第二章蛋白质的检测

一、血浆蛋白质的组成、功能及分类 1、血浆蛋白质的组成： ① 营养作用 ②维持胶体渗透压③维持正常PH 2、血浆蛋白质的功能： ① 营养作用 ②维持胶体渗透压③维持正常PH ④运输作用⑤免疫与防御功能⑥催化作用⑦抑制组织蛋白酶⑧代谢调节⑨凝血、抗凝血及纤溶作用。

涵盖最广泛的临床检测指标 免疫功能: IgA、IgG、IgM、C3、C4、Kap、Lam、IgG subclasses 1-4、IgE、C1抑制物 肾脏功能: 白蛋白、转铁蛋白、IgG 、 a1-微球蛋白、 B2-微球蛋白、a2-巨球蛋白、 Kap-轻链、Lam-轻链、Cystatin C 炎症: CRP、a1-酸性糖蛋白、 触珠蛋白、a1-抗胰蛋白酶、铜兰蛋白、纤维蛋白原、SAA 类风湿性疾病: RF、ASL、CRP、ADNaseB 心血管疾病: ApoA-I、ApoB、ApoA II、ApoE、Lp(a)、肌红蛋白、纤维蛋白原、hsCRP 营养监测: 前白蛋白、白蛋白、视黄醇结合蛋白、转铁蛋白、铁蛋白 出 / 凝血疾病: 纤维蛋白原、AT3、纤溶酶原 贫血: 触珠蛋白、转铁蛋白、铁蛋白、可溶性转铁蛋白受体

氨基酸性质：两性电离及等电点、紫外吸收、呈色反应。 生物大分子：胶体性质、变性、沉淀和凝固等特点。 蛋白质性质 氨基酸性质：两性电离及等电点、紫外吸收、呈色反应。 生物大分子：胶体性质、变性、沉淀和凝固等特点。 蛋白质的分离 透析、沉淀、盐析、电泳、层析、超速离心 血浆蛋白质的分类

3、血浆蛋白质的分类 根据分离方法： ①盐析法：白蛋白和球蛋白两大类（各种蛋白质的亲水性和所带的电荷均有差别。） ②电泳法（醋酸纤维素薄膜）：白蛋白、α1－球蛋白 、 α2 － 球蛋白、 β －球蛋白、纤维蛋白原、γ－球蛋白。

电泳法分类 白蛋白（40－60％） α1-球蛋白（α1-抗胰蛋白酶、血清类粘蛋白、α1-酸性糖蛋白、甲胎蛋白） α2-球蛋白（α-脂蛋白、触珠蛋白、铜蓝蛋白、α2-巨球蛋白） β-球蛋白（转铁蛋白、血红素结合蛋白、 β微球蛋白、纤维蛋白原、 β脂蛋白、补体） γ-球蛋白（各种免疫球蛋白主要位置及C-反应蛋白）

根据生理功能分类：

二、一些临床常检测血浆蛋白质 ★ 1、白蛋白（albumin , Alb) 肝实质细胞合成，分子量66 458， 半衰期15～19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占40～60％。 ★

1）血液中的白蛋白 由于白蛋白在血浆中浓度高而且分子量小，其主要生理功能是维持血液胶体渗透压。 另外，白蛋白能结合诸如胆红素之类的疏水分子。在体内担负转运各种离子、酶类、脂溶性物质、激素和药物的功能。在机体营养作用中也起重要作用。 参考范围：血清白蛋白35～55g／L

2）脑脊液中的白蛋白 参考范围：CSF白蛋白134～237mg／L CSF中白蛋白全部来自血液。 CSF中白蛋白增高与血脑屏障通透性增高有关。可见于多发性硬化症、病毒性脑炎或脑膜炎、细菌性脑膜炎等颅内和椎管内炎症性疾病和某些神经系统疾病。 参考范围：CSF白蛋白134～237mg／L

3）、微量白蛋白尿（MA） 尿ALB 正常成人尿ALB 大约3.90～24.4mg/24h 儿童 尿ALB 0～ 13.3mg/24h 尿Alb／Cr(肌酐)<2.5mg／mmol 尿中蛋白超过以上数值则称蛋白尿。

2、前白蛋白（prealbumin, PA） 肝细胞合成，分子量54 000，半衰期1.9天。

★ 参考范围 生理功能 临 床 意 义 PA前白蛋白 0.18~0.45g/L Alb白蛋白 36~46g/L 1、组织修补 2、运载功能 降低具有意义： 营养不良、急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化、肾炎时血清浓度降低。 Alb白蛋白 36~46g/L 1、营养 2、胶体渗透压 3、维持PH 4、运输作用 增高：严重失水、输入过多 减少：丢失、肝脏疾病、消耗性疾病、腹水形成、肾病、严重感染、胶原病。 ★

3、转铁蛋白（transferrin , TRF 或 Tf） 由肝及单核吞噬细胞系统合成，分子量76500， 位于β－球蛋白区带，负责运载消化管吸收的及 红细胞降解释放的铁，以转铁－Fe3+复合物的形 式进入骨髓，用于合成血红蛋白。半衰期7天。

3、转铁蛋白（transferrin , TRF 或 Tf） 【参考范围】2.5-4.3g/L 【临床意义】①属急性时相反应蛋白 ②并用于贫血的诊断,缺铁性低色素贫血血浆转铁蛋白含量增高,但铁的饱和度很低；红细胞对铁利用障碍引起贫血时，血浆转铁蛋白正常或降低，但铁的饱和度增加。

4、β2－微球蛋白（ β2－microgluobin ,BMG 或β2－m） 由淋巴细胞合成，存在于所有有核细胞的表面，特别是淋巴细胞和肿瘤细胞。可自由通过肾小球滤过膜，但在肾小管几乎全部重吸收，被重吸收的β2－微球蛋白在肾小管细胞完全降解。

4、β2－微球蛋白（ β2－microgluobin ,BMG 或β2－m） 【参考范围】1.0-2.5mg/L(血清) ；尿： 0.2mg/L以下 【临床意义】 血浆β2－微球蛋白含量升高见于炎症、肿瘤、各种类型白血病及肾功能衰竭，尿毒症患者血清β2－微球蛋白可达40mg/L。

2微球蛋白（ 2m） 尿中升高： 肾前性 肾小管障碍： 血清升高： Fanconi， 肾小球滤过功 氨基甙类抗生素， 重金属中毒， Wilwon， 烧伤。 肾小球障碍 血清升高： 肾小球滤过功 能低下，慢、 急性肾炎，肾 功能不全 肾前性：病毒感染， 免疫疾患（SLE， Sjogren），恶性 肿瘤。

5、C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP) ★第一个被认定为急性时相反应蛋白, ★由肝细胞合成, 可结合多种细菌、真菌及原虫 体对内的多糖。 ★能激活补体，引发调理作用，增强 细胞的吞噬功能，对血小板凝聚和血块收缩 有抑制作用。 圆盘 γ-球蛋白（各种免疫球蛋白主要位置及C-反应蛋白） ★

5、C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP) 【参考范围】＜8.0mg/L 【临床意义】 作为急性时相反应的一个敏感指标, C-反应蛋白在心肌梗死、创伤、感染、外科手术、肿瘤侵润时其血浆含量在24－48小时内迅速升高，可达到正常水平的2000倍。 圆盘

6、 1酸性糖蛋白（1-AG） 0.25-2.0g/L,是电泳1- 球蛋白含量最高部分, 但着色很浅。 升高：急、慢性感染，AMI急性心肌梗塞 ，肾炎，结缔组织病， 自身免疫，过敏，恶性肿瘤。

7、 1抗胰蛋白酶（1-AT） 0.83-1.99g/L ，是电泳1- 球蛋这一区带显色 的主要成分 降低：遗传性： 升高：感染，肿瘤，胶原病， 妊娠，术后药物服用 （口服避孕药，激素……） 降低：遗传性： 1-AT缺乏症 后天性：ARDS急性呼吸窘迫综合征 ， 重症肝炎，肾炎， 肺损伤，蛋白丢 失，营养不良， 早产儿，肾移植 早期排异。

8、 铜兰蛋白（ceruloplasmin, CP） 血清中降低： 先天异常； Wilson病肝豆状核变性，常染色体隐性遗传铜代谢障碍性疾病。该病特片是引起肝脏的硬化和神经系统基底节区豆状核变性和大脑皮质的萎缩。 ， Menkes综合症铜代谢异常而造成细胞内铜缺乏的遗传性疾病 ， 营养不良，肝疾患， 蛋白丢失，新生儿。 血清中升高： 肿瘤，感染， AMI，贫血， 胆道梗阻， 胶原病，妊娠， 肺气肿，药物， 吸烟。 19

9、 触珠蛋白（haptoglobin, HP） 血清中降低：血管内、 外溶血，合成减低，手术 （开胸术）自家输血ABO 不适合骨髓移植，烧伤后肾 功不全，疟疾，慢性丙型肝 炎，自身免疫性溶贫；肾 功能不全，自尿中漏出。 血清中升高： AMI， 内源性发热， 肿瘤……。

10、 2-巨球蛋白（  2-macroglobin, 2MG） 升高： 慢性炎症， 肝炎，肾炎， 慢性肝病， 糖尿病。 降低：恶性肿瘤，RA类风湿性关节炎 ， DIC弥散性血管内凝血 ，溶栓疗法，AMI， COPD慢性阻塞性肺气肿 ，尿毒症，肌萎缩 性侧索硬化，胰腺炎，溃 疡性结肠炎，术后。 遗传性2MG缺乏。

其他26.59 % 白蛋白55% 纤维蛋白原4.0% α2-巨球2.93% 触珠蛋白2.2% 铜兰蛋白0.53% α1抗胰蛋白酶1.99% 前白蛋白0.45% α1酸性糖蛋白 2.0% 转铁蛋白4.3%

三、疾病时的体液蛋白质 细胞遭到破坏 合成减低 异常表达 1、炎症、创伤: 在急性炎症或某些组织损伤时,有些血浆蛋白质含量会增高,有些会降低,这些血浆蛋白质并被称为急性时相反应蛋白(acute phase reactants, APR)。包括：1－抗胰蛋白酶、 1－酸性糖蛋白、结合珠蛋白、铜兰蛋白、C3、C4、C－反应蛋白、纤维蛋白原、前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白等。

临床常用炎症的标志物 (急性时相蛋白) CRP C－反应蛋白 a1-酸性糖蛋白 触珠蛋白 a1-抗胰蛋白酶 铜蓝蛋白 纤维蛋白原

CRP C－反应蛋白特性 正常含量低 （< 5.0 mg/L） 炎症反应快 （6 – 10 h） 变化幅度大 （> 1000 倍） 半衰期短 （24 h） 1、炎症、创伤:

CRP 临床应用 < 10 mg/L 无急性炎症 10 – 99 mg/L 轻度或中度炎症 > 100 mg/L 重度炎症 1、炎症、创伤:

CRP 参考范围 炎症的诊断 炎症与非炎症的鉴别 炎症过程的监测 疗效考核 预后 CRP在感染和组织损伤时可升高100～1000倍，半衰期4～6h，对机体有益。 1、炎症、创伤:

CRP 和炎症 在发热、各种炎症状态、和创伤时，血清CRPC－反应蛋白水平升高1000倍。 运用高灵敏的CRP方法（hs-CRP超敏C反应蛋白 )对吸烟、肥胖、老年、以及表面健康的对象的检测，原先认为是正常的CRP（如：＜3 mg/L)，研究发现在“正常”水平内的hs-CRP 浓度的高低，和未来发生冠脉综合征的危险有关。引起普遍重视。 1、炎症、创伤: < 10 mg/L 无急性炎症

采用乳胶增强的比浊技术大大提高了分析的灵敏度 高敏C-反应蛋白(hs-CRP) 采用乳胶增强的比浊技术大大提高了分析的灵敏度 (检测低限为0.005-0.10mg/l), 在低浓度 CRP(0.15-10 mg/l)测定范围内有很高 的准确性. 用这些方法所进行测定的CRP称为高敏感 (high-sensitivity)或超敏感(ultra-sensitive)CRP,缩写 hs-CRP 1、炎症、创伤:

动脉粥样硬化的血栓形成除了脂肪堆积过程外,也是一个慢性炎症过程,而CRP是动脉粥样硬化血栓形成疾病的介导和标志物。 高敏C-反应蛋白(hs-CRP) 动脉粥样硬化的血栓形成除了脂肪堆积过程外,也是一个慢性炎症过程,而CRP是动脉粥样硬化血栓形成疾病的介导和标志物。 对表面健康的人群预示未来发生管脉 综合征的可能性。 1、炎症、创伤:

CRP（C反应性蛋白） 参考值：用WHO CRP 标准品定标，测定468 名健康人的均值为0.68mg/l，90%和99% 百分位分别为3.0mg/l和10mg/l。 多数主张将临界值定为1 - 2mg/l者有临床意义。 1、炎症、创伤:

与疾病的关系 3、风湿病：免疫球蛋白IgA、IgG、IgM升高等。 4、遗传性缺陷：某些蛋白质发生变异或量缺乏。 1、肝脏疾病 肝脏合成大多数血浆蛋白，肝枯否细胞参与免疫细胞的生成调节，肝脏疾患可以导致多种血浆蛋白质发生变化。 2、肾脏疾病 肾脏病变时早期就可以出现蛋白尿，而导致选择性血浆蛋白质丢失，严重肾病时肾小球失去分子筛的作用，可导致非选择性蛋白丢失。 3、风湿病：免疫球蛋白IgA、IgG、IgM升高等。 4、遗传性缺陷：某些蛋白质发生变异或量缺乏。 而导致选择性血浆蛋白质丢失，小蛋白丢失，肝脏代偿，绝对含量增加。

四、 体液蛋白质测定 体液蛋白质测定方法: 免疫化学法 电泳法 化学方法 学习方法：【测定方法】 【实验原理】 【参考范围】 【临床意义】

1、血清总蛋白（total protein, TP): 【测定方法】双缩脲法（目前推荐方法） 【实验原理】蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成的，二价铜离子在碱性溶液中与蛋白中的肽键（-CONH-)发生反应形成紫红色络合物，在540nm有吸收峰，并与蛋白含量 成正比。 蛋白+ Cu2+→ Cu –蛋白络合物（紫红色） 【参考范围】60－80g/L

【临床意义】 血清总蛋白升高： 血清总蛋白降低： 反应白蛋白合成减少或蛋白质的丢失 多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、冷沉淀球蛋白血症等多 克隆性或单克隆性免疫球蛋白病，多发性骨髓瘤患者的 血浆球蛋白大于50g/L，总蛋白大多都大于100g/L。 血清总蛋白降低： 反应白蛋白合成减少或蛋白质的丢失 肝细胞损害合成减少：肝炎、肝硬化、肝癌 总蛋白＜60g/L,白蛋白＜25 g/L，低蛋白血症 营养不良：摄入不足 丢失过多：肾病、烧伤、大出血 消耗增加：结核、甲亢、恶性肿瘤

2、白蛋白（Alb）的检测 【测定方法】溴甲酚绿终点法 （推荐法） 【实验原理】血清中白蛋白与溴甲酚绿（BCG）在pH4.2环境中结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，在630nm有吸收峰，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，从而测出白蛋白含量。 白蛋白+BCG →白蛋白－溴甲酚绿复合物 【参考范围】35－55g/L 【临床意义】 增高：严重失水、输入过多。 减少：丢失、肝脏疾病、消耗性疾病、腹水形成、肾病、 严重感染、胶原病，血清白蛋白小于20g/L，临床可出现水肿。

3、血清球蛋白（globulin） 【检测方法】现多用血清总蛋白减去血清白蛋白 【参考范围】20-30g/L 白蛋白/球蛋白(A/G):1.5-2.5/L 【临床意义】血清球蛋白升高见于某些自身免疫性疾病、炎症或感染，还见于恶性M球蛋白血症。 降低见于合成减少，有低γ－球蛋白血症或无γ－球蛋白血症。

4、血浆纤维蛋白原（ fibrinogen，FIB）测定 【测定方法】 ：①纤维蛋白原凝固法②免疫化学法 【实验原理】：纤维蛋白原在凝血酶催化下形成纤维蛋白，纤 维蛋白原含量与形成纤维蛋白所用时间成反比。 【参考范围】2.0-4.0g/L 【临床意义】 血浆纤维蛋白原为急性时相反应蛋白之一,其血浆含量增高常见于某些感染、严重组织损伤、休克、外科手术后、肾炎、风湿热、恶性肿瘤等。其他放射治疗、月经期和妊娠期亦可增高。 血浆纤维蛋白原含量减少常见于营养不良、严重肝功能损伤、弥散性管内凝血、胎盘早产剥离、分娩时羊水渗入血管使在血管内形成血栓、先天性纤维蛋白缺乏症等。

5、前白蛋白测定 【实验方法】免疫比浊法(透射比浊) 【实验原理】抗原抗体反应形成免疫复合物，340nm测定。 【参考范围】0.18~0.45 g/L 【临床意义】能迅速反映营养摄入处于正平衡或负平衡。而白蛋白的半衰期长,达21 d,即使肝脏停止合成白蛋白, 8 d后外周血中的白蛋白比浓度仅降低约20% ,敏感地反映早期肝损害情况；PA是一种非特异宿主防御物质,所以在急性感染时, PA在血清中浓度可迅速降低,尤以细菌性感染时更为明显。

 散射浊度法依Rayleigh光散射理论 检测技术的应用  散射浊度法依Rayleigh光散射理论 简式： I = knv 2 n：单位容积内粒子数目 v： 粒子大小 I： 散射光强度 浊度样品 （透射浊度法） I0 I 检测器 A 光源 B IB （散射浊度法） 检测器 B 透射浊度法和散射浊度法的光路

6、 C－反应蛋白 【实验方法】免疫比浊法(散射比浊/透射比浊) 【参考范围】<8mg/L 【临床意义】：最重要的炎症和组织损伤指标， 敏感的急性期蛋白。比血沉，白细胞计数更敏感。 细菌性感染，心肌损伤，风湿性疾患……与疾病的进 程和愈后有关。

7 、尿总蛋白测定 【测定方法】1、磺基水杨酸－硫酸钠比浊法。 【参考范围】儿童：﹤40mg/24h 2、干化学法 3、尿蛋白电泳法 【参考范围】儿童：﹤40mg/24h 成人：30－130mg/24h 【临床意义】生理性蛋白尿、病理性蛋白尿（肾前性、肾 后性、肾性蛋白尿（肾小球、肾小管、混合性蛋白尿）。 测定方法

8、尿微量蛋白质测定 目前临床生化常做检测的尿微量蛋白质有：白蛋白（Alb ）、 β2 － 微球蛋白（β2 －m）、α1 －微球蛋白（α1 －m）、视黄醇结合蛋白(RBP)、转铁蛋白（TRF）、本周蛋白（B－JP）、 α2－巨球蛋白（ α2 －MG)等。

9、脑脊液蛋白质测定 【测定方法】 ：浊度法－－磺基水杨酸－硫酸钠比浊法。 【参考范围】150－450mg/L 【临床意义】 脑膜炎：化脓性脑膜炎蛋白质含量显著增高，结核性脑膜炎时中度增高，病毒性脑炎时轻度增高。 出血性脑病：脑室及蛛网膜下腔出血时脑脊液蛋白质含量中度增高。脑部肿瘤或椎管梗阻如脊髓肿瘤、蛛网膜下腔粘连脑脊液蛋白质含量增高。

检验学部属于蛋白质的实验项目 生化室：总蛋白，白蛋白，球蛋白，载脂蛋白A1，载脂蛋 血凝室：纤维蛋白原，AT-Ⅲ（α2-球蛋白），各种凝血因 白B，前白蛋白，脂蛋白（a），高密度脂蛋白，低密度脂蛋 白，极低密度脂蛋白，血清蛋白电泳（白蛋白，α1、α2 、 β 、γ球蛋白），血尿β2微球蛋白，糖化血红蛋白，肌钙 蛋白-T，24小时尿蛋白定量，尿微量白蛋白，酶类。 血凝室：纤维蛋白原，AT-Ⅲ（α2-球蛋白），各种凝血因 子除第Ⅳ因子（Ca2+）均为蛋白质，FDP,D-D是纤维蛋白 降解产物。

检验学部属于蛋白质的实验项目 免疫室 免疫球蛋白IgM, IgG, IgA, C反应蛋白，前S1蛋白、类风湿因子 肝炎抗原抗体类：HAV-IgM， HBSAg, HBSAb, HBEAg, HBEAb, HBCAb-IgM, HBCAg-IgG, 丙肝抗体，戊肝抗体 肿瘤标志物：细胞角质素抗原211，铁蛋白，甲胎 蛋白， 激素类: 催乳素(PRL)，促黄体生成素(LH)，促卵泡生成素(FSH)， 促甲状腺激素(TSH),胰岛素， 补体类：C3,C4

小结： 了解血浆蛋白质组成、功能及分类。 熟悉一些重要血浆蛋白质。 掌握疾病时血浆蛋白质变化 掌握体液蛋白质测定

体液蛋白质的检测实践

溴甲酚绿法测定－－ 血浆白蛋白

临床实践课注意事项： 已进入临床实验室（污染区） 注意生物安全防护： ① 必须穿白大衣，长发束紧，操作必须戴手套，不要随意触摸，操作完毕立刻摘掉手套，扔入医疗垃圾桶。 ②标本视为有潜在生物安全危害，小心操作，如有标本外溅在皮肤上，立刻用肥皂及流水冲洗，在桌面上，不要自行处理，赶紧报告老师。 ③不要冲洗随意丢失医疗垃圾，标本、试管放到试管架上，吸头用后放到指定垃圾处。 ④实验后立刻洗手，注意洗手步骤。

临床应用 电泳技术 血清蛋白在PH为8.8的缓冲条件下在琼酯糖凝胶上被清晰分离，用氨基黑染色，在酸性溶液中脱色 。

测定方法：溴甲酚绿法 （推荐法） 【实验原理】 血清中白蛋白在pH4.2的缓冲液中带正电荷，在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷溴甲酚绿（bromocresol green,BCG）结合生成蓝绿色复合物，在630nm处有吸收峰，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，可测出白蛋白含量。 白蛋白+BCG → 白蛋白－BCG复合物 A=KLC

测定方法：溴甲酚绿法 （推荐法） 【试剂】 【仪器】 ①琥珀酸缓冲液(PH4.2)、叠氮钠、聚氧化乙烯月桂醚（brij-35)、BCG ②40g/L白蛋白标准液 【仪器】 半自动生化分析仪、自动生化分析仪、分光光度计

测定方法：溴甲酚绿法 （推荐法） 【实验步骤】（半自动生化分析法） ① 空白管、标准管、测定管 ② 手工操作：样品量：5μl 试剂量：1.5ml 室温放置5分钟 ③仪器参数：波长630nm 、 终点法等 【计算】 白蛋白浓度＝A样品/A标准×标准浓度(g/L)

测定方法：溴甲酚绿法 （推荐法） 【参考区间】 正常成人: 35－55g/L 【临床意义】 增高：严重失水、输入过多。 减少：丢失、肝脏疾病、消耗性疾病、腹水形成、 肾病、 严重感染、胶原病。 血清白蛋白小于20g/L，临床可出现水肿。

实验小结： 1、样品白蛋白浓度超过60g/L,用生理盐水稀释样品后，重新测定，结果乘以稀释倍数。 2、加样枪的使用

实验结果的分析与报告

实验结果的分析与报告 附加检验项目及时间限制：如果需要附加检验项目，在原 因分析失败而需再检验样本的处理：对样本分析失败导 始样品有足够的量，可允许用于另外附加项目时，申请者可于 样本采集后2小时内提出检测申请。 因分析失败而需再检验样本的处理：对样本分析失败导 致检验结果不能发出或分析结果与临床诊断明显不符合时，应 及时对原始样品做重复检验。如果因重复检验失败导致检验结 果还是不能发出或分析结果与临床诊断明显还是不符合时，就 应与临床联系，第一、告诉其情况；第二、请求临床重新抽取 静脉血标本复查。

废物处理

废物处理 检查过样本的处理：检验过的样本放入黄色垃 圾袋中，由科内卫生员统一收集，交医院环卫 人员送到医院垃圾处理站统一处理。