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流式细胞仪 —— 黄晞
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流式细胞仪: 使细胞(或其他粒子)以单个方式依次高速通过激发光束,采集细胞被光照时产生的各种信号,对信号进行处理,并对各参数进行关联分析的一种仪器。
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流式细胞仪在临床检测和科研中的应用 淋巴细胞亚群分析 肿瘤学 细 胞 凋 亡 移植免疫 血小板 其 它
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基本结构
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流式细胞仪工作原理
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光学系统示意图 样液 激光源 侧向散射光和荧光 探测器 前向散射光 探测器
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光源
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光的收集、分离和测量
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长波通滤片 短波通滤片 带通滤片 SP 500 LP 500 BP500/50 光收集系统:滤光片
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光收集系统:光电倍增管(PMT)
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流式细胞仪产生的信号 非荧光信号 颗粒度 细胞大小
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荧光信号 荧光染料被激发而发射的光信号。 定量染色 荧光信号大小 被标记组分含量的定量 多荧光标记胞内多种组分,实现多参数测量
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前向散射光:激光束照射细胞时,光以相对轴较小角度(0
前向散射光:激光束照射细胞时,光以相对轴较小角度(0.5°~10°)向前方散射的讯号用于检测细胞等粒子的表面属性,信号强弱与细胞体积大小成正比。
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侧向散射光:激光束照射细胞时,光以90°角散射的讯号,用于检测细胞内部结构属性。
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散射光示意图 激光 前向 散射光 侧向散射光
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散射光检测 前向散射光 前向小角度散射光反映了细胞体积的大小 。在仪器中所测量的小角度散射光一般在10~60范围内 。 侧向散射光
侧向散射光是与光束-液流平面垂直的散射光,又称900散射光,它对细胞膜、胞质、核膜的变化更为敏感 散射光强度的变化可以表示细胞内容物的变化和体积的大小。
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前向小角度散射光的检测原理
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侧向散射光检测原理
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滤片系统示意图
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