实验性质:综合 实验类别:本科基础实验 实验学时:4 实验教师:陈兴都 活性污泥中微生物 分离及生长量检测 实验性质:综合 实验类别:本科基础实验 实验学时:4 实验教师:陈兴都
一、实验目的 (1)通过对活性污泥中微生物(主要是细菌) 生长量的检测实验,对微生物菌落形态特征、细菌生长曲线特点及测定原理有所了解。 (2)够熟练使用分光光度计,掌握培养基制备及无菌操作方法、微生物纯种分离,学会用比浊法测定细菌的生长曲线。
二、仪器与材料 实验仪器:高压灭菌锅 721分光光度计 比色杯 恒温摇床 实验材料:活性污泥 肉膏蛋白胨培养基(固体和液体) 无菌水
三、实验原理 采用涂布法将菌液(活性污泥)分散在平板培养基表面,经培养后获得单菌落。 由于细菌菌悬液的浓度与光密度(OD值)成正比,本实验采用比浊法,利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度,并将所测的OD值与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线,从而了解各菌的生长规律。
四、实验内容 (1)细菌培养基(固体和液体)的制备及灭菌; (2)细菌纯种分离; (3)细菌菌落形态观察; (4)分光光度计的使用及细菌生长(比浊法)的测定。
五、实验步骤 LB培养基(固体和液体)的制备及灭菌。 活性污泥中微生物分离 称量药品 溶化 调pH 分装 包扎 灭菌 制作平板 活性污泥梯度稀释 涂平板 37℃恒温培养24小时 细菌菌落形态观察
五、实验步骤 活性污泥生长量检测 接入 10mL活性污泥 100mL液体培养基 37℃振荡培养 每隔2h测定培养液OD值 绘制生长曲线
六、实验报告 实验结果 细菌生长量的测定: 细菌生长曲线绘制: 以细菌培养时间为横坐标,以所测得的细菌培养液OD(吸光度)值为纵坐标绘制细菌生长曲线。 分析与讨论 对实验结果与存在的问题进行总结与简要分析。 时间 OD600