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費洛蒙的抽取與分離 賀孝雍
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費洛蒙的來源 雌蟲還是雄蟲？還是兩者都釋放？ 是由身體的拿個部位釋放？腹部？胸部？ 是否有特殊的腺體？
是直接釋放費洛蒙，還是腺體中的成分，進一步變化成具揮發性的化合物？ 需要知道何時釋放費洛蒙？持續釋放？還是有calling 的時段？ 測量一下釋放的量大約是多少？
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抽取時的注意事項 費洛蒙的量很少，所以要注意 抽取時的損失。 是否會有化學變化？ 是否會被污染？ 例如：酸？鹼？氧化？酵素作用？
例如：溶劑中的雜質，塑膠製品中的增塑劑等等
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抽取的方法 用溶劑淬取 通常是把蟲體磨碎，用適當極性的溶劑溶解，過濾，然後濃縮。
溶劑的選擇，因為不知費洛蒙的性質，通常要用不同極性的溶劑，有極性低的開始，然後逐漸升高極性。 一般會用費點滴的溶劑，比如說戊烷，二氯甲烷。 為了減少溶劑中不純物的干擾，溶劑通常要先經過蒸餾。
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溶劑抽取 整隻蟲體的淬取： 腺體的淬取： 產卵管腺體的浸洗：將蛾類的腺體擠出來，浸泡在己烷或庚烷中。
優點是不需要先知道是蟲體的哪一部份釋放費落蒙； 缺點是會有很多很多的雜質。 腺體的淬取： 優點是不會有太多的雜質 缺點是要預先知道釋放費落蒙的腺體位置，而且需要有解剖的技術。 產卵管腺體的浸洗：將蛾類的腺體擠出來，浸泡在己烷或庚烷中。
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溶劑 先蒸餾過再用， 乙醚中有一種安定劑，戊烷中有其他的碳水化合物。 橡皮塞，塑膠製品盡量少用 用鐵福龍，不要用paraffin tape
常用的溶劑： 非極性：pentane, hexane 中極性：dichloromethane 高極性：methanol
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溶劑 要先蒸餾過再用。 不要使用任何塑膠器具。 所有的玻璃器皿要非常乾淨。 不要用任何潤滑劑，只用teflon。
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抽氣法 蟲子還活著，抽氣的方法可以抽很久 抽氣的方法，抽到的是實際釋放出來的化合物而不是前驅物。
提供食物，會有食物的味道，所以還要做一個只有食物的對照組。 空氣要經過純化，把雜質去掉。最常用活性炭過濾空氣。
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抽氣法
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Cold trapping 用液態氮或其他低溫方法的溫度冷凝費落蒙： 固體吸附 會有水氣一起冷凝下來。
用活性炭， porapak-Q, Tenax （是多孔性高分子聚合物） 然後用有機溶劑洗下來，或是熱反吸附法。但是會有化合物變質的顧慮。
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固體抽氣法
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SPME (Solid phase microextraction)
固相淬取 No solvent required
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分離的方法 蒸餾法： 層析法： 把多餘的溶劑蒸餾出來，或是把要的成分蒸餾出來，以便和高沸點的脂肪類，蠟質分開。
TLC:展開後，將要的成分，刮下後，用有機溶劑溶出。 Column chromatography: Sep-pak不需要自己填充，有現成的可用，注意要用玻璃管柱。
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分離的方法 GC： 樣品注入後揮發，根據樣品與管柱上的成分吸附力的差異，而分開。
根據要分析樣品的成分，決定要使用的管柱。eg. Db-1, db-5, db-17, db-wax 等等 偵測器使用最多的是火焰偵測器。FID, 適用於任何化合物。靈敏度高，對水，二氧化碳，載體氣體都沒有反應。不受溫度，氣體流速等的影響，基線很穩定。 用在定量時，也有一致性。 缺點是：樣品被燒掉了。
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GC 適合分析費洛蒙的原因 分析高揮發性的成分 速度快 解析度高 可以定量 如果將樣品流出時，分成兩邊，則可以邊偵測，邊收集樣品。
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分離的方法 HPLC： 用來分析高極性，低揮發性，或是對熱不穩定的化合物。 靈敏度不如 GC 偵測器是ＵＶ，或是折光率（ＲＩ）。
ＵＶ 只能偵測有ＵＶ吸收的化合物。 ＲＩ可以偵測所有化合物。 有 normal phase, reverse phase 的管柱。 用在分離並取得樣品上，很有用。
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生物檢測 用ＨＰＬＣ分離後得到的每一管，都要做生物檢測。 ＧＣ的話可以同時測每一個成分對昆蟲觸角，有沒有反應。
可以馬上在眾多成分中找到有效成分。有時在ＦＩＤ是很小的，但是蟲子觸角的反應卻是很大。因此找到費洛蒙，
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GC-EAD
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結構鑑定 物理方法 ＧＣ─ＭＳ ＩＲ ＵＶ─ＶＩＳ ＮＭＲ 化學方法 製作各種衍生物
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ＧＣ─ＭＳ ＭＳ 是靈敏最高的方法 可以得知：分子量，元素結構，構造相關資訊。
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分子量 高解析度的質譜儀，量到小數點5位， 分子量同樣是58的丙酮和丁烷，就可以分出來 丙酮：C3 H6 O 丁烷： C4 H10
3 x C = 6 x H = 1 x O = 總共 丁烷： C4 H10 4 x C = 10 x H = 總共 推測分子式
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質譜儀的構造與原理
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質譜圖 1
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質譜圖 2
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質譜圖 3
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三張質譜圖的比較
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ＩＲ 圖譜
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ＮＭＲ 圖譜
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鑑定 GC/MS: GC分出來的，用MS鑑定 GC/IR: 官能基 NMR: 結構的細節
製作衍生物，來鑑定。
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化學方法 困難在於費洛蒙量很少，易受雜質干擾。 反應之後，就沒有該費洛蒙了。 只要很少的量就可以做反應了，做衍生物，對該化合物有所瞭解。
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