东北师范大学生物基础实验教学中心 生物化学实验——电泳技术 张丽萍 魏春雁

前 言 1937年，瑞典科学家Tiselius设计了世界上第一台电泳仪，建立了移界电泳法，并于1948年荣获诺贝尔奖。70年以来，电泳技术围绕制胶、电泳、染色三个技术环节，不断改进，以实现下列目标： 1、提高分辨率及灵敏度。 2、简化操作，缩短电泳时间。 3、扩大应用范围。 各类电泳技术已广泛应用于生命科学各个领域。

教学目的 掌握电泳技术的基本原理。 掌握 PAGE不连续系统分离血清Pr的原理与技术。 掌握酶活性染色法, 鉴定过氧化物酶同工酶 乳酸脱氢酶同工酶的原理。 掌握SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理和技术。 学习电泳前沿技术等电聚焦电泳、双向凝胶电泳电泳、毛细管电泳原理及应用。 了解电泳相关技术的原理及应用。 凝胶成像技术 凝胶印渍转移技术 凝胶干燥技术 凝胶扫描技术

目录 1.电泳技术的基本原理 2.PAGE不连续系统分离Pr的原理 3.醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白 5.酶活性染色法鉴定过氧化物酶同工酶 6.SDS-PAGE测定蛋白质分子量 7.等电聚焦电泳 8.双向凝胶电泳

目录 9.高效毛细管电泳(HPCE) 10.电泳相关技术（凝胶成像技术、凝胶印渍转移技术、凝胶干燥技术、凝胶扫描技术） 11.注意事项 12.参考文献

1.电泳技术的基本原理 电泳：带电粒子在电场中的定向移动。

1.电泳技术的基本原理 V:泳动速度cm/秒or分 d:泳动距离cm t:电泳时间 (秒/分) E:电场强度 伏特/cm u:泳动率or泳动度(cm/伏·秒or分) U:电压 常压(100—500v) 高压(500—10000v)仅需几分钟 l:支持场的长度 (有效长度)

1.电泳技术的基本原理 影响泳动率u的因素 内因：1.净电荷 2.质点大小 3.质点形状 外因：1.V ( U/L) 2.缓冲液的pH (pH恒定) 3.离子强度[I] 最适:0.02-0.2 4.电渗：液体对固体支持物的相对移动

1.电泳技术的基本原理 电泳类型 ⑴区带电泳 纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、粉末电泳、细丝电泳、凝胶电泳。 凝胶电泳包括：琼脂糖凝胶、淀粉凝胶、硅胶凝胶、聚丙烯酰胺凝胶 聚丙烯酰胺凝胶电泳包括：垂直板、盘状、等电聚焦、梯度、免疫电泳 ⑵自由界面电泳 支持物为溶液，很少用。 返回

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(N,N-methylene-bisacylamide,简称Bis)在加速剂 N,N,N,N-四甲基乙二胺(N,N,N,N-tetram-ethyl ethylenedia mine，简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(ammonium persulfate (NH4)2S2O3，简称AP)或核黄素(ribofavin即vita min B2,C17H2O6N4)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)。

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 光聚合：核黄素为催化剂(阳光,日光)，制大孔胶。 化学聚合：制小孔胶。 过硫酸铵(NH4)2S2O3 APS (引发剂) N,N,N’,N’-四甲基乙二胺 TEMED (加速剂)

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 反应方程式： NH NH 丙烯酰胺 N,N’-甲叉（亚甲基）双丙烯酰胺 聚丙烯酰胺 CH2=CH—CONH2 + —CH2—CH—[CH2—CH]x—CH2— CONH2 C=O CH2 NH O NH CH2 丙烯酰胺 N,N’-甲叉（亚甲基）双丙烯酰胺 聚丙烯酰胺

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 三种物理效应 ⑴样品浓缩效应 ⑵分子筛效应 ⑶电荷效应

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 样品浓缩效应：由凝胶系统的不连续性产生。 ①凝胶孔径不连续性 ②缓冲液离子成份的不连续性 ③PH的不连续性

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 ①凝胶孔径不连续性 单体浓度 交联度 大孔胶:T=3% C=2.0% 小孔胶:T=7% C=2.5%

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 ①凝胶孔径不连续性 凝胶网孔大小: 聚合链长度:由Acr浓度 交联程度:由Acr与Bis相对比例 Bis的浓度低,孔径大,可在聚合前调节单体与Bis的浓度比 如: Acr Bis T(%) 小孔 28.0g 0.735g 7% 大孔 10.0g 2.5g 2.5%

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 凝胶浓度(T)的选择与被分离物质分子量密切相关。 分子量范围 适用的凝胶浓度/(%) 蛋 白 质 分子量范围 适用的凝胶浓度/(%) 蛋 白 质 <104 20-30 1-4×104 15-20 1-5×104-1×105 10-15 1×105 5-10 >5×105 2-5 核酸(RNA) <104 15–20 104–105 5-10 105-2×106 2-2.6

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 ②缓冲液离子成份的不连续性 大孔胶 pH=6.7 先行离子：Cl-存在于凝胶层中任何PH值下 随后离子：Gly-存在于电极缓冲液中 pI=6.0 pKα1=2.34 pKα2=9.70 在pH=6.7时，只有少数解离为Gly-，多数为Gly+-。 Pr分子在pH6.7时以Pr-形式存在

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 ③pH的不连续性 pH 大孔(浓缩)胶 6.7 小孔(分离)胶 8.9 缓冲液 8.3

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 样品浓缩效应（不连续性） 不连续性可控制Gly的解离度，从而控制有效迁移率。 迁移率:Cl- > Pr- > Gly- (Pr被压成薄层) 在大孔胶中：要求Gly的有效迁移率低于所有Pr，经计算pH=6.7。 在小孔胶中：要求Gly超过所有Pr，Pr留在后面进行普通的电泳与分子筛分离分成多个区带。(此PH实测为9.5)

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 电泳过程示意图 A为电泳前3层凝胶排列顺序，3层胶中均有快离子，慢离子 B显示电泳开始后，蛋白质样品夹在快、慢离子之间被浓缩成极窄的区带。 C显示蛋白质样品分离成数个区带。

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 不连续系统浓缩效应示意图

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 ⑴一般电泳分离的电荷效应 ⑵不连续系统对样品的浓缩效应 ⑶凝胶对样品分子的筛选效应 三种物理效率使样品分离效果好，分辨率高。 ⑴一般电泳分离的电荷效应 带电多，MW小，迁移快 ⑵不连续系统对样品的浓缩效应 迁移率 被压成薄层 ⑶凝胶对样品分子的筛选效应

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 电泳仪器 ⑴垂直板电泳仪 ⑵圆盘电泳仪 返回

图1 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳示意图 (A为正面,B为剖面) (1)样品胶pH6. 7 (2)浓缩胶pH6. 7 (3)分离胶pH8 图1 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳示意图 (A为正面,B为剖面) (1)样品胶pH6.7 (2)浓缩胶pH6.7 (3)分离胶pH8.9 (4)电极缓冲液pH8.3 返回

3.醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白

3.醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白 电泳仪器 架膜 加盖 接导线，开机

3.醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白 实验操作 浸泡 将醋酸纤维素薄膜在缓冲溶液中浸泡20min，取出识别光面和麻面。 点样 用镊子将薄膜置于滤纸上，吸收多余的液体，用铅笔在薄膜麻面一端2cm处画一细线，利用载玻片一侧蘸取样品，于细线处点样。 电泳 将薄膜麻面朝下，平悬于电泳槽支架的滤纸桥上，点样一端靠近负极；通电后先使U=80V，待10min后，使U=120V电泳40min。 染色 将薄膜取出后，置于氨基黑10B染色剂重，染色10min。 漂洗 将薄膜取出后，移至漂洗液中，漂洗若干次，至无蛋白区无蓝黑色。 返回

4.PAGE分离血清蛋白鉴定乳酸脱氢酶同工酶 PAGE分离血清Pr 血清0.2mL，置于37ºC水浴中保温30min后，再加入40%蔗糖溶液0.2mL和少量溴酚蓝0.2mL，混匀待用。 凝胶的制备：一般先制分离胶，再在分离胶上面制作浓缩胶。 电泳：电流2-3毫安/管。 剥胶、固定、染色、漂洗

4.PAGE分离血清蛋白鉴定乳酸脱氢酶同工酶 乳酸脱氢酶 (Lactate dehydrogenase 简称 LDH)广泛存在于动物、植物及生物细胞内，是糖酵解过程中的关键酶之一。 LDH的分子量约140000，有5种同工酶。 LDH 同工酶有组织特异性，LDH1在心肌中相对含量高，而LDH5在肝、骨胳肌中相对含量高。 LDH同工酶相对含量的改变，在一定程度上可反应某脏器的功能状况。医学界常利用这些同工酶在血清中相对含量的改变作为某脏器病变鉴别诊断的依据。

4.PAGE分离血清蛋白鉴定乳酸脱氢酶同工酶 乳酸脱氢酶同工酶染色原理 乳酸 NAD+ PMSH2 NBT(无色) LDH 丙酮酸 NADH+H+ PMS NBTH2 染色液： NAD+ 4.0mL 乳酸钠 2.5mL PMS 1.0mL Tris-HCl 5.0mL NBT 10.0mL NaCl 2.5mL

4.PAGE分离血清蛋白鉴定乳酸脱氢酶同工酶 乳酸脱氢酶同工酶染色染色贮存液 (1)5mg/mL NAD+溶液：称 50mg NAD+，加蒸馏水至l0mL。 (2)lmol/L 乳酸鈉溶液：取 60% 乳酸鈉 9.25mL，加蒸馏水至 50mL。 (3)0.lmol/L 氯化鈉溶液：称 0.584g NaCl，加蒸馏水至 100mL。 (4)lmg/mL 甲硫吩嗪 溶液：称 5mg PMS，加蒸馏水 5mL。 (5)lmg/mL 氯化硝基四氮唑蓝溶液：称 20mg NBT，加蒸馏水 20mL 。 以上试剂应置于棕色试剂瓶中4℃贮存。 (6)0.5mol/L pH7.5 磷酸盐缓冲溶液(或Tris-HCl缓冲液)。

4.PAGE分离血清蛋白鉴定乳酸脱氢酶同工酶 实验步骤 ⑴制备组织匀浆缓冲液 0.Olmol/L pH6.5磷酸盐缓冲液溶液，需4℃预冷。组织重量(g)与缓冲液体积 (mL)之比为1:10。用玻璃匀浆器在冰浴中匀浆，将匀浆液置离心管中 1000Or/min离心10-15min，取上清液进行电泳。 ⑵加样 取10-15μL血清或组织匀浆，加等体积40%煎糖(内含少许1%溴盼蓝)混匀后，用微量注射器吸取20-30μL点入大孔胶上部。 ⑶染色与漂洗 将乳酸脱氢酶活性染色贮液按下表配方配成染色液。取出电泳后的胶条于染色液中染色至出现蓝紫色条带后方可取出。取出后于7%乙酸中漂洗。

4.PAGE分离血清蛋白鉴定乳酸脱氢酶同工酶 注意事项 ⑴制备组织匀浆时，一般用0.Olmol/LpH6.5磷酸盐缓冲液,此溶液需4℃预冷。 ⑵电泳时,电流不要太高,应防止热效应引起LDH同工酶失活。 ⑶LDH同工酶活性染色时,当大多数条带均显蓝紫色即可终止染色。 返回

7.等电聚焦(Isoelectro focusing IEF or EF) 原理 Pr为两性电解质，不同Pr其aa的数量、种类及占比例不同，因此pI不同，pI范围窄且净电荷为零，因此依pI分离Pr。 EF是在凝胶中加两性载体电解质，通直流电后，可形成从阳极到阴极逐步增加的pH梯度(连续的,稳定的,线性的pH)。

7.等电聚焦(Isoelectro focusing IEF or EF) 原理 当Pr在电场中迁移到它的PI时，由于净电荷为零，不再移动。 如扩散，附近的凝胶会使其荷电阳、阴极会重新吸引它回到pI位置。因此Pr只能在pI位置被浓缩成窄、稳定的带。称这种浓缩效应为聚焦。 只要凝胶中的pH梯度范围足够窄。便可将pI相近的Pr分开，EF是电泳技术中分辨率最高的技术。

7.等电聚焦(Isoelectro focusing IEF or EF) ⑴载体两性电解质CA 分辨率0.01pH ⑵固相pH梯度(1975年)IPG 以具弱酸或弱碱性质的丙稀酰胺衍生物 CH2═CH─CO─NH─R R=─COOH R=─4级氨基 R为弱酸or弱碱,形成缓冲体系

7.等电聚焦(Isoelectro focusing IEF or EF) 体系分辨率达0.001pH pH梯度范围最窄可为0.01pH/cm CAIEF是两性分子,在凝胶聚合时形成两性分子在电场中,CA迁移到自己的pI而形成pH梯度.

7.等电聚焦(Isoelectro focusing IEF or EF)

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8.双向凝胶电泳 方法 ⑴直径1mm毛细管，进行等电聚焦电泳。 ⑵取出胶条。 ⑶胶条放于 垂直板凝胶顶部 水平板凝胶一端 ⑶胶条放于 垂直板凝胶顶部 水平板凝胶一端 ⑷进行SDS-PAGE电泳。 以Pr的pI与MW两种特征分离，分离效率高，可将数千个Pr分开。

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6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 原理 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。 1967年，Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate，简称SDS），则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 原理 蛋白质Pr溶液中 加巯基乙醇 加SDS,打开氢键与疏水键 复合物 1.4g ： 1g 加入SDS为SO4-2改变了Pr的荷电性质.

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 原理 各种SDS-Pr均带相同密度的负电荷，其荷电超过了原Pr，消除了不同Pr荷电差异。 加入SDS，改变了Pr的构象，SDS-Pr为长椭圆棒，各种短轴约为1.8nm。 长轴：Mr，均呈正比例，所以 常数 斜率 迁移率

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 原理 相对迁移率mR=样品迁移距离cm/染料迁移距离cm 标准曲线 MW=K（10―bm ） 1gMW=1gK―bmR=K1―bmR 式中：MW为蛋白质的分子量；K，K1为常数； b为斜率；mR为相对迁移率。

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 影响迁移率的因素

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 影响迁移率的因素 ⑵溶液中SDS的浓度：溶液中的SDS的总量，至少要比蛋白质的量高3倍，一般需高达10倍以上。 ⑶溶液的离子强度：溶液的离子强度应较低，最高不能超过0.26，因为SDS在水溶液中是以单体和分子团的混合体而存在的，SDS结合到蛋白质分子上的量，仅决定于平衡时SDS单体的浓度而不是总浓度，在低离子强度的溶液中，SDS单体具有较高的平衡浓度。

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 影响迁移率的因素

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 注意 有许多蛋白质，是由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（如α-胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在SDS和巯基乙醇的作用下，解离成亚基或单条肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-凝胶电泳测定的只是它们的亚基或单条肽链的分子量，而不是完整分子的分子量。为了得到更全面的资料，还必须用其它方法测定其分子量及分子中肽链的数目等，与SDS-凝胶电泳的结果互相参照。

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 注意 不是所有的蛋白质都能用SDS-凝胶电泳法测定其分子量，已发现有些蛋白质用这种方法测出的分子量是不可靠的。这些蛋白质有：电荷异常或构象异常的蛋白质，带有较大辅基的蛋白质（如某些糖蛋白）以及一些结构蛋白如胶原蛋白等。 例如组蛋白F1，它本身带有大量正电荷，因此，尽管结合了正常比例的SDS，仍不能完全掩盖其原有正电荷的影响，它的分子量是21,000，但SDS-凝胶电泳测定的结果却是35,000。

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 电泳装置

图2 夹心垂直板电泳槽示意图 图3 凝胶模示意图 1. 样品槽模板 2. 长玻璃板 1. 导线接头 2. 下贮槽 3. 凹形橡胶框 4 图2 夹心垂直板电泳槽示意图 图3 凝胶模示意图 1.样品槽模板 2.长玻璃板 1.导线接头 2.下贮槽 3.凹形橡胶框 4.样品槽模板 5.固定螺丝 6.上贮槽 7.冷凝系统 返回

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 试剂 丙烯眈胶凝胶贮备液：取3Og丙烯肮胶(Arc)和0.8g双丙烯眈胶(Bis)溶于双蒸水中，并定容至100mL。过滤后4℃下贮存备用，可保存1-2个月。 10%过硫酸镀：称取过硫酸镀(NH4)2S208(APS)lg，溶于10mL双蒸水中，用前配制1.5mol/L TIts-HCl，pH8.8。 分离胶缓冲液：称取18.15gTIts，用60mL双蒸水溶解，再用4mol/L盐酸调节至pH8.8，然后定容至100mL，4℃保存0.5mol/L TIts-HC1,pH6.8。

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 试剂 浓缩胶缓冲液：称取6gTIts，用6OmL双蒸水溶解，再用4mol/L 的盐酸调节至pH6.8，然后定容至100mL，4℃保存。 10%SDS溶液：取lOgSDS溶于80mL双蒸水中，并轻缓搅拌(室温低时需水浴溶解)，再定容至100mL，室温存放。 样品缓冲液(样品溶解液)：分别取双蒸水 4mL，0.5mol/LTEts-HC1，pH6.8缓冲液1.OmL，甘油0.80mL，10%(质量浓度)SDS1.6mL，疏基乙醇0.4mL，0.1%(质量浓度)澳盼蓝0.2mL，总体积为8mL，4℃保存。 电极缓冲液：称取3gTIts，14.4g甘氨酸，lgSDS，用水溶解后，定容至1000mL，pH8.3，不必调节。

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 试剂 染色液：取1g考马斯亮蓝R250，溶于250mL甲醇及100mL冰醋酸中，溶解后定容至100OmL。 脱色液：250mL甲醇(或乙醇)和100mL冰醋酸混匀后，定容至 100OmL。低Mr标准蛋白质混合物(兔磷酸化酶B97400；牛血清白蛋白 667∞；兔肌动蛋白43000；牛碳酸野酶31000；膜蛋白酶抑制剂20300； 鸡蛋清溶菌酶14400)。

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 蛋白质样品的处理 ⑴标准蛋白质样品的处理：取成套的标准蛋白质系列加入20μL样品溶解液，使之充分溶解后置沸水浴中加热3min，取出冷却。 ⑵待测蛋白质样品处理：取小牛血清白蛋白0.1mg 及膜蛋白酶0.2mg或其他待测样品(作为未知样品)分别溶解于20-50μL样品溶解液中，置沸水浴中加热3min，取出冷却至室温。

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 电泳 上槽接负极，下槽接正极，然后打开电源开关立即进行电泳，开始时电流控制在10A，待样品从浓缩胶进入分离胶后，将电流调节至20-25A，在整个电泳过程，电流维持不变，当指示染料澳盼蓝迁移至距下沿1cm左右，即可停止电泳，整个电泳过程约需4h左右。

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 剥胶与染色 电泳结束后，关闭电源开关，从电泳槽中取下凝胶板并卸下硅胶框，用带细长针头的注射器吸满蒸馏水，将针头插入凝胶与玻板之间，沿玻板缓缓移动，并缓缓将蒸馏水注人，最后注入少量空气，取出针头，将两玻板轻轻揭开后即可取出凝胶板，将之置培养皿中，冲洗胶面后，加入染色液，染色5h或过夜。

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 染色

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 结果与分析 ⑴绘制标准曲线 将大培养皿放在一张坐标纸上，量出加样端距细铜丝间的距离（cm）以及各蛋白质样品区带中心与加样端的距离（cm），如图18-6所示。按下式计算相对迁移率mR： 相对迁移率mR= 蛋白质样品距加样端迁移距离(cm) 溴酚蓝区带中心距加样端距离(cm)

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 结果与分析 以标准蛋白质的相对迁移率为横坐标，标准蛋白质分子量为纵坐标在半对数坐标纸上作图，可得到一条标准曲线。 ⑵根据未知蛋白质样品相对迁移率直接在标准曲线上查出其分子量。 ⑶分析各蛋白质相对迁移率高氏主要是由什么决定的？

6. SDS-PAGE测定蛋白质分子量 标准Marker蛋白的电泳图谱

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9.高效毛细管电泳(HPCE) 原理 ⑴毛细管壁以玻璃.硅酸为主要成份 所以管壁带一定负电荷 ⑵管壁吸附溶液的阳离子(含H2O的正极端)形成双电层 ⑶形成电渗:电场高压下,双电层水合阳离子引起流体(加毛细张力)整体向负极移动.

9.高效毛细管电泳(HPCE) 原理 ⑷样品中不同组份受到的作用力有差别： 阳离子与电场力与电渗流同向，最快； 阴离子受方向相反的两种力作用，电渗流力大于电场力，移向负极最慢。 不带电样品受电渗流作用，移向正极(无电场力作用)。 阴离子<中性分子<阳离子

9.高效毛细管电泳(HPCE) 毛细管电泳（Analytical Capillary Electrophoresis ACE）的特点 ⑴可分离各种成份(带电与不带电)。 ⑵电渗成为有效驱动力(普通电泳中为破坏力)。 ⑶高速度分力能力：各种制品均可在3-30‘内高速分离(45’内，分离15种糖)。 ⑷高分辨力：分辩力大于106理论段/m.最小监测量：10-6M，如脱酰胺作用。

9.高效毛细管电泳(HPCE) 毛细管电泳（Analytical Capillary Electrophoresis ACE）的特点 ⑸质量感度：应用激光诱发荧光的检测器，可检测aM水平（10-18，PM：10-12，fM：10-15）。 ⑹用样量：μL（实际上是nL）。 ⑺自动化程度：自动加样，自动交换缓冲液，自动分离，自动数据处理。

9.高效毛细管电泳(HPCE) 毛细管电泳（Analytical Capillary Electrophoresis ACE）的特点 ⑻适用范围广：aa衍生物 肽,Pr 核酸,药物.病毒 水溶维生素 糖类衍生物 ⑼检测： 紫外/可见光 荧光 电化学 激光 同位素

9.高效毛细管电泳(HPCE) 电泳仪器 返回

10.电泳相关技术 凝胶干燥技术 凝胶扫描技术借助薄层扫描仪对电泳图谱扫描，以迁移率为横坐标，以吸光度为纵坐标，将电泳条带转换成峰图。 凝胶成像技术通过图像采集和图像分析，利用计算机程序自动识别图中所有可能条带。 凝胶印渍转移技术Southern Blot，Northern Blot，Western Blot

10.电泳相关技术 A:GIS暗箱 B:高分辨率数码相机 C:安全门锁 D:GIS暗箱控制面板 E:PC机控制 F:紫外或白光投射仪 G:GIS 1D分析软件 H:数码热升华图片打印机

10.电泳相关技术 多色荧光。 DNA在6%聚丙烯酰胺凝胶中分析 返回

11.注意事项 安装电泳槽时要注意均匀用力旋紧固定螺丝，避免缓冲液渗漏。 用琼脂(糖)封底及灌胶时不能有气泡，以免电泳时影响电流的通过。 样品中应含一定浓度的蔗糖溶液，目的是用以防止样品因对流而被稀释。 加样时样品不能超出凹形样品槽。加样槽中不能有气泡，如有气泡，可用注射器针头挑除。 返回

思考题 为什么要在样品中加少许溴酚兰和一定浓度的蔗糖溶液？蔗糖及溴酚兰的作用分别是什么？ 返回