Professor of Surgery and Oncology South Boston, Boston, MA 02127, USA 肿瘤一针消, 一个有效的广谱抗肿瘤新药 David L. Liu, MD, PhD Professor of Surgery and Oncology RedSun Institute 242 Dorchester Street South Boston, Boston, MA 02127, USA

概 述 肿瘤“一针消”是一个新型广谱抗肿瘤药物。 一针消是一个天然小分子化合物。 概 述 肿瘤“一针消”是一个新型广谱抗肿瘤药物。 一针消是一个天然小分子化合物。 “一针消”的英文缩写名是CA—LZD。一针消在美国麻省专利、商标管理局的注册商标名是《Yizhenxiao (LZD Injection)R》 发明人是美国麻省太阳集团股份有限公司刘乐欣医学博士、教授。

Crystal Structure of CA-LZD

大量实验研究已经反复证明，当进行肿瘤内注射和治疗时，该药能够十分有效地治愈多种小的良性和恶性实体肿瘤，和有效地治疗多种大的良性和恶性实体肿瘤。在C57BL6肿瘤小鼠，只需应用0.1ml“一针消”溶液就能杀死相当于小鼠体重2.5-5% (20x20毫米直径)的多种大肿瘤。临床初期治疗结果证明，一针消对人体良性和恶性肿瘤的治疗作用十分显著。

一针消治疗肿瘤的作用机制 1. 快速地与肿瘤细胞表面的分子 产生交叉反应从而破坏细胞膜 一针消治疗肿瘤的作用机制 1. 快速地与肿瘤细胞表面的分子 产生交叉反应从而破坏细胞膜

Dynamic Changes in Tumor Cell Death Treated With CA-LZD

CA-LZD Damages To Membrane of Tumor Cells

SCANNING AND TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPIES

一针消治疗肿瘤的 作用机制: 2. 能穿透细胞膜进入细胞内产生微小爆炸 一针消治疗肿瘤的 作用机制: 2. 能穿透细胞膜进入细胞内产生微小爆炸

3. 引起肿瘤血管表面及肿瘤血管壁之组织剥离， 一针消治疗肿瘤的作用机制 3. 引起肿瘤血管表面及肿瘤血管壁之组织剥离， 导致内皮细胞死亡，破坏肿瘤血管

一针消治疗肿瘤的作用机制 4. 抑制治疗部位肿瘤细胞 对氧的利用 一针消治疗肿瘤的作用机制 4. 抑制治疗部位肿瘤细胞 对氧的利用

临床前期试验 在组织培养实验中，一针消能在三十分钟内杀死十一种恶性肿瘤细胞株。 在体内，只需数小时便能杀死药到部位之肿瘤细胞和破坏肿瘤血管。

与目前常用的抗肿瘤化疗药物相比较 投给治疗剂量一针消注射液没有任何副作用， 对人体没有细胞毒性 对造血系统也无抑制作用。 一针消没有致热、致癌和致畸变等副反应。 体内研究证明，癌细胞或良性肿瘤细胞对一针消不产生耐药性。因此，该药物能够反复地和有效地治疗复发肿瘤。

一针消是高度有效的抗肿瘤新药-1 肿瘤内单次注射一针消的方案，已经治愈了数以百计的小鼠MCA207肉瘤，MC38结肠腺瘤，B16黑色素瘤和根治了种植在裸鼠身上的人体子宫颈癌、卵巢癌、6361黑色素瘤、MCF-7乳腺癌和PC-3前列腺癌。

一针消是高度有效的抗肿瘤新药-2 当静脉注射投给一针消时，肝脏及肾脏内的转移癌灶均被有效地抑制。

一针消是高度有效的抗肿瘤新药-3 体外淋巴细胞杀伤肿瘤细胞毒性试验证明，一针消能够使治愈了的肿瘤宿主产生针对该肿瘤的强烈细胞毒性反应，表明一针消还具有预防治疗后的肿瘤复发的作用。

临床适应症 肿瘤“一针消”是一个广谱抗肿瘤药物。 临床适应症 肿瘤“一针消”是一个广谱抗肿瘤药物。 1.作为单一抗癌药行肿瘤内注射适用于治疗所有类型的实体肿瘤。如，甲状腺癌、复发性甲状腺癌、乳腺癌、复发性乳腺癌、结肠癌、直肠癌、宫颈癌和皮肤癌等。

临床适应症 2.与手术联合应用可以大大增强抗肿瘤功效。 术前肿瘤内注射“一针消”可以预先杀死拟将 切除的肿瘤，从而减少和预防因手术操作引起的肿瘤扩散和转移。对手术无法切除的肿瘤或不能彻底根治性切除的肿瘤，作残留肿瘤组织内注射可以作为一种有效的姑息疗法。

临床适应症 一针消也能与化疗和放疗联合应用 以增强治疗效果。

临床适应症 各种良性实体瘤 一针消还能有效地用于治疗各种良性实体瘤。如，甲状腺瘤、甲状腺囊肿、乳腺腺瘤、乳腺纤维瘤、脂肪瘤、腱鞘囊肿、血管瘤和静脉血管扩张等。

临床适应症 某些常见病 甲亢 乳腺纤维增生疾病 外周血管静脉曲张

初步临床研究 总计有四十三例良性和恶性肿瘤病人接受了一针消肿瘤内注射。 其中包括三例腺癌，一例磷状细胞癌，一例黑色素瘤和一例淋巴瘤。六例病人中，三例经过二次肿瘤内注入一针消而治愈。另三例巨大肿瘤患者（肿瘤直径大于12CM）也获得了缓解。 三十五名良性肿瘤病人（甲状腺瘤、脂肪瘤、乳腺纤维瘤、乳腺纤维增生病和腱鞘囊肿），74%获得治愈。 目前，我们正在试验应用一针消治疗甲亢，血管瘤和静脉曲张等病症的可能性，假如能获成功，在未来甲亢病人再也不需手术治疗。

已完成30个项目临床前期研究 根据中国和美国新药研究及申报要求，我们已经踏实地和扎实地完成了以下三十个项目方面的研究。 这些研究工作均在美国NIH认可的实验室和动物中心完成。

研究项目-1 一个天然小分子化合物 一针消是一个天然小分子化合物。 它的晶体结构已经被阐明。

一针消化合物的分子结构式。其分子量和分子结构式已经研究清楚。 研究项目-2 分子结构式 一针消化合物的分子结构式。其分子量和分子结构式已经研究清楚。 出于保密考虑，在专利申请批准之前不能公开。

研究项目-3 pH值 室温下，一针消pH值为7.32。

研究项目-4 可溶性和稳定性 水溶性。 室温下结构稳定，保持三年不变。

研究项目-5 LD50 & MTD 半数致死剂量(LD50)和最高耐受剂量（MTD) 肌注半数致死剂量(LD50): C57BL6小鼠 = 3.4165克/公斤体重 SD 大鼠 = 2.3910克/公斤体重 人体理论剂量 = 0.3758克/公斤体重 肌注最高耐受剂量(MTD): C57BL6小鼠 = 2.8475克/公斤体重 SD 大鼠 = 1.9932克/公斤体重 人体 = 0.3132克/公斤体重

研究项目-6 急性毒性试验 包括治疗前后检查肝功能，肾功能，空腹血糖和血清电解质水平之变化。 肝脏：肌内投药最高耐受剂量一针消注射液后，血液ALT水平轻度升高，并在3天内回复正常范围。病理组织学检查显示肝细胞有轻度水肿，但在治疗后3天内恢复正常（详见Ⅱ－4、6页） 肾脏：肌内投给最高耐受剂量一针消注射液后，血清尿素水平轻度升高，并在48小时内回复到正常范围。血清尿酸水平在治疗后72小时回复至正常范围（详见第Ⅱ－7页）。组织学检验证明轻度肿胀的肾小体在72小时恢复正常。

显微镜下病检结果证明心脏和肺结构正常。。 研究项目-7 急性毒性试验 胰腺和血糖：无明显影响。 心脏、血压和肺：对心脏无明显影响。肌注后5～10分钟见心率加快，可能与局部刺激和疼痛有关。颈动脉插管连续监测心率和血压，未见异常变化（详见Ⅱ－9页）。 显微镜下病检结果证明心脏和肺结构正常。。

肌注给药时，一针消对治疗局部正常组织仅产生轻度损伤，对生命器官如心、肝、肺、肾、胰和生殖器官没有明显毒性。 研究项目-8 没有明显毒副反应 肌注给药时，一针消对治疗局部正常组织仅产生轻度损伤，对生命器官如心、肝、肺、肾、胰和生殖器官没有明显毒性。

慢性毒性试验 研究项目-10 60只SD大鼠接受了最高耐受剂量（1.9932克／公斤体重）一针消治疗。 治疗后66天采血检测肝、肾、胰腺功能，并取组织样本作病理学检查，均未见有任何异常。详见（Ⅱ－10，Ⅱ－11页）。

Pharmacokinetical Study of CA-LZD

研究项目-9 药物动力学研究 已分别在小鼠和大鼠进行过一针消肌注模型研究，50％原药从血液循环中清除的时间为8-12小时±。一针消静脉注射50％原药从血液中清除的时间为8～10小时±。98％原药从血液循环中清除的时间是48小时左右。少量药物成分从胆汁中排入肠道经粪便排出。详细图表见Ⅱ-2，Ⅱ-3和Ⅱ-4页。

研究项目-11 一针消对血液动力学之影响 在SD大鼠，颈总动脉持续插管监测表明，该药对受试动物心率、心律和血压没有副作用。详见Ⅱ－12页。

研究项目-12 对造血系统的影响 外周血血细胞计数和骨髓涂片检查证明：对血细胞生成没有影响。  

研究项目-13 对血液氧分压和二氧化碳分压的影响 研究项目-13 对血液氧分压和二氧化碳分压的影响 一针消对外周血液氧分压和二氧化碳分压没有作用。但在治疗的肿瘤组织局部，一针消能够抑制肿瘤细胞对氧的摄取和利用。  

研究项目-14 对水电解质的影响 在小鼠及大鼠系列观察证明一针消对血液电解质水平没有影响。

研究项目-15 对小鼠细胞免疫的影响 一针消对受治正常C57BL6小鼠细胞免疫力无副作用。使用流体细胞仪对受试动物脾内CD3，CD4，CD8，CD116，CD45R和自然杀伤细胞亚群之活性进行反复测试无抑制作用。  

研究项目-15 对细胞肽的影响 对四种抗肿瘤细胞肽（IL-2，IL-12， TNF-α和IFN-γ）水平没有影响。 详见Ⅲ—2页。

已应用50只Bal/c小鼠分为5个实验小组（每组10只动物），对其骨髓淋巴 研究项目-16 致畸性研究 已应用50只Bal/c小鼠分为5个实验小组（每组10只动物），对其骨髓淋巴 细胞染色体进行了严格的对照研究。 第一组 为阴性对照：所有受试动物均接受了三个剂量生理盐水肌注。 第二组 为高剂量一针消治疗组：所有受试动物接受了最高耐受剂量一针消（56.96毫 克），每日一次，共三天。 第三组 为中剂量一针消治疗组：即投给75％最高耐受剂量的一针消，每日一次，共三 天。 第四组 为低剂量一针消治疗组: 投给受试动物50％的最高耐受剂量的一针消，每日一 次，共三天。 第五组 为阳性对照组：肌内投给单剂量环磷酰胺250毫克／公斤体重。 结果证明，阳性对照组动物之淋巴细胞染色体有断裂，错位和桥接等病理改变。 然而在对照组和高剂量，中剂量及低剂量一针消治疗组未见有淋巴细胞染色体 畸变现象。详见图片Ⅳ－2和Ⅳ－3页。

CA-LZD On Chromosome Mutation

研究项目-17 致热源试验 已在18个SD动物进行了研究。一针消不引起受试动物体温升高，无发烧反应。在豚鼠，一针消也不引起过敏或变态反应。

研究项目-18 致癌性试验 已用60只C57BL6小鼠分成5组（每组12个动物）进行了严格对比研究。其分组方法与致畸性研究相同。结果证明，一针消没有致癌性副作用。详见Ⅳ－4。

研究项目-19 对生育和生殖系统之影响 一针消对受试雌雄动物生育和生殖系统无副作用。对受试雌性动物之排卵（照32），受孕（照33）和生育（照34）均无影响。详见Ⅳ－4页。

研究项目-20 体外肿瘤细胞杀伤试验 将三种不同类型的小鼠肿瘤细胞放入治疗浓度的一针消组织培养液中30分钟，使用台盼兰排除实验判断细胞活力，结果证明：上述恶性肿瘤细胞均被全部杀死。 将七种不同类型的人体肿瘤细胞（DU145前列腺癌细胞，PC-3前列腺癌细胞，Colon-A结肠腺癌细胞，HT29结肠腺癌细胞，Hela宫颈癌细胞，Ovcar5卵巢癌细胞和HL60白血病细胞）放入治疗浓度的一针消组织培养液中30分钟，70%±的肿瘤细胞被杀死；将治疗时间延长至60分，所有七种恶性肿瘤细胞全被杀死。

研究项目-21 体内肿瘤细胞杀伤试验 一针消对3种小鼠恶性肿瘤的疗效 材料和方法： 研究项目-21 体内肿瘤细胞杀伤试验 一针消对3种小鼠恶性肿瘤的疗效  材料和方法： 小鼠MCA207肉瘤细胞，由美国NIH外科实验室提供；MC38腺癌细胞，由哈佛大学Dana Farber 癌症研究所提供，B16F1小鼠黑色瘤细胞由美国ATCC组织细胞库提供。组织培养液PRMI1640和DMEM及其它组织培养剂均由美国Life Technology生物公司提供。实验动物C57BL6小鼠由美国Jackson动物中心提供。全部动物研究项目均在美国国家NIH认可的实验室内完成。

动物肿瘤模型 于C57BL6小鼠皮下接种1×106肿瘤细胞而成。 小肿瘤模型：当肿瘤大小达到5×5mm直径时，治疗开始。 治疗剂量：因为本药为肿瘤内给药疗法，故治疗剂量依肿瘤大小而定，平均治疗剂量为28.5毫克±10毫克。

实验分组 第一组：MCA207肿瘤：42个肿瘤动物全部被治愈，治愈率为100%。平均肿瘤大小为7-9毫米直径。此批肿瘤在单次肿瘤内给药后平均2天消退80%左右，治疗后平均3天，所有治疗肿瘤完全消退。治疗后一周，有2例局部复发，均被再次肿瘤内给药而治愈。 第二组：MC38腺癌。36只肿瘤动物全部被治愈，治愈率为100%。治疗后2天，所有肿瘤平均消退60-70%。平均在治疗后4天，所有治疗肿瘤全部消退。本组治愈后的肿瘤没有观察到有复发现象。 第三组：小鼠B16F1黑色素瘤。本组24只B16F1肿瘤小鼠在治疗后3天平均肿瘤萎缩70%，4-5天全部消退。治疗后9天，本组有2例局部复发，一例经1次重复给药而愈，另一例接受了3次反复治疗而愈。 第四组：肿瘤内注射95%酒精对照组。

肿瘤内注射95%酒精对照组 采用95%酒精病灶内或肿瘤内注射治疗是一个传统的方法。本组选用95%酒精作为对照治疗用药。在24只C57B16小鼠分为4个亚组，每组6只进行了下列对照研究。 亚组1：正常动物剃去背部毛发，注入0.5ml 95% 酒精。结果产生巨大伤口和局部无菌性坏死，迟至3-4周才愈合。 亚组2： MCA207肿瘤。能杀伤和杀死肿瘤组织。 亚组3：MC38肿瘤。仅能杀伤但不能杀死全部肿瘤。 亚组4：B16F1黑色素瘤。能快速破坏80%左右的肿瘤中央区组织，但肿瘤周边组织仍然残留存活。

DIFFUSION DIMENSIONS OF CA-LZD Injection with 0.1 ml CA-LZD 10 x 10 mm2 Injection with 0.2 ml CA-LZD 15 x 15 mm2 Injection with 0.3 ml CA-LZD 25 x 25 mm2 Injection with 0.5 ml CA-LZD 30 x 30 mm2 Injection with 1.0 ml CA-LZD 40 x 40 mm2 Injection with 2.0 ml CA-LZD 60 x 60 mm2 Injection with 3.0 ml CA-LZD 70 x 70 mm2

研究项目-22 体内肿瘤杀伤试验 一针消已经治愈了裸鼠体内接种的5种人体恶性肿瘤。 材料和方法： 细胞、组织培养实验室材料与前述相同。裸鼠由美国Jackson动物中心提供，人体恶性肿瘤细胞株（Hela 宫颈癌细胞，Ovcar 5 卵巢癌细胞，6361黑色瘤细胞，MCF-7乳腺癌细胞和PC-3前列腺癌细胞均由美国ATCC组织细胞库提供。所有动物实验条件均符合NIH管理标准。

肿瘤模型 皮下注入1×106人体肿瘤细胞。平均在接种肿瘤2周后肿瘤达到7×7mm，或3周后到达10×10mm，即开始治疗。

实验动物及分组 60只裸鼠，雌雄各半，体重26-28克，分成5个实验组，每组12只动物。当肿瘤大小达到7×7mm大小时即开始治疗。 组1：Hela子宫颈癌模型。全部肿瘤均经单次给药治愈。 组2：Ovcar5 卵巢癌模型。全部肿瘤均经单次给药治愈。治疗后 一月有1只动物在接种肿瘤部位进针处有一新生肿瘤，经单 次给药而愈。 组3：6361黑色素瘤，所有肿瘤均被治愈。一月后有2例局部复发， 均经三次小剂给药而愈。 组4：MCF-7乳腺癌，全部治愈。 组5：PC-3前列腺癌，全部治愈。

结 论 一针消肿瘤内给药能够十分有效地治愈种植在裸鼠体内的5中不同类型的人体肿瘤，也能有效地治疗复发肿瘤，且不产生耐药性。详见彩照和电视片。

研究项目-23 光学显微镜结果 低剂量一针消肿瘤内给药：慢性细胞凋亡，肿瘤细胞浆内产生微小爆炸。 高剂量一针消肿瘤内给药：急性充血、淤血、出血、坏死。、显著的肿瘤血管内皮细胞损伤。

研究项目-24 人体最高耐受剂量和毒性 12个志愿者被收入本组。正如前述，一针消是一个天然的分子化合物，没有毒性反应。根据文献记载，一针消的主要抗癌成分已在我国西南地区作为偏方应用有数百年。 根据病人体重，单次肿瘤内投给2克一针消精提物是完全安全的。而实际治疗肿瘤病人的剂量是较小。同此根本不存在任何生命威胁之类的毒副反应。所有观察的志愿接受治疗的病人对其肝、肾、心、肺、脑没有明显损害。

研究项目-25 一针消治愈了多例肿瘤病人 （公司内部设置的临床试验初步资料） 本研究总计收集了43例良性和恶性实体肿瘤病人。其中6例患有实体恶性肿瘤。 原发性腺癌3例 磷状细胞癌1例 黑色素瘤1例 颈部孤独淋巴瘤1例。

研究项目-28 扫描电子显微镜 受治肿瘤细胞膜表面出现有多个筛样洞孔，肿瘤细胞膜崩解为碎片，肿瘤血管表层损伤。

透视电子显微镜 肿瘤细胞膜、核膜被破坏，细胞染色质碎裂，线粒体肿胀和破坏，肿瘤血管内皮细胞连接断裂，内皮细胞核脱落，血管壁断裂。

结 论 一针消肿瘤内给药能够十分有效地治愈多种小的良性和恶性实体肿瘤，和有效地治疗多种大的良性和恶性实体肿瘤。也能有效地治疗复发肿瘤，且不产生耐药性。 肌注给药时，一针消对治疗局部正常组织仅产生轻度损伤，对生命器官如心、肝、肺、肾、胰和生殖器官没有明显毒性。