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肝脏谷丙转氨酶活力测定

一、实验目的 掌握谷丙转氨酶的测定方法。 二、实验原理 谷丙转氨酶作用于丙氨酸及 α- 酮戊二酸,生成谷氨酸与丙 酮酸。丙酮酸与 2.4- 二硝基苯肼作用,生成二硝基苯腙,此 物在碱性溶液呈红棕色,与经同样处理的标准丙酮酸比色, 求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。

三、实验器材 1. 剪刀 或 组织捣碎机 ℃水浴 3. 分光光度计( 520nm ) 4. 比色皿 5. 计算纸( 9 cm×9 cm )

四. 实验试剂 1. 标准丙酮酸 现配 2. 谷丙转氨酶底物 4 ℃, 1 周 3.0.1M pH7.4 PB % 2,4- 二硝基苯肼溶液 5.0.4M NaOH 6. 新鲜肝脏(或取小白鼠肝脏)

五、实验步骤 1. 肝匀浆 处理: 20g 肝先用生理盐水洗净,滤纸吸干水,再用预冷的 0.1M pH7.4 PB 捣 碎,并定容至 200ml ,供全班用 2. 谷丙转氨酶活力的测定 1 )取 4 支试管,标注名称,按照下表操作 2 )计算酶活力 本法规定:酶在 37 ℃ 与底物作用 30 分钟,产生 2.5μg 丙酮酸为一个谷丙转氨 酶活性单位。

五、实验步骤 3. 计算 1 )每 ml 肝匀浆谷丙转氨酶活力单位( U/ml ) D = ( A—B ) × 500 S ×2.5 2 )每 g 肝脏谷丙转氨酶活力单位( U/g ) D’ = D × 200 / 20 说明: A :样品 A 520nm B :对照 A 520nm S :标准 A 520nm 500 :标准丙酮酸浓度 2.5 :谷丙转氨酶换算单位 200 : 200ml 肝匀浆 20 : 20g 肝

五、实验步骤

六. 附注  2.4- 二硝基苯肼与丙酮酸的颜色反并不是特异性的, α- 酮戌二酸也能与 2.4- 二硝基苯肼作用而显色。  2.4- 二硝基苯肼身也有类似的颜色,因此空白管颜色较 深。