微生物学知识培训 质量保证部 2006-10-27

主要内容 微生物概述 微生物与人类的关系 制药与微生物

微生物 什么是微生物：简单的说，微生物就是微小的生物。是一群个体微小、结构简单、肉眼不能直接看到，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍、几千甚至几万倍才能看到的微小生物。 微生物简单分类：病毒、细菌、真菌

爱滋病病毒

葡萄球菌

乳酸杆菌

肺炎链球菌

勾端螺旋体

酵母菌

微生物的分布 微生物在地球的生物圈内无处不在，漂浮在空中，栖息于土壤各层，游弋于各类水域（海洋、湖泊、江河、沼泽），附着于人和动植物体表或体内，对人类和环境无时不在产生巨大的影响。

微生物的作用 绝大多数微生物对人和动物是有益的，有些还是必不可少的。 微生物已广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。 抗生素、酸奶、疫苗、酒类等等；

微生物的危害 微生物中也有一部分能引起人或动植物病害，这些具有治病性的微生物，称为病原微生物。如人类的许多传染病（如感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。 从药品生产的卫生学而言，微生物对药品原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格、直接或间接对人类造成危害的重要因素。

GMP与微生物 推行GMP目的：消灭污染、混药、差错 污染的定义：当一个产品存在有不需要 的物质时，它即受到污染。 污染的定义：当一个产品存在有不需要　　　　　　的物质时，它即受到污染。 污染的形式：尘粒污染、微生物污染

尘粒污染 尘粒污染：是指产品因混入不属于它的那些尘粒而变得不纯净。尘埃、污物、棉绒、纤维以及我们的头发都是尘粒污染的潜在原因。 临床资料表明：如药品被7－2μm的尘粒污染了，尤其是静脉注射用药，可以导致热原反应、肺动脉炎、微血栓或异物肉芽肿等，严重的会致人死命。

微生物污染 微生物污染是指因微生物产生、附着而给特定的环境带来的不良影响。 如果细菌得到了必要的养料、一定量的水份和合适的温度，它们就能迅速繁殖，它们繁殖的速度快得惊人。通常一个细菌在仅仅24小时后可产生出281兆(百万)个的细菌。

传播污染的四大媒介 空气 水 表面 人

不同环境中微生物量 单位：个/g 环境 土壤 水 空气 人体皮肤 地板 微生物量 104-1010 10-104 10-105 1-104 10-103 单位：个/g

传播污染的四大媒介－空气 空气：空气并不是产生污染的介质，但它是污染的危险携带者。充满微生物的尘埃和水滴就是通过空气作为侵袭我们产品的媒介而成为重要的污染源的。（光线下很容易观察到尘粒） 当我们谈话、咳嗽和打喷嚏时，被污染了的水滴正是不断地从我们的呼吸道中放入我们的工作场所。尘埃微粒正是通过空气流不间断地在我们整个药厂范围循环运行着。

请记住：空气中存在的尘埃微粒是含有微生物(细菌等)的。因此，空气是侵袭我们产品的污染物的主要媒介。这就是为什么要尽量保持空气洁净是极为重要的。

传播污染的四大媒介－水 水：从理论上来讲，微生物在纯水中是不能生长的。但是，所有的各类水，不管怎样仔细地蒸溜或过滤，总会含有一定量的可溶性有机物和盐类。正是这些可溶性的物质可被微生物利用作为它们生长的养料源泉。 在生产过程中，水是应用最广泛的原料之一。这就是为什么我们药厂的卫生规程不仅必须仔细地控制用于生产过程的水，而且要控制好如何正确地用水来清洗我们的设备。

传播污染的四大媒介－表面 表面包括：天花板、墙壁、地面、设备、容器、工具或桌子以及物料包装； 由于空气中的湿度，所有表面都包上一层含水的薄膜。这层薄膜由于静电吸引而饱含尘埃微粒，有很多时候，表面还覆盖一层油状物质，此层油膜易受到尘粒污染。 表面因尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染。

请记住：一个表面看起来很干净，而实际上已经被千百万个微生物所污染，除非已经做了正确的消毒灭菌。

传播污染的四大媒介－人 人是最常见的传染源。事实上，人们常说，人是药厂中最不清洁的成份，最大的污染源。为什么呢?一个原因，人体是一个永不休止的污染媒介。当您每天来药厂上班时，您也许随身将几百万细菌带入工厂。 以下举出一些由你、我、他把污染带入工作场所的一些途径和方式 ：

人员污染的途径和方式 人的头发和皮肤 水滴 衣着 化妆品和珠宝手饰 生产过程中人们所引起的混杂和误差

人的头发和皮肤 您是否知道，每分钟从人类皮肤中要散发出约10,000个微生物?如果说，一小粒糖的空间中能装载4亿个微生物，那么，您想想看，在一股头发中可以容纳多少微生物呢? 我们的手，也拥有大量的微生物。此外，在人们正常的日常活动中都接触大量微生物。

水滴 呼吸和咳嗽将产生出大量水滴，这种水滴既含有尘粒污染也含有微生物污染。口腔是对污染最为敏感的地区。一次咳嗽或喷嚏将把干百万个微生物引入工作环境内。

衣着 从可洗涤的纺织物中，可能散发出棉绒和淀粉粒。而从羊毛、开士米和其它松软的针纺织物中也可能散落出纤维和磨损下的微粒。污染也可能通过我们的鞋子进入工作场所。

化妆品和珠宝手饰 发胶、气雾除臭剂、眼脸膏、香粉等，为微生物污染提供了极好的源泉。耳环、戒指、项链、手链、手机能传播微生物污染。如果，一小片珠宝碎片落入一批产品中，则可能引起严重的尘粒污染。

生产过程中人们所引起的混杂和误差 由人引起的污染也可能来自于生产过程中出现的混杂和误差。例如，当员工没有按照SOP进行工作时，车间的污染程度增加。让产品容器不加盖或防护地存放，将导致产品污染，手臂越过待灌装瓶子上方等。

人员的发菌量 洁净室内当工作人员穿无菌服时，静止时的发菌量为10～300个/(min·人)，躯体一般活动时的发菌量为150～1000个(min·人)，快步行走时的发菌量为900～2500个(min·人)； 咳嗽一次的发菌量为70～700个(min·人)，喷嚏一次的发菌量为4000～60000个(min·人)；

人员的发菌量 穿平常衣服时发菌量为3300～62000个(min·人)； 有口罩发菌量：无口罩发菌量为(1:7)～(1:14)； 发菌量：发尘量为(1:500)～(1:1000)； 可知洁净室内穿无菌衣人员的静态发菌量一般不超过300个(min·人)，动态发菌量一般不超过1000个(min·人)。

人体携带的微生物 人体各部位的正常微生物对人体无害，对药品会造成污染。 皮肤：葡萄球菌、枯草杆菌、类白喉杆菌、大肠杆菌、非致病性抗酸杆菌、真菌。 口腔：葡萄球菌、绿色链球菌、奈氏菌属、类白喉杆菌、乳酸杆菌、梭形杆菌、放线菌、拟杆菌、螺旋体、真菌 鼻咽腔：葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、奈氏菌属、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、真菌、腺病毒

思考题 试举出几种减少人员污染的方法？或应养成怎样的个人卫生习惯以减少污染？ 洁净区生产人员还应注意哪些事项？

药品生产人员卫生注意事项 新进人员的健康检查：药品生产企业在招收新职工时，一定要对新职工进行全面的健康检查，要确保新进厂的职工不患有急性或慢性传染病。另外还要根据新进职工安排的具体岗位性质再确定其它具体检查的项目。 建立生产人员健康档案：药品生产企业应对职工建立个人健康档案，以便于检查、了解、追踪个人健康好坏的状况 如果身体不适可能影响产品质量，必须及时报告主管。 培养药品生产人员良好的个人卫生习惯 洁净区生产人员要求

如何培养良好的个人卫生习惯 勤洗手、勤剪指甲 定期洗澡、勤理发 勤换衣服、勤洗工作服 在生产区内严禁 ：吃东西、抽烟、大声喧哗。

洁净区生产人员要求 洁净区工作人员要尽可能少而精，只有工作需要时才能进入； 操作人员在洁净区动作尽量要缓慢，避免剧烈运动，以减少人的发尘量； 洁净区的门应关紧，避免不必要的移动，以保持洁净区的风速、风量、风型和风压； 如果是无菌区的话，操作人员的自我约束就更多，要严格按无菌操作规程执行。

药品生产防污染控制措施 空气净化：100级（A、B）、10000级、　　　　　　　　　100000级 严格更衣程序：更衣验证、更衣顺序 消毒和灭菌

药品生产洁净室（区）空气洁净度级别 洁净度级别 尘粒最大允许数/个·m-3 微生物最大允许数 ≥0.5μm ≥5μm 100级 3500 5 沉降菌/个·皿-1 100级 3500 5 1 10000级 35000 2000 100 3 100000级 3500000 20000 500 10 300000级 10500000 60000 － 15

清洁、消毒和灭菌 清洁：用物理或化学的方法，清除附着在表面上的物质 消毒：指用物理或化学等方法杀灭物体上或介质中的病原微生物的繁殖体不能完全杀死芽孢。 灭菌：杀灭或不活化所有生命形式，包括芽孢

消毒 消毒剂：凡用于消毒的化学药品称为消毒剂。 用于与产品直接接触设备表面的消毒剂，不得有残留。 首次购入(或变换品牌)的消毒剂应进行验证 消毒剂品种应定期更换,防止产生耐药菌株 稀释配制后的消毒剂应规定储存期,并于规定储存期内使用完毕.

消毒 无菌室所使用的消毒剂应在净化工作台配制，需过滤的应准备好已灭菌的过滤器和容器。 配制好的消毒剂应注明消毒剂的名称、批号、配制日期及失效期 无菌室使用的消毒剂一般应在配制后48hrs内使用，如75% 乙醇；而有些要在24hrs内使用，如2%戊二醛

常用消毒剂浓度及用途 消毒液名称 浓度 用途 石炭酸 1% 用于设备、墙壁等消毒 5% 用于地面的清洁消毒 酒精 75% 用于各岗位、工用具、设备表面及人员洗手 新洁尔灭 0.4% 用于三更洗手、更衣柜擦洗 来苏尔 1.5% 用于一般生产区清洁 3% 用于地面、墙及工具消毒

常用消毒剂举例 作用：能使蛋白质脱水变性，有挥发性，无残留，作用时间短，对芽孢无效。 75％异丙醇：皮肤、工具、容器、设备 75％乙醇： 皮肤、工具、容器、设备 作用：能使蛋白质脱水变性，有挥发性，无残留，作用时间短，对芽孢无效。 75％异丙醇：皮肤、工具、容器、设备

常用消毒剂举例 0.1-0.2%新洁尔灭：溶液 皮肤、工具、设备、容器 0.02-0.05%洗必泰：皮肤 0.1-0.2%新洁尔灭：溶液 皮肤、工具、设备、容器 作用：破坏细胞膜，使蛋白质变性，对革兰氏阴性菌不敏感，具清洁与消毒双重作用，皮肤刺激性小，遇合成洗涤剂活性减弱  0.02-0.05%洗必泰：皮肤 作用：对革兰氏阳性菌、阴性菌有效，能快速杀灭细菌繁殖体，无毒性，但不能与阴离子清洁剂等物质、升汞、肥皂合用

常用消毒剂举例 3％-5％来苏水(甲酚皂)：地漏 其他： 作用:溶于水，呈碱性反应，有除垢作用，杀菌力强，有毒性。 臭氧、3%双氧水、用70%乙醇配制的0.5%洗必泰溶液、5%麝香草酚溶液

空气消毒 甲醛：熏蒸房间 紫外：紫外短波—蛋白质 臭氧： 每立方米用37％—40％甲醛液8-9mL，加4-5g高锰酸钾 作用：能破坏细菌繁殖体及许多芽胞、病毒、真菌；有挥发性，对眼睛及皮肤有刺激性 紫外：紫外短波—蛋白质 臭氧： 浓度：10ppm –10 万级；温度、相对湿度对臭氧消毒的效果有影响 ，无残留。消毒时间一般2小时。对设备材质要求高。 作用：氧化

灭菌除菌方法 无菌药品在实际生产中都需用灭菌或除菌方式来保证产品生产过程各环节和产品本身的无菌。 无菌 最终灭菌—如一些大输液，欣弗 无菌 最终灭菌—如一些大输液，欣弗 药品 无菌分装—某些粉针 非最终灭菌 无菌灌装—CLCP 列入中国药典的灭菌和除菌的方法有： 湿热灭菌、干热灭菌、辐射灭 菌、环氧乙烷灭菌、除菌过滤

湿热灭菌 在灭菌柜内利用高压蒸汽（一般是过饱和蒸汽）灭菌，灭菌能力强。适用耐湿热的药品、药液、培养基、无菌衣、不锈钢器具、部件等。 F0值:指标准灭菌时间,单位:分钟，121℃下达到无菌保证值所需的时间。 不同物品的标准灭菌时间不同,根据验证结果定 一般采用121 ℃，15-20分钟；我们采用121.1 ℃，30分钟， 123 ℃采用45分钟。 灭菌前必须先用流通蒸汽或真空排除灭菌柜内空气，预热至灭菌温度方可计时灭菌，实际灭菌时间高于F0值。灭菌后要采取措施防止再污染。

干热灭菌 在干燥空气中加热达到杀灭细菌的方法，是除热原公认的方法之一。 适用管制瓶，不锈钢器具，热稳定的产品 一般170-180℃，1小时以上 （采用180℃，2小时。）

除菌过滤——CLCP采用的技术 利用微孔滤膜使药液滤过，细菌截留，达到除菌效果。适合热不稳定药品，大部分生物制品。 滤膜的孔径不宜大于0.22um.—AMO: 0.2um 过滤器使用前应灭菌，使用前后需做过滤器完好性试验（起泡点试验）。 过滤器使用时间一般不超过8小时。 过滤能力：对0.22um过滤器而言 1cm2有效过滤面积的LRV应不小于7 采用本法除菌须配合无菌操作技术。

辐照灭菌—AMO BTC 将产品的容器和包装暴露在由适宜发射源辐射的r射线或适宜的电子加速器发出的射线中，达到杀灭细菌的目的。 适用上述三种方式不适用的器械、容器、不受辐射破坏的药品。如塑料制品 常用灭菌最小吸收剂量25kGy。如小于25kGy,应验证、应测试生物负载。

环氧乙烷灭菌—AMO CAP 将产品暴露在有环氧乙烷的环境中，使之达到灭菌目的。 适用气体中稳定的物质。 有毒性，且与空气混合达一定比例可能爆炸，残留。 灭菌效果与气体浓度、温度、暴露时间、湿度以及物质性质有关。

生物指示剂 用于监测灭菌效果，是一种标准的对灭菌条件稳定的微生物 选择要求：菌种稳定，耐受性大、无致病性、在贮存条件下不变异。 常用：湿热灭菌—嗜热脂肪芽孢杆菌孢子 干热灭菌—枯草芽孢杆菌孢子

无菌知识培训