中国医学科学院 中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科

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1 中国医学科学院 中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科
抗ENA抗体检测及临床应用 中国医学科学院 中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科

2 ☆ 半个世纪以来自身抗体的发现和检 测,推动了自身免疫性疾病的诊断和 治疗。

3 自身免疫病相关自身抗体的产生 人体免疫机制出现异常 自身成分 　　　　　　作为异体抗原 T细胞 巨噬细胞 MHC Ｔ细胞诱导　　　　Ｂ细胞产生自身抗体

4 ☆ 自身免疫发生的机制、抗体在自身 免疫性疾病中的作用以及免疫耐受 的损害仍然 是研究的热点。

5 什么是自身抗体 ? 自身抗体的产生是易感者（易感基因）在环境因素（病毒等）诱导下对自身组织或成分异常的免疫反应。
什么是自身抗体 ? 自身抗体的产生是易感者（易感基因）在环境因素（病毒等）诱导下对自身组织或成分异常的免疫反应。 自身抗体是自身免疫性的标志。 自身抗体的产生是自身免疫反应，与自身免疫性疾病不同义，它早于疾病产生。

6 自身抗体的临床意义 自身免疫的生物标记 预示自身免疫病 早期诊断和分类弥漫性结缔组织病 指示疾病活动性、预后

7 自身抗体是自身免疫性风湿病（ARD） 的生物标记（Bio-marker）
结缔组织病 ANA 干燥综合症 SSA/SSBab SSAab M3Rab 肌炎/皮肤炎 Jo-lab Mi-2ab SRPab （合成酶抗体） 系统性硬化病 Scl-70ab ACA 核仁型ANA 系统性血管炎 ANCA-PR ANCA-MPO ENCA （内皮细胞抗体） 原发性胆汁性 AMA AMA-M2ab 核包膜ab 肝硬变

8 抗核抗体谱（ANAs）分类 抗DNA抗体（anti-dsDNA，anti-ssDNA ）
抗组蛋白抗体（histons: H1 , H2A , H2B , H3 , H4 , H2A-H2B复合物） 抗ENA抗体（抗体: Sm , nRNP , SSA/Ro , SSB/La, rRNP , Scl-70 , Jo-1 , PCNA , RA33 , ANAs 抗非组蛋白抗体 Ku,RANA,Mi-1,Mi-2,PL-7,PL-12.） 抗着丝点抗体（ anti-CENP -A , B , C ，D，F，G） 抗核仁抗体（抗体: RNA-polymerase-1 , PM-Scl/PM-1，Th/To, U3nRNP/Fibrillaria，4-6-S-RNA） 抗其他细胞成分抗体（高尔基体，中心体，纺锤体，线粒体，溶酶体， 肌动蛋白，Vimentin，细胞角蛋白，Lamin)

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10 抗可提取性核抗原（ENA）抗体 anti-extractable nuclear antigen antibodies
应用最多 、最特异的一族抗体。

11 可提取性核抗原（ENA） extractable nuclear antigen
蛋白可以用盐水进行提取，因此称为 可提取性核抗原。 成分：核酸与核蛋白，不含DNA，组蛋白。 功能：参与细胞内DNA的复制、转录以及蛋白的翻 译合成

12 可提取性核抗原（ENA） extractable nuclear antigen
属间差异，但有明显的组织不均一性。 理化特性：ENA抗原对温度和RNA酶敏感。

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14 抗ENA抗体检测方法 对流免疫电泳法( CIE) 免疫双扩散法(ID or DID) 免疫印迹法(IB) 酶联免疫吸附法(ELISA)
蛋白芯片（Protein chip）

15 对流免疫电泳(CIE)结果判断

16 免疫双扩散(ID)检测结果判断 上图为抗Sm、U1-RNP抗体阳性滴度均为1:4 下图为抗SSA、SSB抗体阳性 抗SSA抗体滴度1: 抗SSB抗体滴度1:16

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20 ＊ 抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%- 30%）。
可早于疾病1—2 年出现，是前瞻及回顾性诊 断的指标。 ＊ Sm 抗原决定族主要在与U1,U2,U4--u6RNA 连接的B和D 蛋白多肽上，分子量： （29KD），B’（28KD),D (13.5KD)。

21 → rRNP sm ← → rRNP sm ←

22 ＊ Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同
＊ SmAb和rRNPAb常同时检出，同为SLE 标记性抗体。

23 在,高滴度有利于MCTD的诊断。 在AID中阳性率40%-- 60%。 抗原表位分子量: 73 KD 、32 KD 、
＊ 抗U1RNP抗体在多种结缔组织病中存 在,高滴度有利于MCTD的诊断。 在AID中阳性率40%-- 60%。 抗原表位分子量: 73 KD 、32 KD 、 17.5 KD 、28/29 KD。

24 ＊ 文献报告U1RNP和Sm的B B’有共同的
氨基酸序列， 不但Sm Ab和B B’ C末 端富含脯氨酸的区域结合，这个区域在 其他的小核核蛋白尤其是 U1RNP中都 存在，所以它不止是SmAb识别的抗原 表位，也是U1RNP重要的抗原表位。

25 RNP RNP sm RNP RNP

26 Sm U1RNP N= 2096 BB’ 28/29KD 69.9% ID法与U1RNP抗体符合率=74.4% ID法不支持抗Sm抗体

27 sm u1Rnp ↓ CO sm ↓ ↓

28 ＊ 抗U1RNP抗体在IBT检测中最具多态性 ，
与上述4 个抗原表位可有不同排列组合的 连接。说明其在自身免疫中是多克隆、 多位点的。在不同的病人中存在着显著地 异质性 。

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30 ＊ 有文献报告：用ELISA法为健康人检测抗 SSA 抗体，阳性率17%。在抗SSA抗体阳性的系统性
抗体,阳性率大约 ： % 。 两个抗原表位，分子量 52KD, 60KD。 ＊ 有文献报告：用ELISA法为健康人检测抗 SSA 抗体，阳性率17%。在抗SSA抗体阳性的系统性 红斑狼疮和干燥综合征病人的一级亲属中用同法 检测, 阳性率达25%。

31 ＊ 抗SSA 抗体在SLE和SS中最多见，常常和光过敏、
血管炎、血小板减少、紫癜等有关。ANA阴性的 ScLE常常有抗SSA 抗体。 ＊ 抗SSA 、SSB抗体可造成新生儿狼疮，婴儿心脏传 导阻滞等先天性心脏病。 ＊ 抗SSB抗体： AID %，在PSS,SLE中多见。 分子量45KD、47KD、48KD,在各种检测方法中与 抗 SSA抗体伴随出现。

32 → SSA → RO → SSB

33 CO ↓ ↑ ↑ ssB Ro52 ssA

34 结构，它的天然构象是SSA抗原性的保证。52KD SSA抗原不依赖这种空间结构，它的Ｃ末端可非特
异的和血清中的蛋白连接而形成线性的表位，因此 特异性较差。

35 ＊ 抗Scl-70抗体：SSc中 25 -75%, 标记性抗体。
10倍。 ＊ 抗Jo-1抗体：PM/DM 25%，标记性抗体。在合并 肺间质变的PM/DM病人中抗Jo-1抗体阳性率高达 60%。 ＊ 抗rRNP抗体： SLE特异性抗体（10%-30%） 抗rRNP抗体与dsDNA、与SSA/RO、ACL相关。 滴度升高仅限于SLE,其他疾病很少见。

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37  抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%-30%）  抗U1RNP抗体：MCTD 95 -100%（高滴度）
抗可提取性核抗原（ENA）抗体 anti-extractable nuclear antigen antibodies  抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%-30%）  抗U1RNP抗体：MCTD %（高滴度）  抗SSA抗体： CTD %  抗SSB抗体： CTD %，PSS,SLE  抗Scl-70抗体：SSc %, 标记性抗体  抗Jo-1抗体：PM/DM 25%，标记性抗体  抗rRNP抗体： SLE特异性抗体（10%-30%）

38 抗ENA抗体检测方法 对流免疫电泳法( CIE) 免疫双扩散法(ID or DID) 免疫印迹法(IB) 酶联免疫吸附法(ELISA)
蛋白芯片（Protein chip）

39 ENA抗体谱芯片 - Luminex技术 美国FDA批准的Zeus 和INOVA ENA抗体谱芯片都是采用Luminex技术，又称液态芯片。它是基于流式细胞仪计数原理，不同荧光编码的微球体上交联了不同的靶抗原并以一定数量混合，加入血清样本后，血清中的各自身抗体就会被所对应的微球体捕获。然后，在Luminex检测仪上，这些荧光编码的微球体被微量液体传送系统排成单列，通过两束激光，一束判定微球体的荧光编码从而决定被测自身抗体的种类；另一束测定微球体上荧光强度从而给出被测自身抗体的含量。    

40 BioPlex 2200

41 Plate-Based Multiplex Assay System
Array－ELISA Plate-Based Multiplex Assay System Array－ELISA技术利用生物芯片技术的并行检测能力，结合抗原与其相应抗体特异性结合的免疫学原理，将传统的ELISA诊断方法缩微化，把不同自身抗体针对的靶抗原点阵于经特殊化学处理的96孔内，捕捉被检者血清中的对应抗体，通过特定的化学发光反应产生光信号，根据光信号强度对自身免疫抗体进行半定量检测。 一份样本一次反应就能同时检测多项指标，多项检测指标以pannel 的形式进行检测，可降低检测成本，提高检测速度。

42 Array ELISA Array－ELISA
Array/chip，包括核酸芯片、蛋白芯片和组织芯片，它具有高通量、快速、微量化、并行化的特点； Array－ELISA技术利用生物芯片技术的并行检测能力，结合抗原与其相应抗体特异性结合的免疫学原理，在96孔ELISA板上结合抗原或特异性抗体，捕捉被检者血清中的对应抗体或抗原，通过特定的化学发光反应产生光信号，根据光信号强度进行定性或定量检测。 一份样本一次反应就能同时检测多项指标，多项检测指标以pannel 的形式进行检测，可降低检测成本，提高检测速度。 Array－ELISA

43 ENA抗体检测结果( Array-ELISA)
Sm RNP SS-A SS-B Scl-70 Jo-1 + - Image

44 自身抗体预示着自身免疫风湿性疾病（ARD）
易感性 若干年 自身抗体（+）若干时间 （基因） 无症状 环境 环境 自身抗体先于ARD出现。虽无临床症状，但 有自身抗体出现，并以具有很长潜伏期为特征。自身 抗体具有可以预测疾病的作用。 ARD症状

45 总结 自身抗体是自身免疫病的标记 自身抗体出现在自身免疫风湿病（ARD）之前 自身抗体参与疾病的发生与发展
自身抗体提供临床诊断、疾病活动性及预后、脏器损伤、药物疗效的信息 新的自身抗体仍在出现，可能提供指导更多的临床诊治

46 Thank you