细胞器的活体染色 洪玉制作.

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1 细胞器的活体染色 洪玉制作

2 活体染色 体内活体染色 活体染色 体外活体染色（超活染色）
超活染色：将活的动、植物分离出部分细胞或组织小块,以染料溶液浸染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

3 实验原理 1.活体染色 活体染色：是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色，但对该样品又没有毒害作用的一种染色方法。
目的：既显示活体细胞内的某些结构,又不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。 应用： 活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理,病理状态。

4 教学目的 掌握细胞内线粒体、液泡系等细胞器的活体染色方法 掌握光镜下线粒体、液泡系、高尔基复合体等细胞器的基本形态和他们在细胞内的分布

5 实验内容 兔子肝脏细胞的线粒体超活体染色 蟾蜍软骨细胞液泡系超活体染色 观察高尔基体

6 实验用品 仪器，用具：光学显微镜、载玻片、盖玻片、吸管、小镊子、吸水纸、手术器材一套、解剖盘、小平皿 。 材料：兔子、蟾蜍
试剂：1/300詹纳斯绿B染液；1/3000中性红染液；兔子Ringer液；蟾蜍Ringer液

7 一、兔子肝脏细胞的线粒体超活体染色 原理 碱性染料詹姆斯绿B是线粒体的专一活性染料。
线粒体在光镜下常呈颗粒状、棒状或弯曲的线状，其形态和数量随不同生物、不同组织及不同生理状态而发生变化

8 一、兔子肝脏细胞的线粒体超活体染色 实验步骤
取材：空气栓塞法处死兔子，立即剖腹取出肝脏，切取肝脏边缘较薄的肝组织一小块。 染色：放入盛有兔子Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，然后轻放到载玻片上。滴加詹纳斯绿B染液几滴，注意染液不要太多，要使肝组织的上半部分暴露在空气中，而不可使组织块完全淹没，这样细胞内线粒体的酶系可被充分氧化而使线粒体易于着色。染色处理的时间一般在30分钟左右，当组织块的边缘已染成蓝绿色时即可。 分离细胞：染色后，用镊子将组织块拉碎分离细胞，去掉稍大的组织块，使分离下来的细胞留在载玻片上，加一滴兔用的Ringer液，盖上盖玻片，吸去多余水分。 镜检：在油镜上可见肝细胞中的线粒体被染成蓝绿色，呈线条状或颗粒状，在细胞核周围分布较多。

9 镜 检

10 二、蟾蜍软骨细胞液泡系超活体染色 原理：动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、溶酶体、微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬泡，都是由一层单位膜包围而成。 但动物细胞内液泡系很小，不经过活体染色很难显示出来。 软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达的高尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原纤维等，因而液泡系发达。中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。

11 蟾蜍软骨细胞液泡系超活体染色实验步骤 取材：取一只蟾蜍，捣髓法处死，剪开胸腔，取胸骨剑突软骨最薄部分的一小片，放在载片上。
染色：滴两滴1／3000中性红染液，染色15分钟，用吸水纸吸去染液，加一滴鼠的0.65%Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余Ringer氏液。 镜检：显微镜下观察，可见软骨细胞椭圆形，细胞核周围有许多染成玫瑰红色． 小不一的小泡，即软骨细胞液泡系。

12 蟾蜍取材部位 剑状软骨

13 三、高尔基复合体的观察 取兔脊神经节横切片，先用低倍镜观察，兔脊神经节的切面呈椭圆形，染成黄色，在脊神经节内有大量圆形的神经细胞。
高倍镜观察，神经细胞的切面呈椭圆形，中央有一圆形透明的部分是细胞核的位置，在细胞核周围的细胞质里（染成黄色），分散着许多染成黑褐色的点状、棒状或卷曲的线状结构，这就是高尔基体。

14 高尔基体的观察 细胞核 核仁 高尔基体

15 作 业 绘制2-3个兔肝脏细胞的线粒体图 绘制2-3个蟾蜍软骨细胞的液泡系兔 绘制1个兔子脊神经节细胞的高尔基复合体图