方法： 将刚采集到的标本放入 CytoLyt 溶液内，或放入电解质平衡液内
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常见的干扰物质 晕轮 在密集的标本中，只可能将外边缘的细胞物质转移至玻片 -如果玻片评估不满意，
问题： 晕轮。 在密集的标本中，只可能将外边缘的细胞物质转移至玻片上。 解决方法： 如果玻片评估不满意，则可参照第一张玻片，并采用相同的制片故障排除步骤来制备第二张玻片。 在密集的标本中，只可能将外边缘的细胞物质转移至玻片 -如果玻片评估不满意， 则可参照第一张玻片，并采用相同的 制片故障排除步骤来制备第二张玻片
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常见的干扰物质 染色 干扰物质 标本中心呈现由红色至橙色的染色，并且主要在细胞团内；这与干涸的物质较为相似
使用干净的乙醉进行漂洗，或在完成胞浆染色之后， 再次进行漂洗 问题： 染色干扰物质。 标本中心呈现由红色至橙色的染色，并且主要在细胞团内；这与干涸的物质较为相似。 解决方法： 使用干净的乙醉进行漂洗，或在完成胞浆染色之后，再次进行漂洗。
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有关更多信息… 请参阅“ThinPrep® 2000 Operator’s Manual”
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有关更多信息… 请访问我们的网站 www.hologic.com 或者www.thinprep.com 产品目录 联系信息
完整的妇科及 非妇科文献资料 细胞学案例演示
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