06 生化工程應用 E. coli 大腸桿菌之生長曲線

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1 06 生化工程應用 E. coli 大腸桿菌之生長曲線
實驗操作日期： 報告者：化工所研一陳克強 黃智銘

2 實驗流程 挑菌， 培養基選擇 Overnight culture Autoclave Shaking bath 培養 分光光度計測量細菌濃度
數據分析

3 Autoclave（滅菌）--Autoclave之目的
生物工程的實驗要求精確，稍一點污染便會導致失敗，來自外界無數看不見的菌類，都可能在操作時造成污染，為確保實驗儀器、設備無菌，在使用前必須先加以滅菌。

4 Autoclave（滅菌） --操作條件 溫度---120～125℃ 壓力---2 atm

5 Autoclave（滅菌）--操作時間 固體---25～30分鐘 液體---15分鐘

6 medium（培養基） M9 mediuml： LB medium：
Na2HPO4‧7H2O 磷源 KH2PO 磷源 NaCl NH4Cl 氮源 MgSO 硫源 CaCl2 glucose 碳源 有時Na、K、Mg、Ca等金屬離子可作為Coemzyme （輔）其所需量很少。 LB medium： Tryptone-b Yeast extract-B NaCl

7 養菌挑菌 (一) 為避免挑菌時污染菌種，以經滅菌的木棒摘取，為避免木棒受污染，必須小心拿取木棒末端。

8 養菌挑菌 (二) 以木棒挑取固態培養基上的一個菌落 （E. coli VJS676），置入含有medium的試管中。

9 Overnight culture 旋轉式震盪機中以37℃、轉速：85 rpm，作隔夜培養，一般培養12-16小時。

10 殺菌： 高溫高壓﹝125℃ ~140℃ ﹞ heat sterilizer, auto clave
化學藥品 酒精，detergent﹝SDS…等﹞ 過濾

11 Fig. 11.1

12 Fig. 11.2a

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15 Fig. 11.2d

16 Fig

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19 三角錐形瓶shaking bath培養 300ml三角錐形瓶中加入30 ml LB medium於shaking bath中，用37℃，108 rpm轉速培養起始濃度設定為0.05（以O.D.值表示），故於Overnight culture所得之菌中，取出0.442ml 菌液，加入錐形瓶中培養。

20 測量O.D----抽樣 抽樣—每隔30分鐘以滴管吸取樣品1ml於比色槽中。

21 Determining cell mass dry weight optical density (O.D.) spectrophotometer O.D. 550 O.D. 600

22 Fig. 7.17

23 Fig. 7.18

24 Fig. 7.19

25 測量O.D. ----量測 利用分光光度計測量於O.D. 600nm時的吸收度。

26 圖表.1 Growth curve of cell Time (hr)

27 計算： Maximum growth rate …………….(1) …….(2) when is constant
由plot log OD vs. t The greatest slope in linear region: 由實驗數據得知:

28 計算： ＝doubling time of cells …………….(3) occurs when …………….(4)