实验八 乙型肝炎病毒e抗原和 e抗体测定.

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1 实验八 乙型肝炎病毒e抗原和 e抗体测定

2 HBeAb:竞争抑制酶联免疫吸附实验原理。在微孔板上预包被乙肝e抗原, 加入待测样品及酶标抗体（HBeAb－HRP）试剂进行温育，酶标抗体和样品中的HBeAb竞争酶标板上的包被抗原。若样品中无HBeAb时，酶标抗体与包被抗原结合形成“包被抗原－酶标抗体”复合物，洗板后加入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应后变为黄色。若样品中存在HBeAb时，会与酶标抗体竞争形成“包被抗原－抗体”复合物，不显色。

3 HBEAG双抗体夹心法原理,在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体(HBeAb),配以酶标记抗体(HBeAb-HRP)及TMB显色剂等其它试剂,检测人血清或血浆中的乙肝表面抗原(HBeAg)

4 二、操作步骤： 1、配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。
2、编号: 将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3 孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同）。 3、加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照 50微升。 4、加酶：每孔加入酶标试剂50微升，空白孔除外,混匀。 5、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 6、洗涤：小心揭掉封板膜，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干 7、显色：每孔加显色剂A、B液各50微升，混匀，37℃避光显色15分钟。

5 结果判断: e抗原在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙肝E抗原阳性；无色者为乙肝E抗原阴性。 E抗体白色背景下观察各孔显色情况，HBeAb阳性无色；HBeAb阴性显色。

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20 一、实验原理： 1、HBeAg:双抗原夹心酶联免疫吸附实验原理。在微孔条上预包被乙肝e抗原(HBeAg), 加入待测样品及酶标抗原（HBeAg－HRP）试剂进行温育。样品中的HBsAb与包被抗原和酶标抗原形成“包被抗原－抗原－酶标抗原”复合物。洗板后加入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应后变为黄色。若样品中无HBeAg时，不显色。

21 2、HBeAb:竞争抑制酶联免疫吸附实验原理。在微孔板上预包被纯化乙肝e抗原(HBeAb), 加入待测样品及酶标抗体（HBcAb－HRP）试剂进行温育，酶标抗体和样品中的HBeAb竞争酶标板上的包被抗原。若样品中无HBeAb时，酶标抗体与包被抗原结合形成“包被抗原－酶标抗体”复合物，洗板后加入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应后变为黄色。若样品中存在HBeAb时，会与酶标抗体竞争形成“包被抗原－抗体”复合物，不显色。

22 2、编号: 将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3 孔、阳性对照2孔、空白对照1孔。
二、操作步骤： 1、配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 2、编号: 将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3 孔、阳性对照2孔、空白对照1孔。 3、加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50微升；非原倍样品（稀释样品、质控品等）加100微升。 4、加酶：每孔加入酶标试剂50微升，空白孔除外,混匀。 5、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 6、洗涤：小心揭掉封板膜，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干。 7、显色：每孔加显色剂A、B液各50微升，混匀，37℃避光显色15分钟。 8、测定：每孔加终止液50微升，混匀，10分钟内测定果。

23 三、结果判定： 1、在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为HBeAg阳性；无色者为HBeAg阴性。 2、在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为HBeAb阴性；无色者为HBeAb阳性。