第四节 沙门菌属及检验.

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1 第四节 沙门菌属及检验

2 学习目的与要求 1. 熟悉沙门菌属的的主要生物学特性。 2. 掌握沙门菌属的检验程序和检验方法 3. 掌握肥大反应的概念和原理
4. 了解沙门菌属的致病性。 5. 熟悉变形杆菌的主要生物学特性。

3 沙门菌属（Samonella）: 为一大类寄生人和动物肠道内生化反应和抗原构 造相似的革兰阴性杆菌。
肠道亚种 撒拉姆亚种 亚利桑那亚种 豪顿亚种 英迪加亚种 肠道沙门菌 邦戈沙门菌 分两个种 致病种类：即肠道亚种中的十余种可引起人和动物致病，如伤寒沙门菌、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌等。 。

4 一、生物学性状 形态与染色 革兰阴性杆菌，有菌毛、均有周鞭毛（除 鸡雏沙门菌外）。 培养特性 普通平板：形成较小，圆、无色透明的 S形
菌落 S S平板：形成产碱型菌落（与志贺菌 相似），可产硫化氢菌落中心变黑。 生化反应 发酵葡萄糖、甘露醇 产酸产气（伤寒沙门菌除外）。 不分解乳糖和蔗糖；大多产生·H2S ; 不分解尿素； I M Vi C: — + — +;赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶阳性。

5 大肠埃希菌 沙门菌

6 抗原构造 主要有O、H 、Vi三种抗原 : 1） O抗原：为脂多糖，耐热，100℃数h不被破坏
　 种类多；用1、2、3等表示；据其将2200多个血清型的沙门菌分成A、B、C、D……等42组，使人致病的多属于A-F组。刺激机体产生IgM抗体。 2) H 抗原：为蛋白质，不耐热，60 ℃15min即可破坏。沙门菌的H 抗原分两相： 第一相用 a、b、c……表示，其特异性高。 第二相以 1、2、3、等表示，其特异性低为几种沙门 菌所共有。

7 具有第一相和第二相的沙门菌称为双相菌，仅有一相的称单相菌。
据 H 抗原 的不同，可分种或型。 3）Vi抗原：即毒力抗原，又称表面抗原。不稳定，加热60或石炭酸处理易被破坏，人工传代后易消失。新分离的少数沙门菌有此抗原，它可阻止O抗原与相应抗体的结合。

8 抵抗力: 不强， 65 ℃15min、70%酒精 5min可杀死。但在水中可活2~3周，粪便中活1-2月，在冻土中可过冬。胆盐、煌绿及染料对其抑制作用 小（故在选择培养基中加入上述物质抑制杂菌）；对氯霉素敏感。

9 Vi抗原 可阻断相应抗体和补体的作用，抵抗吞噬细胞的吞噬作用。
二、致病性与免疫性 致病物质： 1.侵袭力：菌毛帮助细菌黏附肠粘膜上皮细胞 Vi抗原 可阻断相应抗体和补体的作用，抵抗吞噬细胞的吞噬作用。 内毒素：可激活补体系统、吸引白细胞，引起肠道炎症，吸收入血可引起全身中毒，发热、白细胞减少、中毒性休克。 肠毒素：类似于大肠杆菌肠毒素。

10 2. 所致疾病 1) 肠热症（伤寒和副伤寒）：由伤寒沙门菌、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起。
2. 所致疾病 1) 肠热症（伤寒和副伤寒）：由伤寒沙门菌、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起。 2）食物中毒（急性胃肠炎）：由鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌引起，有发热、恶心呕吐、水样泻，严重者致脱水、休克、肾衰而死亡（主见于婴儿、老人等），但，大多2~3天自愈。 3）败血症 ：常由猪霍乱沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等引起。有高热、寒战、贫血等严重症状。多见于儿童及免疫力低下者。 免疫性：主要依靠细胞免疫，牢固。

11 三、微生物学检查 （一）标本采集 不同疾病、不同病程采集不同标本 伤寒、副伤寒：第1、2周采血；第2、3周采 粪、尿；全程 可采骨髓。
血清学检查：第二周起即可采血清。 败血症：采血。 肠炎：粪便、呕吐物、可疑食物

12 （二）检验程序及方法 最 终 鉴 定 血液、骨髓 粪、尿、可疑食物 增菌培养 分 离 培 养 增菌培养 （SS、EMB、MAC、血平板）
（胆盐葡萄糖肉汤） 37 ℃ 18~24h 37 ℃ 18~24h 分 离 培 养 增菌培养 (SF、CN、TT) （SS、EMB、MAC、血平板） 37 ℃ ~24h 可疑菌落 初 步 鉴 定 （涂染检、KIA、MIU、IMViC等生化反应、A-F多价血清凝集） 37 ℃ ~24h 最 终 鉴 定 肠道杆菌系统生化反应 单价因子血清定血清型

13 最后鉴定： 主要依赖全面生化反应和血清学两方面的鉴定。 系统生化反应： 血清学鉴定：
先做A~F多价O血清的凝集(95%以上的沙门菌都属于A~F群)， 然后以6个O群的因子血清定群（O2凝集为A群；O4凝集为B群；O7凝集为C1亚群;O8凝集C2亚群；O9凝集为D群；O3,10凝集为E群；O11凝集为F群。 再用H 因子血清第一相和第二相凝集结果综合决定其所属的血清型。

14 市售的诊断血清有以下形式： 10种组合；26种组合、57种组合、140~150种组合。 如10种组合血清括 主用于伤寒、副伤寒 沙门菌的鉴定 A~F群多价O血清 Vi血清 4种O血清 4种H血清 血清学诊断： 肥大反应 用于伤寒、副伤寒的诊断

15 原理：用已知4种抗原测未知抗体 伤寒沙门菌O抗原 伤寒沙门菌H抗原 甲型副伤寒H抗原 乙型副伤寒H抗原 + 待测血清 凝集反应 结果解释：
试管中 + 待测血清 凝集反应 结果解释： 正常值 ： 伤寒沙门菌O凝集价 ≥ 1：80 伤寒沙门菌H凝集价 ≥ 1：160 甲型副伤寒H凝集价 ≥ 1：80 乙型副伤寒H凝集价 ≥ 1：80

16 动态观查：若效价逐次递增或恢复期效价比初次≥ 4者有诊断意义。
O与H抗体的诊断意义： O抗体出现较早，为IgM，持续时间短（约半年），消退后不易受非特异性病原刺激而重现。H抗体出现较晚，为IgG，持续时间长达数年，消退后易受非特异性病原刺激而重现。 ① O、H凝集价均超过正常值，则肠热症的可能性大：②若两者均底，肠热症的可能性小：③若O不高 H高，可能是预防接种或非特异性反应；④若 O高H不高，则可能为伤寒早期，或与其他沙门菌有交叉反应。

17 普通变形杆菌、奇异变形杆菌、产粘变形杆菌、潘氏变形杆菌
第五节 变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属 变形杆菌属： 普通变形杆菌、奇异变形杆菌、产粘变形杆菌、潘氏变形杆菌 普罗威登斯菌属：产碱普罗威登斯菌属、斯氏普 罗威登斯菌属等5个种 摩根菌属：就一个种 生化反应的共同特征 不发酵乳糖，苯丙氨酸脱氨酶阳性

18 一、生物学性状 形态染色：革兰阴性杆菌，可多形态，有周鞭毛。 培养特性：生长温度10-43℃。
　　普通平板、血平板上：普通、奇异变形杆菌大多呈迁徙生长，产粘变形杆菌可形成粘液状薄膜既溶血：普罗威登斯菌和摩根菌属无迁徙生长。 SS等选择培养基上：为产碱型菌落，产H2S着菌落中心黑色。

19 生化反应：均不发酵乳糖、苯丙氨酸脱氨酶阳性；
三属生化反应鉴别要点： 变形杆菌脲酶阳性，苯丙氨酸脱氨酶阳性； 变形杆菌种间区别： 抗原构造： 三菌属都有O、H、K三类抗原。 变形杆菌的O抗原（X菌株的OX19、OX2、OXk.）与立克次体有共同抗原，可发生交叉凝集。故临床上以变形杆菌X菌株O抗原与立克次体患者血清做定量凝集试验，辅助诊断立克次体病，此称外斐反应（Weil-felix test）.

20 二、致病性 变形杆菌：为条件致病菌，①可引起尿路感染、败血症；②创伤、烧伤、呼吸道等感染，为医院感染的主要病菌。③食物中毒，幼儿肠炎等。
普罗威登斯菌属及摩根菌属：为医院感染主要病菌，可引起尿路感染，伤口感染。

21 复习思考题 1.名词解释：KIA、MIU、V-W、Vi抗原、外斐反应。 2. 在KIA中怎样区别志贺菌和沙门菌？
3. 什么叫肥大反应？其实验原理如何？ 4. 沙门菌的鉴定依据有哪些？

22 变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属初步鉴定
检验方法与鉴定： 初步鉴定： 变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属初步鉴定 KIA MIU 苯丙氨酸脱氨酶 斜面 底层 产气 H2S 动力 吲哚 脲酶 普通变形杆菌 K A 奇异变形杆菌 K A — 产粘变形杆菌 K A (3d) — 产碱普罗威登斯菌 K A /- — — 斯氏普罗威登斯菌 K A — — / / 雷氏普罗威登斯菌 K A /- — 摩氏摩根菌 K A /- — /（28℃）

23 伤寒杆菌的致病与免疫 无 血培养 80% 抗体—/+ 病程进展 临床表现 标本采集 免疫性 菌血症、毒血症 （高热、不适、 全身疼痛）
潜伏期 伤寒、副伤寒杆菌 经消化道 肠 壁 淋 巴 组 织 无 第一周 经胸导管 血 液、骨 髓 经血液 菌血症、毒血症 （高热、不适、 全身疼痛） 血培养 % 骨髓培养 90% 抗体—/+ 细胞免疫开始 第二周 肝 脾 肾 胆囊 骨髓 再次 进入血液 持续高热、肝脾肿大、相对买缓、玫瑰疹 骨髓培养 % 粪尿培养20~85% 皮疹穿刺 60% 肥大反应 70% 抗体 ++ 细胞免疫建立 第三周 随胆汁 引起Ⅳ型超敏反应肠壁炎症出血坏死溃疡、易并发肠出血，肠穿孔 肥大反应 90% 抗体+++ 细胞免疫为主 第四周 病变愈合 体温恢复正常，食欲好转。可带菌 获牢固 免疫力

24 常见沙门菌的抗原组分 组 菌 名 O抗原 E2组 纽因顿沙门菌 3,15 e,h 1,6 H抗原 第一相 第二相
第一相 第二相 A 组 甲型副伤寒沙门菌 （PA） ,2, a B 组 乙型副伤寒沙门菌 (PB) ,4,5, b ,2 鼠伤寒沙门菌 ,4,5, i ,2 C1组 丙型副伤寒沙门菌（PC） ,7,Vi c ,5 猪霍乱沙门菌 , c ,5 汤仆逊沙门菌 , k ,5 C2组 纽波特沙门菌 , e,h ,5 D组 伤寒沙门菌 ,12,vi d 肠炎沙门菌 ,9, g,m E1组 鸭沙门菌 , e,h ,6 E2组 纽因顿沙门菌 , e,h ,6 E3组 山夫顿堡沙门菌 ,3, g,s,t F组 阿伯丁沙门菌 i ,2

25 沙门菌属细菌的初步鉴定 硝酸盐还原 MIU 触酶 氧化酶 诊断血清凝集
KIA 硝酸盐还原 MIU 触酶 氧化酶 诊断血清凝集 斜面 底层 产气 H2S 甲型副伤寒 K A / — A~F多价+ A群+ 乙型副伤寒 K A — A~F多价+ B群+ 丙型副伤寒 K A — A~F多价+ C群+ vi+ 猪霍乱沙门菌 K A / — A~F多价+ C群+ 伤寒沙门菌 K A / — A~F多价+ D群+ vi+ 其他沙门菌 K A — A~F多价+ 肠炎+

26 变形杆菌属、普罗威登斯菌属、摩根菌属鉴别要点
变形杆菌属 普罗威登斯菌属 摩根菌属 迁徙生长 — — 硫化氢产生 — — 液化明胶 — — 脂酶（玉米油） — — 西蒙枸橼酸盐 d — — 鸟氨酸脱羧酶 d — — DNA的G+Cmol% ~ ~

27 变形杆菌属细菌种间鉴别要点 奇异变形杆菌 产粘变形杆菌 潘氏变形杆菌 普通变形杆菌 吲哚试验 — — — + 鸟氨酸脱羧酶 + — — —
奇异变形杆菌 产粘变形杆菌 潘氏变形杆菌 普通变形杆菌 吲哚试验 — — — 鸟氨酸脱羧酶 — — — 麦芽糖 — 木糖 — H2S — / 对氯霉素敏感性 S S R S

28 变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属初步鉴定
KIA MIU 苯丙氨酸脱氨酶 斜面 底层 产气 H2S 动力 吲哚 脲酶 普通变形杆菌 K A 奇异变形杆菌 K A — 产粘变形杆菌 K A （3d） — 产碱普罗威登斯菌 K A / — — 斯氏普罗威登斯菌 K A — — / / 雷氏普罗威登斯菌 K A / — — 摩氏摩根菌 K A / — （28℃）

29 微量生化反应系统 Micro-ID系统 V P 4 2 1 — + — — + + + — — — + + + — —
硝酸 盐还原 苯丙氨酸脱羧酶 硫化氢 吲 哚 鸟氨酸 赖氨酸 丙二酸盐 尿 素 七叶甘 O N G 阿拉伯糖 侧金盏花醇 肌 醇 三 梨醇 4 2 1 — + — — — — — — — 相加所得数字： 查出相应细菌为：大肠埃希菌

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31 沙门菌（Mca） 大肠杆菌（Mca）

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