主讲人：张玉琥 讲习组成员：于红 成海平 药品审评中心

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1 主讲人：张玉琥 讲习组成员：于红 成海平 药品审评中心 2011.5
杂质研究及案例分析 主讲人：张玉琥 讲习组成员：于红 成海平 药品审评中心

2 一、前言 二、杂质研究的基本要求及研究思路 三、案例分析 四、小结
提纲 一、前言 二、杂质研究的基本要求及研究思路 三、案例分析 四、小结

3 一、杂质研究在药品研发中的地位 二、存在的主要问题和差距
一、前言 一、杂质研究在药品研发中的地位 二、存在的主要问题和差距

4 杂质研究的重要地位 杂质—任何影响药物纯度的物质 包括有机杂质、无机杂质、残留溶剂 本讲主要讨论有机杂质 杂质来源—工艺杂质、降解产物等
工艺杂质：工艺过程中引入的杂质，包括起始原料及可能带入的杂质、中间体、副产物等 降解产物：药物降解产生，如水解、氧化、开环、聚合等反应产物，与药物的结构特征密切相关

5 杂质研究的重要地位 ★保证药品安全有效是研发及评价所要遵循的基 本原则
★保证药品安全有效是研发及评价所要遵循的基 本原则 ★杂质研究是药学研究（CMC）的重要内容，同 时也直接涉及到药品的安全有效性 药理活性或毒性杂质—安全性 普通杂质，控制纯度—有效性

6 ★杂质谱未分析或分析不到位； ★杂质分析检查方法缺乏针对性； ★杂质限度的确定依据不足； ★忽视杂质研究与其它研究工作联系； ★……
存在的主要问题和差距 ★杂质谱未分析或分析不到位； ★杂质分析检查方法缺乏针对性； ★杂质限度的确定依据不足； ★忽视杂质研究与其它研究工作联系； ★……

7 质量研究主要问题分析 源自过渡期集中审评品种（2000个）

8 二、杂质研究的基本要求及研究思路 ●相关技术指导原则 ●杂质谱分析 ●研究建立检查方法 ●进行充分的方法验证 ●确定合理的杂质限度
●超过目标限度时的考虑 ●仿制药杂质研究的特点 ●杂质研究与其它研究工作的关系

9 相关技术指导原则 化学药物杂质研究的技术指导原则 化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则 已有国家标准化学药品研究技术指导原则
ANDAs：Impurities in Drug Substances，FDA ANDAs：Impurities in Drug Products，FDA Q2A Text on Validation of Analytical Procedures Q2B Validation of Analytical Procedures：Methodology Q3A (R) Impurities in New Drug Substances Q3B (R) Impurities in New Drug Products

10 ★可能的杂质 ★原料药生产过程中可能引入的工艺杂质 ★原料药贮存过程中可能产生的降解产物 ★制剂生产、贮存过程中可能产生的降解产物
杂质谱分析 ★可能的杂质 ★原料药生产过程中可能引入的工艺杂质 ★原料药贮存过程中可能产生的降解产物 ★制剂生产、贮存过程中可能产生的降解产物

11 ★依据合成工艺，分析可能产生的工艺杂质 起始原料及可能引入的杂质、中间体、副产物 例：盐酸曲美他嗪中哌嗪
杂质谱分析 ★依据合成工艺，分析可能产生的工艺杂质 起始原料及可能引入的杂质、中间体、副产物 例：盐酸曲美他嗪中哌嗪

12 ★基于结构特征，分析可能的降解产物 例：罗库溴铵中杂质C
杂质谱分析 ★基于结构特征，分析可能的降解产物 例：罗库溴铵中杂质C

13 考察样品在酸、碱、高温、光照、氧化等因素影响下的降解产物。 必要时，可根据情况进行以上因素综合存在时的强制降解实验。
杂质谱分析 ★通过强降解实验，分析研究降解产物 考察样品在酸、碱、高温、光照、氧化等因素影响下的降解产物。 必要时，可根据情况进行以上因素综合存在时的强制降解实验。 ★与理论分析结果进行对比

14 ★研发过程中检测到的实际存在的杂质 对超过鉴定限度的杂质鉴定结构，分析研究其来源 工艺杂质？ 降解产物？ 其它来源？
杂质谱分析 ★研发过程中检测到的实际存在的杂质 对超过鉴定限度的杂质鉴定结构，分析研究其来源 工艺杂质？ 降解产物？ 其它来源？

15 ★参考信息： 通过被仿药品质量标准（仿制药） 国家标准中的已知杂质 EP、BP、USP、JP等标准中的已知杂质
杂质谱分析 ★参考信息： 通过被仿药品质量标准（仿制药） 国家标准中的已知杂质 EP、BP、USP、JP等标准中的已知杂质

16 杂质谱分析 ★参考信息： 通过被仿药品实际测定结果获取杂质信息（仿制药）
采用适当的检查方法（LC/MS等），对被仿药品进行实际测定，对其杂质情况（杂质种类、杂质含量）进行研究分析 应关注被仿药品是否有良好的研究基础

17 了解常用方法（例如HPLC、TLC、GC等）的特点
研究建立检查方法 ★基础和经验 明确杂质检查的目标（基于杂质分析） 了解常用方法（例如HPLC、TLC、GC等）的特点 了解杂质和药物的特性 充分的文献调研 既往杂质分析的研究经验 方法的优化和调整 多种方法的相互比较、相互补充

18 BP及USP均采用HPLC法检查有关物质 原料药原国家标准，TLC法（除主斑点外不得有其它杂质斑点）
研究建立检查方法 例：氟哌利多注射液 BP及USP均采用HPLC法检查有关物质 BP限度：单一杂质0.25％，总杂质0.5％ 原料药原国家标准，TLC法（除主斑点外不得有其它杂质斑点）

19 TLC法实验结果 HPLC法实验结果 光照10天含量（UV法）下降10％，未检出杂质斑点 影响因素、加速和长期实验，样品均未检出杂质斑点
杂质达7％以上 方法的比较研究显示，TLC法不适于本品的有关物质检查 CP2010版，改用HPLC法

20 例：盐酸舍曲林 有7个已知杂质A-G 杂质A:非对映异构体 杂质B、C、D：工艺杂质 杂质E（扁桃酸）：拆分试剂 杂质F：降解产物

21 例：盐酸舍曲林 采用一种方法不能有效控制所有杂质 针对不同杂质，采用不同方法进行控制 HPLC法：杂质E（拆分试剂）0.2％
GC法：杂质C和D总量0.8％ 杂质A、B、F均0.2％ 其它单一杂质0.1％，总杂质1.5% 手性HPLC，杂质G（对映异构体）1.5％

22 充分的方法验证 灵敏度（检测限）、专属性、定量限、线性、耐用性等 定量实验：关注和验证准确度、精密度、专属性、定量限、线性、范围、耐用性
限度实验：至少应关注和验证专属性、检测限、耐用性

23 充分的方法验证 专属性研究 原料药合成中间体、粗品等的分离度考察 原料药及其制剂的强制破坏实验 制剂的辅料干扰实验 杂质加入实验
和药典方法或经论证的其它方法进行比较 峰纯度检查（二极管阵列检测、质谱检测）

24 充分的方法验证 线性、定量限、检测限等 采用杂质进行相关试验 关注杂质紫外吸收特征，确定适宜的检测波长 关注杂质相应因子

25 例：盐酸左布比卡因注射液 2,6-二甲基苯胺为毒性降解产物 BP（布比卡因注射液）：对照品比色法，400ppm
上市同品种：采用HPLC杂质对照品法 研制产品：方法学研究未针对该已知杂质进行验证

26 确定合理的杂质限度 核心是杂质的安全性 相关技术指导原则的要求（决策树） 论证杂质安全性的相关文献资料 杂质安全性研究资料
上市产品中杂质量不能超过进行安全性研究样品中杂质量 被仿药品的质量标准，杂质种类和水平（仿制药）

27 确定合理的杂质限度 原料药杂质限度 ..\..\化学药品指导原则\化学药物杂质研究技术指导原则.pdf

28 例：盐酸帕罗西汀 EP、USP收载，列出7个已知杂质A-G
HPLC法：控制杂质A（去氟物）0.3％，其它单一杂质0.1%，总杂质不得过0.5％ 手性HPLC控制杂质D（对映异构体）不得过0.2％

29 例：盐酸帕罗西汀 杂质G：遗传毒性杂质，为工艺杂质 EP、USP均规定该杂质不得过1ppm 具体品种：根据采用的工艺进行分析，是否存在该杂质
如果存在，应研究建立适当的方法进行控制， 限度：不得过1ppm

30 超过目标限度时的考虑 采取措施降低杂质至目标限度以下（首选） 进行杂质安全性研究 完善精制方法 优化合成工艺 控制原料及中间体的纯度
变更合成路线 完善包装及贮藏条件（针对降解产物） 完善制剂处方工艺（针对降解产物） 进行杂质安全性研究 采用含有杂质的原料药或制剂 采用分离的杂质单体

31 超过目标限度时的考虑 杂质结构决策树 ..\..\化学药品指导原则\化学药物杂质研究技术指导原则.pdf

32 仿制药杂质研究的特点 参考信息：被仿产品的相关信息（质量标准、实测结果等） 目标：杂质水平不超过被仿产品 杂质对比研究：重要的研究手段
前提：被仿品的杂质已得到充分研究，安全性已得到论证

33 仿制药杂质研究的特点 杂质对比研究结果分析 杂质谱与被仿品一致或杂质种类较被仿品少，无超过鉴定限度的新杂质；各杂质含量不超过被仿品
——试制品的杂质控制达到了研究目标 杂质谱与被仿品一致或杂质种类较被仿品少，无超过鉴定限度的新杂质；但已知杂质含量超过了被仿品 ——改进工艺，降低杂质含量

34 仿制药杂质研究的特点 杂质对比研究结果分析 杂质谱与被仿品不一致，有超过鉴定限度的新杂质；但已知杂质含量不超过被仿品 ——鉴定新杂质结构
——分析其产生原因，改进工艺，降低杂质含量至鉴定限度以下 ——若通过改进工艺，杂质含量不能降低至鉴定限度以下，应根据杂质研究决策树，进行后续研究。

35 仿制药杂质研究的特点 杂质对比研究结果分析 杂质谱与被仿品不一致，有超过鉴定限度的新杂质；且已知杂质含量亦超过被仿品
——改进工艺，降低杂质水平 工艺路线：起始原料，中间体质量控制；反应条件的控制；精制方法等。

36 仿制药杂质研究的特点 杂质限度的确定 指导原则要求 被仿品质量标准（该质量标准是否完善） 被仿品实测结果（杂质种类、杂质含量）
试制样品研究结果（杂质种类、杂质含量） 相关文献资料

37 杂质研究与其它研究之间关系 与原料药制备工艺研究 制备工艺决定杂质水平（杂质种类、杂质含量） 杂质研究结果验证制备工艺的可行性
杂质结构结果为优化制备工艺提供重要信息 杂质检查方法的验证需制备工艺相关信息的支持

38 杂质研究与其它研究之间关系 与制剂处方工艺研究 处方工艺对杂质水平有重要影响
在原料药符合要求的前提下，制剂的处方工艺实际 上决定了产品的杂质水平是否可接受 杂质研究是评价处方工艺合理可行性的重要依据 杂质结构结果为优化制备工艺提供重要信息 若制剂中杂质水平超过预期目标，应改进完善处方工艺

39 杂质研究与其它研究之间关系 与稳定性研究 杂质研究（降解途径、降解产物）是稳定性研究的重要内容 是贮藏条件选择的重要依据
稳定性研究中杂质考察结果是评价制剂处方工艺合理可行性的重要依据 杂质限度需要结合稳定性考察结果确定（在符合安全性要求的前提下）

40 三、案例分析 阿托伐她汀钙杂质研究 罗库溴铵杂质研究 盐酸艾司洛尔注射液杂质分析

41 阿托伐他汀钙杂质研究 基本情况 阿托伐他汀钙（Atorvastatin Calcium）是一种人工合成的HMG-CoA还原酶抑制剂，是临床常用降血脂药 原研发企业为辉瑞公司（Pfizer） 目前国内有原研发企业产品及仿制药上市 原料药及其制剂质量标准收载于国家新药转正标准 USP33、EP7.1收载原料药

42 阿托伐他汀钙杂质研究 报告限度 鉴定限度 质控限度 原料药 0.05％ 0.1％ 0.15% 制剂 0.2％ 0.25% 杂质限度要求
最大日剂量：口服80mg/天 报告限度 鉴定限度 质控限度 原料药 0.05％ 0.1％ 0.15% 制剂 0.2％ 0.25%

43 阿托伐他汀钙杂质研究 杂质控制方法比较 国家标准 EP7.1 USP33 原料药 方法 HPLC等度 HPLC梯度 手性HPLC法
限度 总杂质2.0％ 杂质ABCD均0.3％，其它0.1％，总杂质1.5％。对映体杂质E0.3％ 制剂 方法同上，总杂质3.0％ 未收载

44 阿托伐他汀钙杂质研究 杂质谱分析 工艺杂质：杂质A（去氟阿托伐他汀） 杂质C（双氟阿托伐他汀）、杂质F、杂质G 工艺杂质及降解产物
杂质B（非对映异构体） 杂质E（对映异构体） 降解产物：杂质D（环氧化物） 杂质H（内酯化降解产物） EP中8个已知杂质结构

45 阿托伐他汀钙杂质研究 本品常用制备工艺为先分别合成主环和侧链，然后缩合、脱保护、成盐。在常规条件下前述8个杂质均可能出现可作为杂质研究的重要参考依据 需要注意存在的杂质并不限于前述8个已知杂质

46 阿托伐他汀钙杂质研究 原料药杂质研究思路 以EP标准中的检验方法及限度为参考依据，进行必要的方法验证
出现超过鉴定限度（0.1％）的新杂质——鉴定结构，分析原因，修改完善工艺，降低杂质量至0.1％以下。 若新杂质不超过质控限度（0.15％），且经鉴定结构明确不是毒性 杂质，可订入质量标准中进行控制

47 阿托伐他汀钙杂质研究 制剂杂质研究思路 应选择质量符合要求的原料药 关注降解途径及降解产物
若原料药质量符合要求，制剂杂质研究重点考察降解产物 关注降解途径及降解产物 阿托伐他汀主要降解途径为内酯化降解及氧化降解，氧化降解产物除环氧化物（杂质D）外，尚有其它降解产物。 EP、USP等未收载制剂。与原研厂产品的对比研究对评价杂质检查方法及限度合理性的尤其重要

48 阿托伐他汀钙杂质研究 申报品种的杂质研究情况 已有多家企业申报，研究工作的系统性和深入性参差不齐，有的品种差距较大 有以下几种情况
仅按照国家标准进行有关物质检查 在国家标准基础上，增加了对映异构体检查 在分析杂质谱的基础上，对各已知杂质、光学异构体均进行了研究与控制，并与上市产品进行了质量对比。

49 罗库溴铵杂质研究 制备工艺：（2β，3α，5α，16β，17β）-16-（1-吡咯烷基）-2-（4-吗啉基）-雄甾-3，17-二醇 （雄甾二醇）为起始原料，对17位进行酰化得到雄甾醇单醋酸酯，再与烯丙基溴反应成盐。 雄甾二醇的合成：以雄甾-2-烯-17-酮为起始原料，经酰化、环氧化、加成、开环等反应制得

50 罗库溴铵杂质研究 EP/BP收载，共列出8个已知杂质
..\..\药品注册资料\罗库溴铵原料及制剂\罗库溴铵申报资料\罗库溴铵杂质结构.doc HPLC法，控制杂质A不得过0.2％；杂质B，杂质C不得过0.3％；杂质D、E、F、G、H不得过0.1％；其他单一杂质不得过0.1％；总杂质不得过1.5％ 杂质谱分析 在前述合成工艺下，EP中的八个杂质均可能出现 杂质A、B、D、E、F、G 工艺杂质 杂质C、H：工艺杂质、降解杂质

51 罗库溴铵杂质研究 申报品种的杂质研究情况 品种1
采用EP色谱条件，实测最大杂质约2.1％，总杂质约2.6％。未进行杂质定性研究，限度定为单个杂质3.0％，总杂质5.0％ 品种2 参照EP色谱条件，实测最大杂质约1.7％，总杂质约2.4％，未进行杂质定性研究，限度定为单个杂质3.5％，总杂质5.0％ 存在问题 杂质研究不深入：未进行杂质谱分析，未进行方法验证，杂质限度缺乏依据

52 罗库溴铵杂质研究 申报品种的杂质研究情况 品种3 采用EP色谱条件，对杂质A、G、C进行了方法学研究 品种4
对EP色谱柱进行了变更，对杂质A、B、C、F、G进行了方法学研究 存在问题 杂质谱分析不充分，方法学验证不完善。 应参考EP，至少对八个杂质进行研究。

53 盐酸艾司洛尔注射液杂质研究 基本情况 为β1受体阻滞剂，是心血管临床常用药物之一 原研发企业为百特公司 国内外均已上市，剂型为注射液
目前国内上市产品为仿制产品 原料药及其制剂质量标准均未收入药典（中国药典及国外药典）

54 盐酸艾司洛尔注射液杂质研究 杂质控制标准 原料药国家标准WS1-(X-232)-2003-Z TLC法，杂质不得过1.0％

55 盐酸艾司洛尔注射液杂质研究 杂质谱分析 本品原料药为苯丙酸甲酯衍生物，酯类药物易水解，在水溶液不稳定，主要降解产物为酯键水解产物。

56 盐酸艾司洛尔注射液杂质研究 进一步分析 对比研究 限度确定 通过文献调研，该杂质是盐酸艾司洛尔在体内代谢产物，无安全性问题
对试制的注射液进行了检验，显示贮藏期间水解产物增加比较明显；经对比研究，原发厂产品中该杂质含量也比较高。 限度确定 根据对比研究结果，参照原发厂产品中该已知杂质水平及稳定性试验结果，确定了质量标准中该已知杂质限度

57 盐酸艾司洛尔注射液杂质研究 其他杂质 另外在制剂中检出了超过0.2％（鉴定限度）的另一杂质，该杂质在稳定性试验中未见增加。
分析来源：系由原料药引入，所用原料药中存在该杂质，含量与制剂中一致。 后续措施 ——鉴定结构，并分析原料药制备工艺，证实为工艺杂质。 ——对原料药进行了精制处理，使该杂质含量降低至0.15％以下。

58 四、小结

59 杂质研究中存在的主要问题 杂质谱未分析或分析不到位，致杂质研究缺乏针对性
研究所用方法不可行，不能有效检出药品中存在的杂质，或未进行充分的检查方法比较、优选和验证研究，提供的研究资料不能证明方法的可行性 杂质限度的确定缺乏充分依据，忽视杂质的归属和安全性论证，切实保证药品的质量和安全性 仿制药需要充分关注与被仿产品的杂质对比研究。关注被仿产品的合理选择 若杂质种类或含量超出预期，建议首先考虑完善原料药制备工艺、制剂处方工艺，降低杂质水平

60 需要进一步加强杂质研究的深入性、系统性 充分重视杂质谱分析，杂质谱分析是杂质研究进一步工作的基础 重视方法的优选、比较研究，重视方法的验证研究。即使采用药典等收载的公认方法，也应进行适用性验证，切实保证方法的可行性 重视杂质限度确定的安全性依据，切实保证

61 谢谢！