Tel： 大连医科大学附属第一临床学院 实验诊断学教研室

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1 Tel：15840688980 e-mail: lishijun@dl.cn 大连医科大学附属第一临床学院 实验诊断学教研室
第五节 自身抗体检测 李士军 Tel： 大连医科大学附属第一临床学院 实验诊断学教研室

2 免疫耐受（autoimmunetolerance） 自身免疫（autoimmunity）
自身免疫病（autoimmune disease, AID）当某种原因使自身免疫应答过分强烈，导致相应的自身组织器官损伤或功能障碍，这种病理状态就称为自身免疫病。 自身抗体（auto-antibody) 机体产生的针对自身组织、器官及细胞成分的抗体。

3 常见自身免疫病的分类→器官特异性

4 常见自身免疫病的分类→非器官特异性 病名 自身抗原 类风湿性关节炎 变性IgG、类风湿相关的核抗原 干燥综合征
细胞核（SSA、SSB）、唾液腺管 系统性红斑狼疮 胞核成分（DNA、DNP、RNP、Sm） 混合性结缔组织病 细胞核（u1RNP）

5 自身免疫病临床特征 女性多见 高滴度的自身抗体 有重叠现象 病因多数不明:自发性、病毒感染、药物 病程较长易反复 免疫抑制药物治疗有一定疗效

6 临床常见的自身抗体种类 抗细胞核抗体 抗细胞浆抗体 抗组织器官抗体 其它自身抗体

7 细胞结构

8 一、抗核抗体（antinuclearantibodies，ANA）
抗核抗体 是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称。 是一种广泛存在的自身抗体，可出现于多种自身免疫性疾病中 可以与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性 其性质主要是IgG 主要存在于血清中

9 抗核抗体检测的首选方法是间接免疫荧光法（IIF）
原理：被检血清中存在抗细胞核成分的抗体，可以特异的和抗原基质片上的细胞核抗原成份结合，形成抗原抗体复合物，再与荧光素标记的抗人 IgG抗体结合，在荧光显微镜下可观察到细胞核位置发生特异的亮绿色荧光为ANA阳性。 根据细胞内靶抗原分子理化特性和分布部位分类： ANA亚型: anti-dsDNA, anti-Sm, anti-SSA, SSB, Scl-70 antibodies, etc.

10 Detecting method of ANA
Indirect immunofluorescence（IIF）

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13 抗dsDNA与抗组蛋白抗体。细胞胞浆荧光染色阳性。与抗不溶性DNP，抗组蛋白抗体有关。
① 均质型Homogeneous 抗dsDNA与抗组蛋白抗体。细胞胞浆荧光染色阳性。与抗不溶性DNP，抗组蛋白抗体有关。 主要见于SLE。

14 ②斑点型（Speckled Pattern）：与可提取性核抗原抗体有关（ENA ，extractable nuclear antigen antibodies），如：anti-U1RNP, anti-Sm, anti-Scl-70, anti-SSA,SSB.常见于MCTD，SLE。

15 ③核膜型 membranous 与抗dsDNA有关，荧光 染色在核膜周围。 主要见于ＳＬＥ。

16 ④核仁型（nucleolar）：抗核糖体、RNA聚
合酶的抗体。常见于硬皮病。

17 二. 抗双链DNA抗体 临床意义： SLE标志性抗体，其阳性为其诊断标准之一，特异性达95%以上。 抗体滴度与疾病活动程度相关。
绿蝇短膜虫作为抗原基质

18 三. 抗核小体抗体（AnuA） 一组碱性蛋白 (H1、H2A、H2B、H3、H4） 双链DNA
临床意义：50-70%SLE及95%药物狼疮，并与疾病活动有关。

19 SLE 的诊断标准 1. Characteristic rash across the cheek
2. Discoid lesion rash 3. Photosensitivity 4. Oral ulcers 5. Arthritis 6. Inflammation of membranes in the lungs, the heart, or the abdomen 7. Evidence of kidney disease 8. Evidence of severe neurologic disease 9. Blood disorders, including low red and white blood cell and platelet counts 10. Immunologic abnormalities 11. Positive antinuclear antibody (ANA) Note: Four of the criteria must be experienced by a patient before a classification of SLE can be made. These criteria, proposed by the American College of Rheumatology, are not to be relied upon solely for diagnosis.

20 Characteristic rash across the cheek, discoid lesion rash

21 四、抗ENA抗体谱测定 提取核抗原(extractable nuclear antigen，ENA) ：是可提取核抗原的总称，ENA抗原可用盐水或磷酸盐缓冲液从细胞核中被提取。 anti-Sm anti-U1-RNP anti-SS-A anti-SS-B anti-Jo-1 anti-Scl-70 Anti-Rib

22 Principal of detecting ENA
1. Immunoblot techniques 2. ELISA

23 ENA抗体谱检测临床意义 抗体 临床意义 抗U1－RNP 混合性结缔组织病（MCTD），30％－40％SLE也可出现 抗SSA／SSB
靶抗原、特性 临床意义 抗Sm（smith) snRNP核心蛋白 A-G SLE所特有，不与疾病活动相关，敏感性较低30％－40％. 抗U1－RNP U1－核糖核蛋白RNP 混合性结缔组织病（MCTD），30％－40％SLE也可出现 抗SSA／SSB RNA蛋白复合体 干燥综合征（灵敏度50％－80％），SLA、RA等也可出现 抗Scl－70 DNA拓扑异构酶Ⅰ 进行性系统性硬化症（PSS） 抗J0－1抗体 组氨酰-tRNA合成酶为靶抗原 多发性肌炎，皮肌炎 Rib 核糖体P蛋白 SLE 特异

24 五、抗中性粒细胞胞浆抗体 （小血管炎相关的自身抗体）
ANCA（antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)：是一组以人的中性粒细胞胞浆成分为靶抗原与多种小血管炎疾病密切相关的自身抗体。 抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性小血管炎(AASV)是一组包括显微镜下多血管炎(MPA)、韦格纳氏肉芽肿(WG)、变应性肉芽肿性血管炎(CSS)和局灶节段坏死性肾小球肾炎的疾病。ANCA是其特异性血清学诊断工具,可用于判断临床病情活动和复发。 变应性血管炎是一种免疫结缔组织疾病，它好发于青春期的女性，男女比例约3：7，患者初期症状低烧，乏力，嗜睡等症状，同时肢体伴有不同程度的红斑或结节，此时容易与伤感或紫殿等混淆，如治疗不当，则会引起皮肤毛细血管炎性病变，直至破溃，溃后疼痛加重，不易愈合，愈后易留瘢痕，且明显对称性。临床治疗上西医多采用激素疗法，中医则多用活血，凉血药物治疗，目前较为时尚的治疗是中西医结合加免疫制剂的非激素疗法，此方法虽然见效慢，但副作用小，愈后复发率较低。

25 ANCA荧光类型 胞浆型 cANCA 核周型 pANCA 蛋白酶3(PR3) MPO等抗原成分 韦格纳肉芽肿 多种自身免疫病
韦格纳肉芽肿（Wegener‘s granulomatosis，WG）是一种坏死性肉芽肿性血管炎，属自身免疫性疾病。病变累及小动脉、静脉及毛细血管，偶尔累及大动脉，其病理以血管壁的炎症为特征，主要侵犯上、下呼吸道和肾脏，韦格纳肉芽肿通常以鼻黏膜和肺组织的局灶性肉芽肿性炎症为开始，继而进展为血管的弥漫性坏死性肉芽肿性炎症。临床常表现为鼻和副鼻窦炎、肺病变和进行性肾功能衰竭。还可累及关节、眼、皮肤，亦可侵及眼、心脏、神经系统及耳等。 韦格纳肉芽肿的诊断时间平均为5 - 15个月。国外资料报道其中40%的诊断是在不到三个月的时间里得出的，10%可长达5 - 15年才被诊断。为了达到最有效的治疗，WG早期诊断至关重要。无症状患者可通过血清学检查ANCA以及鼻窦和肺脏的CT扫描有助于诊断。上呼吸道、支气管内膜及肾脏活检是诊断的重要依据，病理显示肺及皮肤小血管和类纤维蛋白变性，血管壁有中性粒细胞浸润，局灶性坏死性血管炎，上、下呼吸道有坏死性肉芽肿形成，和肾病理为局灶性、节段性、新月体性坏死性肾小球肾炎，免疫荧光检测无或很少免疫球蛋白以及补体沉积。 多发性动脉炎为主动脉及其主要分支的慢性进行性非特异性炎变，常引起不同部位的狭窄或闭塞。本病多发生于青年女性，男女比例为1：2～4，发病年龄以15～30岁为多。 胞浆型 cANCA 蛋白酶3(PR3) 韦格纳肉芽肿 核周型 pANCA MPO等抗原成分 多种自身免疫病

26 六、抗心磷脂抗体（ACA） （anti-cardiolipin antibody)
临床意义： SLE等自身免疫病 抗磷脂综合征（静脉血栓血栓、血小板减少、神经系统损伤） 习惯性流产

27 七、类风湿因子 （rheumatoid factor, RF）
类风湿因子（rheumatoid factor，RF）是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体。 RF在RA中检出率达79.6%。RF并不是RA独有的特异性抗体, 在SLE病人约有50％阳性，在其他结缔组织病如SS、硬皮病、慢性活动性肝炎及老年人中均可有不同程度的阳性率。 RF阴性不能排除RA的诊断。

28 Joints Most Affected by Rheumatoid Arthritis
(Symmetrical joint involvement) The detection RF in the serum is a laboratory diagnostic criterion 1. Morning stiffness 2. Arthritis (soft tissue swelling or effusion) of at least 3 joints 3. Arthritis of the hand joints including the metacarpophalangeal and proximal interphalangeal joints 4. Symmetrical joint involvement 5. Subcutaneous rheumatoid nodules 6. Radiological changes typical of RA. 7. Rheumatoid factors (RF) is positive

29 八、抗环瓜氨酸多肽抗体 （anti-cyclic citrullinated peptide antibody，anti-CCP antibody）
诊断RA的高度特异性抗体 79%的早期RA可阳性 RA是一种慢性、反复发作、主要累及关节部位的系统性炎症性疾病。 1．主要免疫学特征：血清和滑液中存在类风湿因子（RF）,淋巴细胞活化产生细胞因子。 2、主要抗体：RF、抗CCP抗体、抗角质蛋白抗体等阳性。

30 九、自身免疫肝脏疾病相关自身抗体 其他 药物毒性 感染性 肿瘤性 代谢性 遗传性 血管性 免疫性

31 自身免疫性肝病及其自身抗体谱 疾病类型 相关自身抗体 自身免疫性肝炎（ AIH ） Ⅰ型AIH ANA/抗平滑肌抗体（ASMA）
疾病类型 相关自身抗体 自身免疫性肝炎（ AIH ） Ⅰ型AIH ANA/抗平滑肌抗体（ASMA） Ⅱ型AIH 抗肝肾微粒体抗体（anti-LKM） 抗肝细胞溶质抗体（ anti-LC） Ⅲ型AIH 抗可溶性肝抗原抗体（anti-SLA） 原发性胆汁性肝硬化（ PBC） 抗线粒体抗体AMA (M2/M4/M8/M9 )

32 抗平滑肌抗体（anti-smooth muscle antibodies, SMA/ASMA）
Ⅰ型自身免疫性肝炎（ AIH ）

33 抗线粒体抗体（AMA） 抗线粒体抗体（AMA）阳性 原发性胆汁性肝硬化（ PBC）

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36 如何诊断风湿性疾病? 病史 Medical History 体格检查 Physical exam
实验室检查 Laboratory Tests 1. Antinuclear antibody (ANA)，Rheumatoid factor 2. C-reactive protein test 3. Erythrocyte sedimentation rate (ESR) 4. Ig, Complement：Ig、C3，C4. 5. Complete blood count 6. Urinalysis （＋）

37 病例分析 患者女，22岁。病人不规则发热2年，伴疲倦，膝关节疼痛，体重下降。上述症状时而出现，时而缓解。1个月前两颊部出现红斑，病人自认为是阳光照射所致，近来面部红斑越来越明显，而来院求治。既往健康，病前未服过特殊药物。体格检查：体温38.1℃，脉搏90次/min。两颊部可见蝶形红斑，表面可见鳞屑，略凸出于皮肤表面，边缘不清楚。肝大，右锁骨中线肋缘下可触及2.0cm，脾未触及。实验室检查：血常规WBC 4.8×109/L，Hb 95g/L，血沉70mm／h；肝功能检查ALT 88U/L，AST 56U/L；肾功能BUN 12.4mmol/L，Cr 220μmol/L；尿蛋白（＋＋）。抗核抗体（＋），抗双链DNA抗体（＋）。 初步诊断是什么？ 诊断依据？

38 诊断依据 初步诊断：SLE 诊断依据： ①年轻女性； ②长期发热； ③面部有典型蝶形红斑； ④关节症状； ⑤多脏器损害如肝脏和肾脏；
⑥实验室检查：抗核抗体（＋），抗双链DNA抗体（＋），以及贫血．血沉快等。

39 本节重点 1.掌握抗核抗体、类风湿因子、ANCA的概念 2.掌握常见几种自身抗体检测的临床意义 3.掌握ENA抗体谱意义
4.了解自身免疫病的临床特征 5.熟悉风湿性疾病的诊断流程