Download presentation
Presentation is loading. Please wait.
1
组织化学实验 实验十五、小鼠肝糖原染色——PAS反应 实验十六、小鼠肝/肠核酸染色——Feulgen反应
2
实验目的 1.了解PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）的基本原理，掌握PAS染色法的技术方法及其应用。
2.了解孚尔根染色法的基本原理，掌握孚尔根染色法的技术方法及其应用。
3
小鼠肝糖原染色——PAS反应 糖原是由多个葡萄糖组成的带分枝的大分子多糖，形状为大小不等的颗粒，遇碘则变褐色，易溶于水。
动物细胞内贮存的多糖，完全由葡萄糖组成。在动物体内以肝脏和骨骼肌中储量最丰富，与淀粉在植物中的作用相当。 肝糖原分解主要维持血糖浓度，肌糖原分解为肌肉自身收缩供给能量。
4
利用强氧化剂使多糖产生游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。因此在有多糖的部位，就会呈现除紫红色阳性反应。
PAS （Periodic Acid Schiff ） 反应的基本原理 利用强氧化剂使多糖产生游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。因此在有多糖的部位，就会呈现除紫红色阳性反应。
6
Schiff氏试剂的制备 将0.5g碱性品红置入三角烧瓶内沸腾的蒸馏水中，时时摇动玻璃瓶，煮沸5min使之充分溶解，冷却至50℃时过滤，加入10ml 1M HCl，冷至25℃时，加入0.5g偏重亚硫酸钠(Na2S2O3)或无水亚硫酸(NaHSO3)，在室温冷暗处至少放置24h(有时需2~3天)，使其颜色退至淡黄色，密封瓶口，藏于暗处，最好保存于4℃冰箱中(可保存数月或更长时间)。在使用前加入0.5g活性碳, 摇1min, 用粗滤纸过滤，滤液应为无色；若液体颜色变为粉红色，便不能再用。
7
PAS反应的应用 可用于证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ，心肌病变及其他心血管疾病的诊断 ，糖原累积病诊断和研究 ，糖尿病的诊断和研究 ，用于某些肿瘤的诊断等。在临床诊断、分类和治疗具有重要的意义。
8
实验材料 1) 组织切片(70%酒精中)，鸭血涂片 2) 过碘酸液 3) Schiff氏液 4) 0.5%偏重亚硫酸盐溶液
5) 苏木精染色液
9
实验步骤（ PAS反应） 1. 将石蜡切片（已保存于70%酒精中）移入50%酒精复水5 min
5. Schiff 试剂中放置 20 min; 6. 亚硫酸盐溶液浸洗，3次， 每次2 min; 7. 流水冲洗5 min（避免流水直接冲洗有组织的部位）, 蒸馏水过一下; 8. 用苏木精复染细胞核10 min ; 9. 流水冲洗5 min （避免流水直接冲洗有组织的部位），蒸馏水浸泡1 min，吸干; 10. 甘油封片; 11. 显微镜观察。
10
结果分析 PAS阳性呈不同程度的紫红色，细胞核蓝色。
11
Feulgen反应(Feulgen reaction)
是显示DNA的最典型的组织化学反应，为学者Feulgen于1924年发明，简称为Feulgen法。因对DNA的显示反应具有高度专一性，故常被用来显示细胞内DNA的分布情况。
12
Feulgen反应的基本原理 稀HCl水解DNA，破坏嘌呤 和脱氧核糖间的配糖键， 并在脱氧核糖C1端形成游 离的醛基，醛基和Schiff
试剂结合，形成紫红色的 化合物。因此在有DNA的 部位，就会呈现除紫红色 阳性反应。
13
实验步骤（ Feulgen反应） 1. 将石蜡切片（已保存于70%酒精中）移入50%酒精复水5 min
3. 1 mol/L HCl溶液(室温) 1min; 4. 换入预热60℃的1 mol/L HCl 中水解10 min （对照实验用蒸馏水浸泡） 5. 1 mol/L HCl溶液(室温) 1 min; 6. 蒸馏水稍洗; 7. Schiff试剂避光染色30 min; 8. 亚硫酸盐溶液浸泡3次，每次2 min; 9. 流水冲洗5 min，蒸馏水洗片刻; 10. 用1%亮绿水溶液复染5-10秒; 11. 流水冲洗5 min ，蒸馏水浸泡1 min，吸干; 12. 甘油封片，显微镜观察。
14
结果分析 Feulgen阳性细胞核呈紫红色，细胞质和核仁被亮绿复染成浅绿色。
15
实验报告及思考题 1. 描述显微观察到的实验现象； 2. 肝脏组织切片PAS染色无阳性结果有哪些原因？
3. 肝脏组织切片孚尔根染色无阳性结果有哪些原因？ 4. 在实验过程中，过碘酸处理能起到什么作用，它与 Feulgen反应中HCl的作用有何异同？
Similar presentations
