抗生素类药物的分析Analysis of Antibiotics

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1 抗生素类药物的分析Analysis of Antibiotics
第十六章 抗生素类药物的分析Analysis of Antibiotics

2 发现———震惊一时的辉煌 明朝，李时珍《本草纲目》，霉豆腐渣 1929，伦敦圣玛丽医院，弗莱明
1939年，牛津的病理学教授霍华德·弗洛里与生化学家恩斯特·钱恩 1940年，弗洛里和希特利 1941年，青霉素用于治疗人 1941夏，弗洛里和希特利，美国 1943年，朱既明，长霉的皮革 1944的诺曼底登陆 1945年，诺贝尔生理或医学奖 1947年，瓦克斯曼，链霉素（1952）　

3 滥用———后抗生素时代现况 《时代》杂志1994年9月封面故事《细菌复仇记》（revenge of the Killer Microbes）
2000年，医学杂志《Ann Intern Med》：美国每年花去150亿美元用于抗生素 美国：70％－80％的使用属于非必要。 亚特兰大CDC：5000万张抗生素的处方对治疗无效，占所有处方的1／3

4 后果———耐药菌的报复 深究——文化背景和体制思维 医生滥用的压力 患者滥用的误区 通过食物链吸收

5 专家建议 对抗生素生产严格管理与控制。 严格控制抗生素饲料添加剂的生产与应用。 加大抗生素研究力度，限制人畜共用药的品种。
提高医生使用抗生素水平。 2017/4/6

6 第一节 概 述 抗生素 的定义 在低微浓度下，抑制某些生物的生命活动和其他细胞增殖的化学物质的总称
第一节 概 述 抗生素 的定义 在低微浓度下，抑制某些生物的生命活动和其他细胞增殖的化学物质的总称 由微生物发酵、化学纯化、精制后化学修饰等过程，最后制成适当制剂

7 1. 抗生素药物的特点 化学纯度 较低 2. 活性组分易发生变异 生物合成 （发酵） 3. 稳定性差 2. 化学合成或半合成 抗生素的特点
抗生素的来源 化学纯度 较低 2. 活性组分易发生变异 3. 稳定性差 生物合成 （发酵） 2. 化学合成或半合成

8 2.抗生素类药物的质量分析 1)鉴 别 2)检查 3)定 量 理化方法： 增加： 含量（理化法）或 影响产品稳定性ii.临床安全性密切相关
化学法； 色谱法； 光谱法 含量（理化法）或 效价（微生物检定法：管碟法；浊度法）测定 1)鉴 别 2)检查 3)定 量

9 微生物检定法与理化法的比较 微生物检定法 理化法 以抗生素对微生物的杀伤或抑制程 度为指标衡量抗生素的生物效价 根据抗生素结构特点，利用其
特有的理化性质测定其含量 已知或新发现的抗生素、精致品或 粗制品均能测定 测定化学结构已知、已提纯的 抗生素 灵敏度高、样品需用量小、反映抗 生素的医疗价值，但操作步骤多、 费时、误差大 迅速、准确、专属性高、样品 需用量小、操作简单、省时

10 抗生素的活性以效价单位来表示： 每ml或每mg中含有某种抗生素 的有效成分的多少， 用单位（u）或µg 表示。
1mg青霉素G钠盐定为1667单位 1mg庆大霉素定为590单位 1mg硫酸卡那霉素定为670单位

11 3、抗生素类药物的分类 结构 四环素类 tetracyclines 氨基糖苷类 aminoglycosides β–内酰胺类
β-lactams 其他类 大环类 抗肿瘤类 结构

12 第二节 β–内酰胺类抗生素 青霉素类(penicillins) N S C H O R A B 母核（6-氨基青霉烷酸，6-APA） 3 1
第二节 β–内酰胺类抗生素 N S C H 3 O 1 2 4 5 6 7 R 母核（6-氨基青霉烷酸，6-APA） A B 青霉素类(penicillins)

13 头孢菌素类(cephalosporins)
B 母核：7-氨基头孢菌烷酸，7ACA 头孢菌素类(cephalosporins)

14 青霉素 （青霉素钾、钠）

15 氨苄西林 （氨苄青霉素）

16 阿莫西林 （羟氨苄青霉素）

17 普鲁卡因青霉素

18 头孢氨苄

19 头孢拉啶

20 头孢羟氨苄

21 头孢噻吩钠

22 结构特点与性质 一、 酸性 （一）羧基 与碱金属(Na+、K+)成盐 易溶于水 Na

23 与有机碱(普鲁卡因)成盐 难溶于水 普鲁卡因青霉素

24 旋光性 （二）手性C 青霉素类 C C C6 头孢菌素类 C C7 ﹡ ﹡ ﹡ ﹡ ﹡

25 （三）共轭体系 UV 青霉素类 母核无明显UV 多数有苯环取代基 头孢菌素类 母核有共轭体系

26 （四）β–内酰胺环 四元环张力大 不稳定性因素 酰胺键易水解 干燥纯净 稳定 水溶液 不稳定

27 青霉素类 某些氧化剂 酸、碱、青霉素酶 （某些金属离子） （温度） 降解失效

28 例 青霉素的降解反应 青霉噻唑酸 青霉醛 青霉素 青霉酸 青霉胺 CO2 α–青霉噻唑酰基羟胺酸 青霉烯酸 H2O/OHˉ 或青霉素酶
HgCl2 H2O 青霉素 青霉酸 青霉胺 100℃ pH2 CO2 α–青霉噻唑酰基羟胺酸 NH2OH pH4 青霉烯酸

29 降解失效 头孢菌素类 酸、碱、胺类 -内酰胺酶

30 异羟肟酸衍生物 鉴别试验 二、 （一）呈色反应 1. 异羟肟酸铁反应 β-内酰胺类 - b 内酰胺类 呈色 • NaOH Fe3+/3
2 HCl NOH H - b 内酰胺类 异羟肟酸衍生物 Fe3+/3 H+ 呈色

31 H+ Fe3+/3 哌拉西林（钠） 拉氧头孢钠 头孢哌酮 （红、棕、褐）

32 2. 茚三酮反应 α-氨基 -氨基 茚三酮  蓝紫色

33 3. 与重氮苯磺酸反应 酚羟基 重氮苯磺酸 - - C H OH 橙黄色 6 5 （偶合）

34 与变色酸-硫酸反应 △（分解） 变色酸 活泼“-CH2-” 显色

35 （二）各种盐的反应 1. K+、Na+的火焰反应 焰色→鲜黄色 586.0，586.9nm Na+ 焰色→紫色 766.49，769.90nm K+

36 光谱法 （三） 1、 UV法：λmax，A 头孢唑啉钠和头孢替唑钠:16μg/ml, λmax=272nm

37 2、 IR法 以阿莫西林为例 3180cm-1 N-H 1250cm-1 β–内酰胺 C-O C=O 1780cm-1
O-H 1690cm-1 仲酰胺C=O

38 色谱法 （四） 对照品对照法 1、 TLC法 2、 HPLC法

39 三、杂质检查 1、聚合物：HPLC（分子排阻色谱） 固定相：葡聚糖凝胶（sephadex） 聚丙烯酰胺凝胶(sepharose)
高分子杂质定量测定方法：外标法 主成份自身对照法 面积归一化法 限量法

40 举例：头孢他啶聚合物的测定 固定相：葡聚糖凝胶G-10（ 40～120µm ） 流动相A：3. 5%硫酸铵的0
举例：头孢他啶聚合物的测定 固定相：葡聚糖凝胶G-10（ 40～120µm ） 流动相A：3.5%硫酸铵的0.01mol/L磷酸盐缓冲液 流动相B：水 检测波长：254nm 对照品溶液：头孢他啶对照品 100µg/ml 供试品溶液：本品0.2g，精密称定，置10ml量瓶中，加入碳酸钠20mg，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

41 1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用0
1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用0.1mg/ml蓝色葡聚糖2000、流动相A测定；重复性用对照品溶液、流动相B测定。 N不低于900，拖尾因子小于2.0，峰面积的RSD应小于5.0%。 2）测定方法 进样供试液，用流动相A；进样对照液，用流动相B。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过0.3%。

42 2.有关物质和异构体 举例：头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查 固定相：ODS 流动相：0.2mol/L磷酸二氢铵-甲醇（62:38） ）头孢呋辛酯Δ3-异构体的制备：头孢呋辛酯对 照品+流动相 头孢呋辛酯Δ3-异构体。 2）系统适用性试验：各异构体之间的R符合要求，头孢呋辛酯A,B异构体、Δ3-异构体及E异构体峰的相对保留时间分别约为1.0、0.9、1.2及1.7和2.1. 60°C,1h hν 头孢呋辛酯E异构体

43 3）有关物质：主成份自身对照法 供试品：0.25mg/ml 对照品：精密量取供试品1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。
分别进样，供试品溶液中量取各杂质峰面积： 其中两个E异构体峰面积之和不得大于对照品两个主峰面积之和（1.0%）  Δ3-异构体峰面积不得大于对照品两个主峰面积之和的两倍（2.0%） 所有杂质峰面积之和不得大于对照品两个主峰面积之和的三倍（3.0%）

44 4）异构体： t‘R1 相对保留时间 r12=----- 1----被测物 t’R2 2----标准物
异构体 相对保留时间 判断 B异构体 供试液谱图中A异构体的峰面积 A异构体 与A、B异构体峰面积和之比应 为0.48~0.55。

45 3.吸收度 青霉素钠（钾）的检查： 供试液 1.80mg/ml， 结果判断： A280不得大于0.10 A264=0.80～0.88

46 4.有机溶剂 5.结晶性 氨苄西林钠（二氯甲烷，GC） 头孢哌酮（丙酮，GC） 头孢硫脒（残留溶剂，GC） 头孢他啶（吡啶，HPLC）
头孢地尼，头孢硫脒，青霉素V钾等检查。 1）偏光显微镜法 2）X射线衍粉末射法

47 HPLC法 四、含量测定 ChP 内标法＋校正因子 外标法 特点 快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）

48 生物样品中β–内酰胺类抗生素 HPLC 色谱条件 样品处理 色谱分离结果 药代动力学研究结果

49 第三节 氨基糖苷类抗生素 Aminoglycosides antibiotics
氨基糖苷类抗生素是由链霉菌或小单孢菌培养液中提取或以天然品为原料半合成制取而得到的一类水溶性较强的碱性抗生素。 链霉素 妥布霉素 新霉素 卡那霉素 庆大霉素 巴龙霉素

50 单糖环状分子中的半缩醛或半缩酮羟基在干燥的HCl存在下与另一分子醇或另一分子含羟基的化合物反应脱去一分子水，产生的化合物称为糖苷。这一反应称为成苷反应。

51 链霉素 streptomycin 链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基-L-葡萄糖胺 苷元 链霉双糖胺 糖

52 链霉胍 链霉糖 N-甲基-L-葡 萄糖胺 链霉双糖胺

53 链霉胍 链霉糖 N-甲基-L- 葡萄糖胺

54 巴龙霉素 paromomycin D-葡萄糖胺+脱氧链霉胺+D-核糖+巴龙霉糖 巴龙胺 巴龙二糖胺 苷元 糖

55 R1 脱氧链霉胺 巴龙霉糖 D-葡萄糖胺 D-核糖

56 庆大霉素 gentamycin 绛红糖胺 + 脱氧链霉胺 加洛糖胺 糖 苷元 糖

57 加洛糖胺 绛红糖胺 2-脱氧链霉胺

58 加洛糖胺 绛红糖胺 2-脱氧链霉胺 N-甲基-3- 去氧-4-甲 基戊糖胺

59 庆大霉素C复合物 庆大霉素C R=H R1、R2=CH3 庆大霉素C R=R2=H R1=CH3 庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素C2a R=CH R1= R2=H 　庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3

60 一、 结构与性质 （一） 碱性 多与硫酸成盐 链霉素 个 碱性中心 庆大霉素 5个 水溶性 溶解性 （二）

61 UV （三） 链霉素：230nm 稳定性 （四） 链霉素 pH5～7.5 庆大霉素 pH2～12 稳定 旋光性 （五）

62 坂口反应 麦芽酚反应 N-甲基葡萄 糖胺反应

63 二、 鉴别 茚三酮反应 （一） 羟基胺结构 △

64 Molisch 试验 （二） 糠醛 H+ 氨基糖苷类 羟甲基糠醛 -萘酚 蒽酮 呈色

65 红紫色

66 链霉素 - 新霉素 N 甲基葡萄糖胺 N-甲基葡萄糖胺反应 （三） （Elson-Morgan反应） 庆大霉素 吡咯衍生物 红色 乙酰丙酮
水解 - 新霉素 N 甲基葡萄糖胺 庆大霉素 乙酰丙酮 OH- 吡咯衍生物 对二甲氨基苯甲醛 H+ 红色

67 (缩合)

68 对二甲氨基苯甲醛 H+ 红色

69 麦芽酚反应 （四） 链霉素特征反应 H+ 分子重排

70 麦芽酚 紫红

71 ChP：取本品约20mg，加水5ml溶解，加NaOH试液0.3ml，水浴加热5分钟，加硫酸铁铵溶液0.5ml，即呈紫红色。
BP（有效性检查）：525nm处测定样品和对照品溶液的吸光度，规定样品的Ax>90%As

72 坂口反应 （五） 链霉胍特有反应 （或α-萘酚）

73

74 （六） 反应 UV和IR法 （七） 庆大霉素（BP） 10mg，加水10ml和40%硫酸溶液5ml 水浴加热，稀释至25ml nm无UV吸收 原料药：IR

75 （八）色谱法 （1）TLC法：硫酸依替米星的鉴别（ChP） 点样：供试液：展开、凉干、碘蒸气中显色 对照液： 混合液：供试品+庆大霉素C1a
判断：供试液与对照液所显斑点的颜色与位 置应一致。混合液中斑点清晰分离 硅胶G板 展开剂：三氯甲烷：甲醇：浓氨溶液 （5：3：1.5）

76 （2）HPLC法：硫酸庆大霉素的鉴别 比较供试液与对照液各组分的保留时间。（含量测定项下条件）
BP ：硫酸链霉素的鉴别 点样：供试液，对照液①：1mg/ml 对照液②：硫酸链霉素、硫酸新霉素 、硫酸卡那霉素 判断：供试液与对照液所显斑点的颜色与位 置应一致。对照液②中3个斑点清晰分离 硅胶H板 显色：1，3-二羟萘的乙醇溶液和46%硫酸溶液 展开剂：7%磷酸二氢钾 （2）HPLC法：硫酸庆大霉素的鉴别 比较供试液与对照液各组分的保留时间。（含量测定项下条件）

77 三、 有关物质和组分分析 （一）链霉素： 1、有关物质（HPLC：ELSD） 2、链霉素B:EP（甘露糖链霉素） 来源 反应中间体
来源 反应中间体 TLC中：对照品法（甘露糖）

78 蒸发光散射检测器(ELSD Evaporative Light-scattering Detector）
是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等,并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物 。 三步：雾化，蒸发，检测

79 庆大霉素C组分的测定：HPLC-ELSD
USP BP JP 庆大霉素C组分的测定：HPLC-ELSD （二） 发酵菌种不同 工艺差别 C组分比例 不一致 对微生物的活性无明显差异 毒副作用和耐药性不同 规定控制各组分的相对百分含量

80 加洛糖胺 绛红糖胺 2-脱氧链霉胺 N-甲基-3- 去氧-4-甲 基戊糖胺 80

81 庆大霉素C复合物 庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素C1a R、R1、R2=H
庆大霉素C2a R=CH R1= R2=H 　庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3 81

82

83 1. 衍生化(USP) + + 氨基 邻苯二醛 巯基醋酸 pH 10 . 4 吲哚衍生物 λmax = 330nm

84 1-烷基-2- 烷基硫代 异吲哚衍生物

85 方法 2. 离子对色谱 （ODS） 计算 3. 峰面积归一化法 规定 C ~50% C1a ~35% C2a +C ~55%

86 BP：RP-HPLC 规定 C1 20.0~40.0% C1a 10.0~30.0% C2a +C2 40.0~60.0%
色谱柱：苯乙烯-二乙烯基苯共聚物 对照品：硫酸庆大霉素 检测器：脉冲安培检测器 规定 C ~40.0% C1a ~30.0% C2a +C ~60.0%

87 ChP 2010：RP-HPLC 色谱柱：ODS 对照品：小诺米星 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD） 规定 C1 25~50%
C1a ~40% C2a +C ~50%

88 （三）硫酸盐 EDTA络合滴定(定量过量氯化钡) HPLC：ELSD

89 四、 含量测 定 微生物检定法 各国药典主要采用 HPLC法 :离子交换、离子对 、 反相HPLC法--ELSD

90 例 HPLC-蒸发光散射法测定硫酸依替米星含量
色谱系统适用性试验： 固定相：ODS 流动相：0.2mol/L三氟醋酸-甲醇（84：16） 检测器：蒸发光散射检测器 对照品：依替米星，0.2mg/ml RSD：不大于2.0% 方法：外标标准曲线法

91 第四节 四环素类抗生素 D C B A

92 7 8 6 5 4 3 2 11 12 1 9 10

93

94 四环素（TC）tetracycline

95 金霉素 (CTC) chlortetracycline
氯四环素

96 土霉素 (OTC) oxytetracycline
氧四环素

97 多西环素 (DOXC) doxycycline
脱氧土霉素

98 美他环素（METC） metacycline

99 一、 结构与性质 两性 （一） 酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性 二甲胺基 弱碱性 1. 与酸、碱均能成盐 2. 强酸或强碱中溶解度↑

100 （二）旋光性 UV和荧光性质 （三） 土霉素，酸性降解，绿色荧光； 碱性降解，绿色荧光，加热，转为蓝色 金霉素，碱性降解，蓝色荧光
四环素，碱性降解，黄色荧光

101 稳定性 （四） 1. 差向异构化 淡黄→黑 四环素 - 4 差向四环素 pH 2 ～ 6 金霉素 4 - 差向金霉素 蓝色荧光

102 差向四环素 （ETC）

103 （土霉素、多西环素不易差向异构化）

104 2. 降解反应 （1）酸性下降解 四环素 脱水四环素 金霉素 脱水金霉素 λmax = 445nm λmax = 435nm 橙黄色 ＜ 2
pH λmax = 435nm 橙黄色

105 脱水四环素 (ATC)

106 ～ TC ＜ ＜ ETC ATC ～ EATC

107 （2）碱性下降解 - OH 四环素 异四环素

108 二、 鉴别试 验 （一）显色法 浓H2SO4反应 1、 黄色 朱红色 绿 蓝 深紫色 盐酸多西环素 盐酸土霉素 盐酸金霉素 盐酸四环素 SO
盐酸美他环素 橙红色

109 FeCl3呈色 2、 褐色 橙褐色 深褐色 红棕色 盐酸多西环素 盐酸土霉素 盐酸金霉素 盐酸四环素 3 FeCl

110 （二）TLC：盐酸土霉素的 鉴别 薄层板： 载体：硅藻土；黏合剂：4%EDTA-Na-甘油，浓氨溶液调节pH至7.0； 展开剂：醋酸乙酯-三氯甲烷-丙酮（2：2：1），添加4%EDTA-Na 样品配制：供试品，土霉素，盐酸金霉素，盐酸四环素 用甲醇分别配制成1mg/ml溶液； 三种对照品混合后配制成1ml中各含1mg的混合溶液 判定：氨蒸汽熏后，置紫外灯（365nm）下检视，混合溶液应显示三个明显斑点，供试品溶液所显示斑点的荧光强度及位置应与相应的对照品溶液的斑点相同。

111 （三）HPLC：比较保留时间一致 （四）IR：土霉素除外 （五）UV：最大吸收波长和指定浓度下的吸光度

112 特殊杂质检查：HPLC 三 有关物质 （一） 盐酸四环素 · 4-差向四环素（ETC） · 脱水四环素（ATC） · 差向脱水四环素（EATC） · 盐酸金霉素（CTC）

113 HPLC:<中国药典>方法 供试品：2mg/ml 对照品：供试品2ml→100ml 色谱条件：C18柱，0.1mol/L草酸铵溶液-二甲基甲酰胺-0.2mol/L磷酸氢二铵溶液（68：27：5）为流动相，流速1.0ml/min，柱温35°C，检测波长：280nm 判定：供试品色谱图中如有杂质峰，按校正后峰面积计算，ETC、CTC、ATC、EATC的峰面积分别不得大于对照溶液主峰面积的2倍（4.0%）。1/2（1.0%）、1/4（0.5%）、1/4（0.5%）

114 杂质吸 收度 （二） Ch.P规定：一定溶剂、一定浓度、一定波长下杂质吸收度的限量 盐酸四环素 l max 268 、 355 nm

115 杂质吸收度

116 杂质吸收度 取供试品，在20～25°C时加0.8%NaOH配成每毫升10mg/ml的溶液至4cm的吸收池中，在530nm处测定，其吸收度不得超过0.12。 应严格控制温度和时间

117 HPLC法 四、 含量测定 盐酸四环素的测定 系统适用性试验：盐酸四环素、有关 物质ETC、EATC、 CTC及ATC峰间的
盐酸四环素的测定 系统适用性试验：盐酸四环素、有关 物质ETC、EATC、 CTC及ATC峰间的 分离度均应符合要 求。 定量方法：外标法以峰面积计。

118 固定相：ODSC18 流动相： 0.1mol/L草酸铵溶液-二甲基甲酰胺-0.2mol/L磷酸氢二铵溶液（68：27：5） 流速：1.0ml/min 柱温35°C 检测波长：280nm 操作：称取盐酸四环素约15mg，4-ETC、EATC、CTC及ATC各约8mg，置50ml量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶解稀释到刻度。进样，各组分分离度应符合要求。 测定：取本品约30mg，精密称定，置50ml量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶解稀释到刻度。另取盐酸四环素对照品30mg，同法测定。外标法计算供试品中盐酸四环素的含量。

119 第五节 抗生素类药物中高分子 杂质的检查 1.高分子杂质 分子量大于药物本身的杂质总称。 M.W：

120 蛋白、多肽、多糖或抗生素与蛋白、多肽、多糖的结合物。主要来自于发酵工艺。致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。 药物的自身聚合物，来自于生产、贮存过程。可引发过敏。
外源性杂质 内源性杂质

121 2、高分子杂质的基本结构与特点 1）多肽类杂质

122 2）聚合物类杂质

123 高分子杂质特点 1、生产工艺中产生杂质 2、降解作用 3、异构体存在的样品，同聚和异聚同时发生 4、工艺影响杂质的数量和种类

124 高分子杂质的控制方法 高分子杂质系指供试品中含有分子量大于药物分子的杂质，通常是药物在生产或贮存过程中产生的高分子聚合物或者生产过程中未除尽的可能产生过敏反应的高分子物质。 凝胶色谱法测定高分子杂质：使高分子杂质与药物分离。

125 定量方法 1、主成份自身对照法：用于高分子杂质含量较低的品种 2、面积归一化法
3、限量法：处另有规定外，规定不得检出保留时间小于对照品保留时间的组分，一般用于混合物中高分子物质的控制 4、自身对照外标法：一般用于Sephadex G-10凝胶色谱系统中β-内酰胺抗生素中高分子杂质的检查。在该分离系统中，所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰，以供试品自身为对照品，按外标法计算供试品中高分子杂质的相对百分含量

126 （3）高分子杂质的分析方法 简单测定系统（HPLC系统）：葡聚糖凝胶
G-10（40～120μm）柱. 系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用0.1mg/ml蓝色葡聚糖2000测定；峰面积的RSD小于5.0% 126

127 Sephades G-10的处理方法 色谱柱的填装：装柱前先将约15g葡聚糖凝胶用水浸泡48小时，搅拌出去空气泡，徐徐倾入玻璃柱，一次性装填完毕，然后用水将附着玻璃管壁的Sephades G-10洗下，用水连续冲洗4～6小时。 供试品的加入：可以采用自动进样阀，也可以直接将供试品加在凝胶表面

128 小结 抗生素的特点 β-内酰胺类：鉴别、检查、含量测定 氨基糖苷类 四环素类 高分子杂质检查

129 练习与思考 [A型题] 青霉素钠、青霉素钾的鉴别方法是 A.三氯化铁反应 B. 硫色素反应 C. 焰色反应 D.与碱性酒石酸铜试液反应
E. 双缩脲反应

130 《中国药典》规定组分测定的药物是 A.链霉素 B.青霉素 C. 庆大霉素 D.四环素

131 《中国药典》规定庆大霉素C组分测定为 A.离子对色谱法 B.电化学检测器测定 C. 蒸发光散射检测器测定 D.紫外分光法 E.微生物检定法

132 可以用麦芽酚反应加以鉴别的药物是 A.链霉素 B.青霉素 C. 庆大霉素 D.四环素

133 可以用坂口反应加以鉴别的药物是 A.四环素 B.头孢氨苄 C. 庆大霉素 D. 链霉素

134 [X型题] 1. 盐酸四环素需要检查的杂质有： A.差向四环素 B. 脱水四环素 C. 维生素C D. 金霉素 E. 差向脱水四环素

135 2. 青霉素水解产物有 A．青霉胺 B. 青霉醛 C. CO2 D. 派那地酸衍生物 E. 派那马地酸衍生物

136 [B型题] A。焰色反应 B. 硫色素反应 C.硝酸反应 D. 三氯化锑反应 E. 麦芽酚和坂口反应 1.青霉素钠 2. 硫酸链霉素

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