本次实验的内容 实验五 细菌的简单染色法 实验六 细菌的革兰氏染色法 实验七 细菌的芽胞染色法 实验八 细菌的荚膜染色法.

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1 本次实验的内容 实验五 细菌的简单染色法 实验六 细菌的革兰氏染色法 实验七 细菌的芽胞染色法 实验八 细菌的荚膜染色法

2 微生物染色的基本知识 一 微生物染色的意义 1 进行微生物研究的基本技术; 2 微生物形态特征观察的基本方法;
3 不同形态微生物鉴别的基本技能。 二 微生物染色的染料 ① 碱性染料（basic dye）—电离后为带正电荷的阳离子，可与细胞中带负电的组分结合。如Crystal violet, Safranin, Methylene blue，malachite green等。 ② 酸性染料（Acid dye）—电离后为带负电荷的阴离子，可与细胞中带正电的组分结合。如Eosin, Congo red , Acid fuchsin 等。 ③ 脂溶性染料—如Sudan black。

3 细菌染色的方法

4 实验五 细菌的简单染色法 一 目的与要求 1 掌握细菌的简单染色法 2 初步认识细菌的形态 3 巩固油镜的使用方法 二 基本原理
实验五 细菌的简单染色法 一 目的与要求 1 掌握细菌的简单染色法 2 初步认识细菌的形态 3 巩固油镜的使用方法 二 基本原理 碱性染料电离后带正电能与带负电荷的细菌结合合,使其着色。 三 主要器材 1 枯草芽胞杆菌( 12~18h培养物) 2 吕氏碱性美兰染色液 3 仪器与用具(略) 染色方法 见下图

5 实验五 细菌简单染色的操作步骤 沾取菌样 涂片 干燥 固定 水洗、吸干 镜检 染色2min

6 五 染色结果 枯草芽胞杆菌示意图 六 注意事项 1 菌龄合适。 2 注意涂片均匀，不宜过厚。

7 实验六 细菌的革兰氏染色法 革兰氏阳性菌：紫色 革兰氏阴性菌：红色 一 目的与要求 1 掌握细菌的革兰氏染色法
实验六 细菌的革兰氏染色法 一 目的与要求 1 掌握细菌的革兰氏染色法 2 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性 二 基本原理 革兰氏染色法基本步骤：涂片固定 结晶紫初染色 碘液媒染 乙醇脱色 番红复染 革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性(G-)表现出不同染色反应的根本原因在于它们的细胞壁结构存在差异。 革兰氏阳性菌：紫色 革兰氏阴性菌：红色

8 革兰氏阳性、阴性菌细胞壁结构的差异 Structure of a Gram-Positive Cell Wall Structure of a Gram-Negative Cell Wall

9 实验六 细菌的革兰氏染色法 涂片制作 涂片固定 结晶紫初染2min 碘液媒染1min 乙醇脱色30sec 番红复染2min 三 主要器材
实验六 细菌的革兰氏染色法 三 主要器材 1 金黄色葡萄球、大肠杆菌(约24培养物) 2 结晶紫、番红染色液 染色方法 涂片制作 涂片固定 结晶紫初染2min 水洗 碘液媒染1min 水洗 乙醇脱色30sec 水洗 番红复染2min

10 五 染色结果 六 注意事项 革兰氏阳性菌——紫色 革兰氏阴性菌——红色 1 菌龄合适。 2 注意涂片均匀，不宜过厚。
五 染色结果 革兰氏阳性菌——紫色 革兰氏阴性菌——红色 六 注意事项 1 菌龄合适。 2 注意涂片均匀，不宜过厚。 3 注意控制好脱色程度。

11 实验七 细菌的芽胞染色法 一 目的与要求 1 掌握细菌芽孢染色的方法及原理 二 基本原理 芽胞的简介；芽孢染色的原理； 三 主要器材
实验七 细菌的芽胞染色法 一 目的与要求 1 掌握细菌芽孢染色的方法及原理 2 初步了解芽孢杆菌的形态特征 二 基本原理 芽胞的简介；芽孢染色的原理； 三 主要器材 1 枯草芽胞杆菌(约2d的培养物) 2 5%孔雀绿、0.5%番红染色液 四 实验操作步骤（改良的Schaeffer-Fulton染色法) 1 菌液制备：取2滴生理盐水或蒸馏水于EP管中，沾取菌苔2环在水中混匀。 2 染色：EP管中加入5%孔雀绿3滴混匀，将在沸水浴中加热15~20min。 3 涂片固定：过火焰固定。 4 脱色：水洗至无绿色。 5 复染：0.5%番红染色3min。 6 镜检：油镜观察，绘出显微镜下观察到的结果。

12 五 染色结果 兰绿色部分为芽胞；红色部分为菌体和孢囊 六 注意事项 1 注意掌握供试验菌种的培养时间。 2 制备菌液时，取菌量适宜。

13 实验八 细菌的荚膜染色法 一 目的与要求 掌握细菌荚膜染色的方法及原理 二 基本原理 三 主要器材
实验八 细菌的荚膜染色法 一 目的与要求 掌握细菌荚膜染色的方法及原理 二 基本原理 荚膜不易着色，且易被水洗，采用衬托染色使菌体和前景着色，荚膜在菌体周围形成一透明圈。 三 主要器材 1 胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus，俗称“钾细菌”）无氮培养 基约2d的培养物。 2 绘图墨水（用滤纸过滤后的绘图墨水稀释1倍使用）。 四 实验操作步骤（湿墨水法) 1 制菌液：加1滴墨水于洁净的载玻片上，挑少量菌体与其充分混合均匀。 2 加盖玻片：放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向 下轻压，吸去多余的菌液。 3 镜检：先用低倍镜、再用高倍镜观察。 结果：背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即为荚膜。

14 五 染色结果 透明部分为荚膜 六 注意事项 1 注意掌握供试验菌种的培养时间。 2 控制好墨水的稀释倍数。