普通高等教育国家级十一五规划教材 《组织学与胚胎学》理论课件 普通高等教育国家级十一五规划教材 《组织学与胚胎学》理论课件 组织学 第1章 绪论 石玉秀 中国医科大学

一、组织学的研究内容 组织学（histology）：研究机体微细结构及其 相关功能的科学。 上皮组织 结缔组织 肌肉组织 细胞 细胞间质 神经组织 细胞 细胞间质 器官和系统 组织 （细胞外基质）

细胞-组织-器官-系统 细胞：是机体形态结构与功能的基本单位。 组织：由细胞和细胞间质(又称细胞外基质) 组成的群体结构，是构成机体器官的 基本成分。 器官：具有一定的形态结构，并执行特定的 生理功能。 系统：由一些结构连续、功能相关的器官组合而 成，完成连续的生理活动。

人体器官分类－组织学特征 中央：大空腔 中空性 管壁：分3‒4层 如：心血管、消化管、呼吸道等 器官 表面：被模 实质性 如：消化腺、淋巴器官 、 内分泌腺、肾脏等。 实质性 内部：实质－行使功能

组织学结构观察 光镜结构－用光学显微镜观察的结构 （LM）(light microscope ,LM 简称光镜) 组织学 结构 电镜结构－电子显微镜下观察的结构 （EM）(electron microscope, EM简称电镜） 又称超微结构(ultrastructure)

二、组织学的研究方法和常用技术 1、常用组织切片标本制备技术 ①取材和固定; ②脱水和包埋; ③切片和染色; ④封片。 (一)光学显微镜技术 1、常用组织切片标本制备技术 石蜡切片术 ①取材和固定; ②脱水和包埋; ③切片和染色; ④封片。 其他；火棉胶包埋, 冰冻切片, 涂片,铺片,磨片等

常用染色方法：HE染色 （嗜碱性） HE染色 苏木精 伊红 （Hematoxylin） （Eosin） 碱性染料 酸性染料 苏木精 伊红 （Hematoxylin） （Eosin） 碱性染料 酸性染料 细胞核中的染色质、细胞质中的核糖体 细胞质 细胞间质成份 染成蓝色 （嗜碱性） 染成红色 （嗜酸性） HE染色

组织结构的嗜色性 嗜碱性：可使细胞核内的染色质 及细胞质内的核糖体等 结构染成蓝紫色。 嗜酸性：可使多数细胞的细胞质 染成粉红色。 中性： 与两种染液亲合力都不强。 嗜酸性 嗜碱性

其它染色方法 A 嗜银性 B 嗜铬性 C 异染性

普通光学显微镜 （light microscope ，LM ） 是观察组织细胞微细结构最常用的工具， 分为 光学部分 起放大作用 可放大1500倍左右 机械部分

几种特殊显微镜术 （1）相差显微镜 (phase contrast microscope) 用于观察生活细胞 和末经染色细胞的 形态结构。 神经干细胞培养

(2) 荧光显微镜 (fluorescence micrscope) 是用以观察 细胞、组织内 荧光物质的分布。 神经球

(二) 共焦激光扫描显微镜 共焦激光扫描显微镜 (confocal laser scanning microscope，CLSM) 由激光光源、共焦成像扫描 系统、电子光学系统和微机 图象分析系统四部份构成。 可对样品进行断层扫描重建 三维图像，进行体视学分析； 测定细胞内pH、钙浓度等； 更精确地检测、识别， 组织细胞的微细结构及其变 化。CLSM又称细胞CT。 CLSM

CLSM 图像 Human neuronal precursor cells CLSM　海马MR、GR共存

(三)电子显微镜技术 （electron microscope, EM） 透射电镜 (transmission electron microscope,TEM) 观察细胞内部结构 分辨率为0.1-0.2nm,可放大几万－几十万倍 扫描电镜（scanning electron microscope,SEM) 观察组织或细胞表面的立体结构 冰冻蚀刻（freeze etching method） 观察细胞断裂表面形态结构 分析电镜 X–射线显微分析术（X–ray microanalysis） 研究细胞、组织内元素种类分布和含量

透射电镜与照片 淋巴细胞 TEM

扫描电镜与照片 SEM SEM 1.纤毛 2.微绒毛

冰冻蚀刻照片 冰冻蚀刻　细胞 冷冻断裂　肾小球　右下　线粒体

分析电镜－X线微区分析图片 分析电镜 X线微区分析

(四)组织化学和细胞化学技术 糖类显示法－PAS反应： 过碘酸—希夫反应 (periodic acid Schiff reaction，PAS)： 检测组织或细胞中有无多糖存在。 原理： PAS阳性　小肠上皮 PA Schiff 试剂 多糖 醛 紫红色沉淀 氧化 PAS反应阳性部位即表示多糖和蛋白多糖的存在

组织细胞化学染色图片 脂类显示法　苏丹Ⅲ 酶细胞化学　神经元ACP酶阳性 脂类显示法　苏丹Ⅲ 锇酸　髓鞘染色 核酸显示法

免疫细胞化学原理 利用抗原（antigen, Ag），抗体（antibody）特异 结合的原理，用已知抗体检测未知抗原的一种方法。

免疫细胞化学标记物

免疫细胞化学－PAP法

免疫细胞化学－ABC法

(五)免疫组织化学与细胞化学技术 免疫组织化学术(immunohistochemistry) 是将免疫学原理与组织化学技术 相结合建立的新技术， 根据抗原与抗体特异性 结合的特点，检测组织 细胞内某种多肽、蛋白质 等大分子物质的存在与分布。 人鼻粘膜上皮棘细胞细胞间桥TM阳性

(六)原位杂交术 原位杂交(in situ hybridization) 是一种敏感性高、特异性强的， 能在组织细胞原位进行的核 酸分子杂交技术。 常用的标记物有两种： 1、放射性同位素， 如3H、14C、 32P、35S、125I， 2、为非放射性物质， 如地高辛等。 非放射性原位杂交 海马GAP－43 mRNA

(七)放射自显影术 放射自显影术(autoradiograph) 旨在追踪某些物质在体内、组织 或细胞中的分布与代谢径路。 同位素注入 取材 制标本 涂核乳胶 暗室曝光 显影、定影 染色 LM观察 放射自显影　甲状腺125I

(八)组织培养和组织工程 组织工程基本方法示意图 A获取组织 B分离、培养种子细胞 C制备三维支架 D将种子细胞种植于支架 E将细胞-支架复合物植入组织缺损处 细胞培养－神经干细胞培养

(九)组织细胞定量术 1．显微分光光度术 2．形态计量术 3．流式细胞术 应用显微分光光度计(microspectrophotometer)对组织和细胞内化学成分进行定量分析。 2．形态计量术 运用数学和统计学原理对组织细胞内各种成分的数量、体积、表面积等的测量 。目前多应用图像分析。 3．流式细胞术 应用流式细胞仪进行细胞定量分析和细胞分类研究。

三、组织学的学习方法 1.理论联系实际 2.结构与功能关系 3.断面与立体的关系 4.建立动态变化的概念 5.善于总结，掌握规律