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生物化学实验讲义
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主编 龚美珍 刘士平
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三峡大学化学与生命科学学院
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目 录
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生物化学实验须知 1．实验室规则 2．实验记录 3．实验报告的书写 4．生物化学实验课评分标准
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实验室一些常用知识介绍 一．玻璃仪器的洗涤及一些常用的洗涤剂 二．生物化学常用缓冲液 三．pH 值的测定 1. 玻璃仪器的洗涤
2. 一些常用的洗涤剂 二．生物化学常用缓冲液 1. 磷酸盐缓冲液 2.Tris缓冲液( 三羟甲基氨基甲烷) 3. 硼酸盐缓冲液 4. 氨基酸缓冲液 三．pH 值的测定
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实验一 糖的颜色反应
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一、实验目的
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、了解糖类的某些颜色反应的原理
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、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法
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二、实验原理
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、莫氏（Molisch）试验
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糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生产糠醛或糠醛衍生物，后者能与a-萘酚生成紫红色缩合物。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。
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、塞氏（Seliwanoff）试验
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在浓酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮糖的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或加热时间较长时，才呈微弱的阳性反应。在实验条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应。
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、杜氏（Tollen）试验
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三、实验器材
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四、试剂
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、莫氏（Molisch）试剂：5%a-萘酚的酒精溶液，称取a-萘酚5g，溶于95%酒精中，定容至100ml,贮藏于棕色瓶中。此试剂需新鲜配制
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、塞氏（Seliwanoff）试剂：称取0.05g间苯二酚溶于30ml浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100ml,此试剂需新鲜配制。
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、杜氏（Tollen）试剂：2%间苯三酚乙醇（95%）溶液3ml，缓慢加入浓盐酸15ml及蒸馏水9ml即得，此试剂需新鲜配制。
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、材料：1%葡萄糖溶液，1%果糖溶液，1%蔗糖溶液，1%淀粉溶液，1%阿拉伯糖溶液，1%半乳糖溶液,0
、材料：1%葡萄糖溶液，1%果糖溶液，1%蔗糖溶液，1%淀粉溶液，1%阿拉伯糖溶液，1%半乳糖溶液,0.1%糠醛溶液，浓硫酸500ml，浓盐酸500ml
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1、莫氏（Molisch）试验：于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、
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2、塞氏（Seliwanoff）试验：于3支试管中，分别加入0. 5ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，各加入塞氏试剂2
2、塞氏（Seliwanoff）试验：于3支试管中，分别加入0.5ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，各加入塞氏试剂2.5ml，摇匀，置沸水浴中，比较各管颜色变化及红色出现的先后次序。
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、杜氏（Tollen）试验：于3支试管中各加入杜氏试剂1ml，再于3支试管中分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液，混匀。将3支试管同时放入沸水浴中，观察颜色变化，并记录颜色变化的时间。
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实验二 糖的化学性质
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一、实验目的
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淀粉和蔗糖缺乏自由醛基（苷羟基）无还原性。但在酸的作用下，淀粉和蔗糖很容易水解成为糊精及少量麦芽糖、葡萄糖，使之具有还原性。淀粉溶液遇碘呈蓝色。
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班乃德（Benedict）试剂为含Cu2+ 的碱性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，其本身则被还原成红色的Cu2O。
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三、实验器材
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1、试管及试管架 2、滴管 3、水浴锅
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四、试剂
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1、Benedict试剂：称取85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠溶于400ml水中。另称取8
1、Benedict试剂：称取85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠溶于400ml水中。另称取8.5g硫酸铜溶于50ml热水中。将硫酸铜溶液缓慢加入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀可过滤。
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2、2%葡萄糖溶液、2%蔗糖溶液、2%麦芽糖溶液、1%淀粉溶液
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3、2%硫酸、10%NaOH溶液、0.1%碘液
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五、操作
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实验三：还原糖和总糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法）
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实验四：还原糖和总糖的测定（费林试剂法）
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实验五：果胶的提取和果酱的制备
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实验六：卵磷脂的提取、鉴定和应用
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实验七：油脂碘价的测定（韦氏法）
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实验八：油脂过氧化值的测定
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实验九：油脂酸价的测定
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实验十：蛋白质的变性、凝固及
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沉淀反应
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实验十一：蛋白质的颜色反应
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实验十二：氨基酸总量(氨态氮)的测定
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