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第三章 细胞生物学研究方法 第一节 细胞形态结构的观察方法 一、光学显微镜技术 = 显微镜和显微镜的分辨能力
第三章 细胞生物学研究方法 第一节 细胞形态结构的观察方法 显微镜和显微镜的分辨能力 肉眼：0.2 mm; 光镜：0.2 um; 电镜：0.2 nm 一、光学显微镜技术 0.61 λ 分辨率 D N . sin α / 2 = λ: 光源波长; α: 物镜镜口角; N: 介质折射率
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显微镜成像原理
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普通复式光学显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 微分干涉显微镜 激光共聚焦显微镜 （light microscope）
（phase-contrast microscope） （光程差或相位差转变为振幅差，相差板） 荧光显微镜 （fluorescence microscope） 微分干涉显微镜 （differential-interference microscope） （厚度差转变为明暗差；增加样品反差，立体感强） 激光共聚焦显微镜 （laser scanning confocal microscope）
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双目显微镜
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正置显微镜 倒置显微镜
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荧光显微镜及其照片
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共聚焦显微镜及其显微图像
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激光共聚焦原理
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暗视野成像原理
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二、电子显微镜 2，样品制备 1，电镜基本知识和结构（波长小于0.1nm） （超薄切片，负染色，冰冻蚀刻，三维重构，扫描） 3，电镜种类
扫描电子显微镜 透射电子显微镜 扫描隧道显微镜
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透射电镜及其图像
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扫描电镜及其图像
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第二节 细胞组分的分析方法 一、高速、超速和梯度密度离心分离各种细胞器、生物大分子及其复合物
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差速离心 密度梯度离心
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二、细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类、脂类的显色
DNA：福尔根（Feulgen）反应－－紫红色 多糖类：PAS反应－－黄色 脂肪：苏丹III－－红色 蛋白质：米伦（Millon）－－红色 三、特异抗体技术 免疫荧光 免疫电镜 免疫沉淀 Western blotting 四、特异核酸标记技术 In situ hybridization Northern blot (RNA); Southern blot (DNA)
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原位杂交技术
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七、柱层析、分子筛、免疫吸附、免疫沉淀等方法分离蛋白质组分及复合物（交链和变性）
五、放射性标记技术 定性、定位、半定量研究（标记，自显影） 32P（14天）, 14C（5760年）, 3H（12年）, 35S（87天）, 131I （8） 六、定量细胞化学技术 显微分光光度术 （紫外显微分光光度、可见光显微分光光度染色） 流式细胞仪 七、柱层析、分子筛、免疫吸附、免疫沉淀等方法分离蛋白质组分及复合物（交链和变性）
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流式细胞术
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第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 一、细胞培养 1，植物细胞 （原代细胞培养，永生细胞系） 2，动物细胞
第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 一、细胞培养 1，植物细胞 （原代细胞培养，永生细胞系） 2，动物细胞 （单倍体细胞培养，原生质体培养，体细胞培养） 3，非细胞体系 （DNA复制，RNA转录，蛋白质合成，高尔基体的膜泡 运输，细胞核装配等） 细胞提取物，细胞核提取物
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动物细胞培养 细胞的克隆 植物组织培养
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四、转基因、基因沉默、基因敲除、模式生物等
二、细胞工程 1，细胞融合与杂交 植物细胞先去壁； 融合方式：仙台病毒或聚乙二醇介导，电融合等 同核融合细胞，异核融合细胞，染色体丢失 2，单克隆抗体技术 1975年英国科学家Milstein and Kohler, 1984年获诺贝尔奖 B淋巴细胞 + 小鼠骨髓瘤 三、显微操作技术 转移细胞核、细胞器、基因等 四、转基因、基因沉默、基因敲除、模式生物等
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显微操作仪
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显微操作示意图
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单克隆抗体技术
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