第十九章 局部用药的毒性研究

局部用药的毒性试验是根据局部用药部 位的解剖和生理特点设计的。 涂剂、擦剂 皮肤用药 膏剂、凝胶剂 其他透皮吸收制剂 常用局部用药制剂 滴眼剂、滴鼻剂 喷雾剂、肌内注射 直肠和阴道制剂

第一节 皮肤用药（制剂）的毒性研究 一、皮肤组织结构 表皮 真皮 皮下组织

皮肤覆盖全身。 表皮较薄，厚为0.1-0.2mm。 角质层 表皮 颗粒层 生发层 真皮依附于皮下组织，厚约2mm。 胶原 真皮 弹性硬蛋白 纤维母细胞

二、化学物质对皮肤毒性作用的类型 皮肤具有一定的保护作用，药物及其他 化学物质对皮肤产生的损害损害主要为： 一）皮肤原发性刺激 原发性刺激—--药物直接作用于皮肤引 起的病理性反应。 红斑、水肿 原发性刺激的表现 水疱疮 溃疡

强碱 脂溶性溶剂 原发性刺激机理 镉酸盐 银、汞、砷等金属盐 特征 有明确的毒理学量-效关系。 首次接触即可产生某种特征。

二）皮肤致敏 皮肤致敏为变态反应，包括药物致敏和 光敏反应。 作用机制 药物与蛋白以共价键结合，具用免疫原性。 药物在光的作用下，形成半抗原性物质。 特征 没有明确的毒理学量-效关系。 再次接触该药物才能激发特定症状。

三）皮肤致癌 有机大分子化合物----多环芳烃类 金属盐----无机砷盐

三、皮肤用药（制剂）毒性研究 一）皮肤用药急性毒性试验 1、试验目的-观察完整与非完整皮肤短期内 接触受试物所产生的毒性反应。 2、实验材料 1）动物-家兔、豚鼠、大鼠 2）受试药物-膏剂、液体或粉末 3、试验方法 1）剂量选择-3个剂量组 2）给受试物方法和观察-涂敷固定 4、结果判断

二）皮肤用药长期毒性试验 1、试验目的-观察动物皮肤长期接触受试 物，对机体产生的异常毒性反应。 2、实验材料 1）动物-家兔、豚鼠或大鼠 2）受试药物-膏剂、液体几粉末 3、试验方法 1）剂量选择-3个剂量计对照组 2）给受试物方法及时间-涂敷固定、每日 一次至少6小时，按临床用药时间的3 倍时间。

3）检测项目-每日观察皮肤临床症状、 皮肤病力学检查；一般症状、血液 学、血液生化指标及病理学检查。 4、结果判断 进行统计学计算，并应写明安全剂 量、中毒剂量、中毒的靶器官以及中毒 的可逆性。

三）皮肤刺激性试验 1、试验目的-观察动物皮肤接触受试物后所 产生的刺激反应情况。 2、实验材料 1）动物-家兔、豚鼠 2）受试药物-膏剂、液体或粉末 3、试验方法- 1g或1ml涂敷固定、于去除受 试物后1、24、48和72小时观察涂敷部位 红肿、红斑以及上述变化的恢复情况和 时间。

皮肤刺激反应评分 反应 分值 反应 分值 红斑 水肿 无红斑 0 无水肿 0 略见红斑 1 稍有水肿 1 反应 分值 反应 分值 红斑 水肿 无红斑 0 无水肿 0 略见红斑 1 稍有水肿 1 中度红斑 2 明显可见(边缘高出皮肤)2 严重红斑 3 皮肤隆起水肿轮廓清晰 3 紫色红斑并有焦痂形成 4 水中隆起＞1mm 4 总分 8

4、结果判断与评价 强 度 平均分值 无刺激 ＜0.5(0-0.5) 轻度刺激 ＜2.0(0.5-2.0) 中度刺激 ＜4.0(0.5-4.0) 严重刺激 ＜6.0(0.5-6.0) 极严重刺激 ＞6.0(6.0-8.0)

四）皮肤过敏试验 1、试验目的-通过动物皮肤重复接触受试物， 观察机体免疫系统反映在皮肤上的表现。 2、实验材料 1）动物-豚鼠 2）受试药物-膏剂、液体不稀释直接涂敷 3）阳性致敏物-2,4-而硝基氯代苯 1%-致敏浓度 0.1%-激发浓度

3、试验方法 1）试验分组 随机分成三组，给药组、赋形剂组、阳 性对照组 2）致敏接触 0.1-0.2ml(g)涂于脱毛区，接触6小时， 第七天和14天亦同样方法重复。 3）激发接触 末次给药后第14天，激发给药，6、24、48和72小时观察皮肤过敏情况。

4、结果判断与评价 皮肤过敏反应评分标准 刺激反应 程度 分值 刺激反应 程度 分值 红斑形成 水肿形成 无红斑 0 无水肿 0 刺激反应 程度 分值 刺激反应 程度 分值 红斑形成 水肿形成 无红斑 0 无水肿 0 轻度红斑 1 轻度水肿 1 中度红斑 2 中度水肿 2 重度红斑 3 重度水肿 3 水肿性红斑 4 最高总分值 7

致敏率分类 过敏反应强度 致敏率% 弱致敏性 0-10 轻度致敏性 10-30 中度致敏性 30-60 高度致敏性 60-80 过敏反应强度 致敏率% 弱致敏性 0-10 轻度致敏性 10-30 中度致敏性 30-60 高度致敏性 60-80 极度致敏性 80-100 红斑形成总分+水肿形成总分 反应平均值= 合计动物总数

皮肤涂抹致癌试验 1、试验目的 2、实验材料 1）动物-敏感品系鼠 2）受试物 3）阳性对照药-苯比、巴豆油 3、试验方法 1）试验分组-阴性、阳性、实验组 2）给药量-每周1-2次

3）给药方法 4）给药后观察 4、结果判断与评价 1）皮肤损伤程度 2）组织病理学检查 3）皮肤肿瘤发生率计发生率与时间的关系， 评定皮肤致癌的效应。

五）皮肤吸收试验 1、整体皮肤吸收试验 化合物经皮渗透的量同皮肤微灌流量直接相关，通过测量与皮肤灌流量相关的电压，测算出化学经皮吸收速率。 1）LDV法 用643.8nm氦-氖激光，照射血管中流动中的红细胞，测量用药前后变化，测定出皮肤吸收速度。

2）PPG法 LED射出的800-940nm红外线照射，收集反射光转变成电压波谱，通过电压波谱变化，计算皮肤吸收量的大小。

2、离体皮肤吸收试验 1）静态渗透装置 上室防药剂，下室接受液，下室中间方皮肤并密封，药剂放于皮肤之上，每隔一定时间后，测定接受液，计算皮肤渗透率。 2）流动渗透装置 上述方法的改进，接受液为血浆或白蛋白，以5ml/小时的速度灌流，测定不同时间灌流液的药量。以次测定皮肤的透过率。

六）皮肤光敏试验 1、试验目的-观察受试物接触皮肤后遇光照 是否有光敏反应 2、试验方法 1）光敏反应试验 评价标准 2）光毒性试验

第二节 眼睛用药刺激性试验 眼睛的结构

角膜结膜炎 炎症 角膜表面水肿 上皮脱落 刺激作用 结膜充血、水肿 灼痛、流泪、畏光 慢性结膜炎、睑腺炎、分泌物增多

试验目的 角膜浑浊 刺激性试验 试验方法 虹膜 结果与评价 结膜 水肿 分泌物

一）试验目的-观察动物眼睛接触受试物所产 生的刺激反应 二）试验方法 家兔，原液（原膏）加入眼睛肿0.1ml (0.1g)，闭合5-10分钟。6、24、48和72 小时至7天眼刺激情况。 三）结果与评价

眼刺激反应评分 眼刺激反应 分值 角膜浑浊 0-4 虹膜 0-2 结膜 0-3 水肿 0-4 分泌物 0-3 总分 16

眼刺激性评价标准 刺激程度 积分 无刺激性 0-3 轻度刺激性 4-8 中度刺激性 9-12 重度刺激性 13-16

第三节 肌内注射用药局部刺激性试验 试验目的-肌内注射后药物对肌肉的刺激性反 应情况。 试验方法 家兔6只，一侧骨四头肌注射供试物，另 第三节 肌内注射用药局部刺激性试验 试验目的-肌内注射后药物对肌肉的刺激性反 应情况。 试验方法 家兔6只，一侧骨四头肌注射供试物，另 一侧注射生理盐水1-2ml作为对照，48小 时处死动物，取骨四头肌纵向剖开，肉 眼观察，观察注射部位刺激情况，必要 时作组织病理学检查。

家兔股四头肌肌肉组织

结果与评价 肌内注射刺激反应评分标准 反应级数 刺激反应 0 给药部位无明显反应 1 给药部位轻度充血，直径0.5cm以下 反应级数 刺激反应 0 给药部位无明显反应 1 给药部位轻度充血，直径0.5cm以下 2 给药部位中度充血，直径1.0cm以下 3 给药部位中度充血，红肿，肌肉有变性 4 出现肌肉褐色变性，坏死0.5cm以下 5 肌肉严重变性，出现大片坏死 超过2认为不符合规定，不可进行肌内注射

第四节 静脉给药局部刺激性试验 见第十七章： 全身用药毒性试验中-血管刺激性试验

第五节 滴鼻剂和吸入剂的毒性试验 一、滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验 1、试验目的 –观察受试物一次滴入或吸入 后对动物产生的毒性反应或死亡情况。 2、试验方法 3个剂量组，组距0.65-0.85,滴入或吸入 4小时后即可以及7-14天观察动物。 3、结果评价

二、滴鼻剂和吸入剂刺激性试验 1、试验目的 -观察受试物一次滴入或吸入 后对动物产生的刺激反应。 2、试验方法 将受试物滴入或喷雾与动物，24小时后处死动物，观察油污充血、红肿等。 3、结果评价

第六节 应用于直肠、阴道制剂的毒性试验 一、直肠、阴道用药急性毒性试验 1、试验目的-受试物对动物直肠或阴道产 生的毒性反应或死亡情况。 2、试验方法 栓剂、膏剂或液体等，将受试物轻置入直肠或阴道内。至少接触4小时，观察纪珂以及7-14天的情况。 3、结果评价

二、直肠、阴道用药长期毒性试验 1、试验目的 2、试验方法 3、结果评价

三、直肠、阴道用药刺激性试验 1、试验目的 2、试验方法 3、结果评价 四、有关问题 1、给药量与给药浓度 2、给药途径 3、多次给药问题 4、对照组的建立

第十九章：局部用药的毒性研究 第一节 皮肤用药的毒性研究 一、皮肤组织结果 二、化学物质对皮肤毒性作 用的类型 1、皮肤原发性刺激 2、皮肤致敏 3、皮肤致癌 三、皮肤用药毒性试验 1、皮肤用药急性毒性试验 2、皮肤用药长期毒性试验 3、皮肤刺激性试验 4、皮肤过敏试验 皮肤涂抹致癌试验 5、皮肤吸收试验 6、皮肤光敏试验 第二节 眼睛用药刺激性试验 第三节 肌内注射用药局部刺 激性试验 第四节 静脉给药局部刺激性 第五节 滴鼻剂和吸入剂的毒 性试验 第六节 应用于直肠、阴道制 剂的毒性试验