植物組織自由基之偵測 植物生理學實驗 10 ROS detection in plants 授課教授：傅士峯老師 助教：呂學宇、張凱雅

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1 植物組織自由基之偵測 植物生理學實驗 10 ROS detection in plants 授課教授：傅士峯老師 助教：呂學宇、張凱雅
值日組：G9 104/11/25

2 實驗目的 自由基與植物之抗逆性和衰老有密切關係，藉由觀察偵測植物病死斑中的自由基，了解植物防禦病害的現象與機制
了解植物組織中自由基測定的原理與方法

3 實驗原理

4 檢測過氧化氫－DAB 染色法 過氧化氫藉由過氧化氫酶 (Catalase, CAT) 的催化產生氧氣與水，同時過氧化物酶 (Peroxidase, POD) 藉氧氣使無色的 DAB 氧化形成棕色沉澱，並定位於過氧化氫累積位置 (無色) (棕色)

5 In situ detection of H2O2 by DAB

6 In situ detection of H2O2 by DAB

7 In situ detection of H2O2 by DAB

8 In situ detection of H2O2 by DAB

9 In situ detection of H2O2 by DAB

10 預期結果 tobacco

11 實驗步驟 製備 H2O2 檢測液 注射 DAB 與反應 退染與實驗結果 配置 10mM MES buffer pH6.5 (現配)
配置 0.2% DAB 溶液 (溶解於 MES buffer) 注射 DAB 與反應 葉片受傷部位用針筒注射 DAB 溶液 將注射過的葉片剪下，放入培養皿（裝水少許） 鋁箔紙包覆避光，室溫反應８小時 退染與實驗結果 葉綠素退染：浸泡 95% 酒精／室溫／搖晃一天 （值日組，G９） 結果觀察：W5 各組至植物基因工程實驗室觀察染色結果

12 問題討論 請說明為何受傷的組織中，自由基的含量明顯較其他組織中的含量高？（可不抄題）

13 報告繳交 報告格式：實驗目的、原理、結果、問題討論、補充資料、心得 繳交期限：下週 (12/02) 課程結束前

14 The End