Date: Speaker: Wei-Yu Lee

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1 Date: 101210 Speaker: Wei-Yu Lee
生物科技，教我賺大錢! Date: Speaker: Wei-Yu Lee

2 生技新藍海 生科畢業後賺錢的頭路 重組蛋白質的製備: PCR 擴增 DNA restriction enzyme 剪切
DNA & plasmid 黏合 Transformation Transformation 成功與否 的初步確認 　　 Colony PCR 　　 Plasmid 大小確認 基因定序、結果比對 存菌 需要時大量表現 Money! Money!

3 限制酶、DNA、Plasmid restriction enzyme 剪切 蛋白質重組技術: PCR 擴增 DNA
Transformation Transformation 成功與否的初步確認 　　 Colony PCR 　　 Plasmid 大小確認 基因定序、結果比對 存菌 需要時大量表現 Money! Money!

4 Ligation DNA & plasmid 黏合 Transformation 蛋白質重組技術: PCR 擴增 DNA
restriction enzyme 剪切 DNA & plasmid 黏合 Transformation Transformation 成功與否的初步確認 　　 Colony PCR 　　 Plasmid 大小確認 基因定序、結果比對 存菌 需要時大量表現 Money! Money!

5 Transformation 成功與否的初步確認 Colony PCR Plasmid 大小確認 基因定序、結果比對
蛋白質重組技術: PCR 擴增 DNA restriction enzyme 剪切 DNA & plasmid 黏合 Transformation Transformation 成功與否的初步確認 　　 Colony PCR 　　 Plasmid 大小確認 基因定序、結果比對 存菌 需要時大量表現 Money! Money!

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7 存菌 解凍的速度? 培養液 抗凍劑 慢慢來 極低溫 (-80℃)(反應全部停止!) 控制冰晶生成大小、速度 增加細胞膜的水滲透性
降低細胞內容物的凝結點 Total: 1 mL 菌液: mL 甘油: 0.25 mL 甘油最終濃度? 解凍的速度? 蛋白質的大量表現 p30

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9 ? 培養液? 小量培養 overnight 加入大量培養液，再培養約 1 hr. 偵測OD600= 0.6~0.8 p30 細菌數目的對數
時間

10 ? 培養液? IPTG 誘導蛋白表現， 4 hr. 小量培養 overnight 加入大量培養液，再培養約 1 hr.
偵測OD600= 0.6~0.8 IPTG 誘導蛋白表現， 4 hr. 離心，收集細菌 破菌 蛋白純化

11 Lac operon

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13 我是E.coli---你的印鈔機 p.26 T7 lysozyme

14 我是E.coli---你的印鈔機 p.26 T7 lysozyme ＄ ＄ T7 gene T7 polymerase ＄

15 破菌 小量培養 overnight 加入大量培養液，再培養約 1 hr. 偵測OD600= 0.6~0.8
IPTG 誘導蛋白表現， 4 hr. 離心，收集細菌 破菌 DNase? 蛋白純化

16 Money 不夠啦! 怎麼純化蛋白呢? P.36 真實人生 生技世界 後母 & 灰姑娘 酵素 & 受質 周瑜 & 諸葛亮 抗體 & 抗原
台商 & 二奶 宅男 & 大元、豆花妹 酵素 & 受質 抗體 & 抗原 激素 & 受體 RNA & 互補 DNA Money 不夠啦!

17 His-tag? 蛋白純化 蛋白濃縮 p.44

18 流程說明 P.39: F1、W1、W2、E1、E2 濃縮: E1、E2 10K His-tag imidazole (p.67) 今天:
離心 (1800 rpm., 2 min.) 1mL 水 加入管柱，手動式搖 5 min. (1800 rpm., 2 min.) Step 2 again 加入 20% EtOH 1mL 保存 在 處，用石蠟封口 10K

19 愛注意喔! 下次實驗步驟繁瑣，不上課，直接開始 預報完成實驗三、四 下禮拜交實驗二結報，一、二的部分 p.33