贫血溶血实验室概述 北京协和医院检验科 张丽
溶血性贫血
一、定义 RBC寿命缩短，过早、过多破坏，超过骨髓造血代偿能力引起的贫血。
二、分类 （一）按病因分类
遗传性椭圆形红细胞增多症 阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）
(二)按溶血发生部位分 （RBC破坏场所）
血管内溶血(10%)： RBC在血管内破坏
血管外溶血(90%)：RBC在单核-吞噬细胞系统吞噬或破坏
三、相关疾病的实验室检查 肯定溶血的依据 确定主要溶血部位 寻找溶血原因
1. 血浆游离Hb测定 血管内溶血时，血浆游离血红蛋白（FHb）浓度增高。血红蛋白中亚铁血红素有类似过氧化氢酶的作用，过氧化氢经过血红蛋白中亚铁血红素催化，产生氧，氧化TBHBA（2.4.6-三溴间羟基苯甲酸）与4-氨基安替比林生成红色醌亚胺色素，吸收峰为505nm。根据显色深度，可测出血浆游离血红蛋白的含量。 正常值：<50mg/L 意义:血管内溶血时明显增加（60~650mg/L）
2.抗人球蛋白分型试验（Coombs’test） □ 诊断自身免疫性溶血性贫血的重要依据 检查RBC表面有无不完全抗体 □ 诊断自身免疫性溶血性贫血的重要依据 检查RBC表面有无不完全抗体 □ 受检者RBC悬液（2-5%）+等量抗人球蛋 白试剂。低速离心后观察凝集否。
凝胶柱式coombs试验
3.RBC渗透脆性试验 完全溶血：0.28%-0.32% 脆性增加：遗传型球形红细胞增多症 □ 检测红细胞膜对不同浓度低渗盐溶液的抵抗能力. □ 检测红细胞膜对不同浓度低渗盐溶液的抵抗能力. □ 正常值： 开始溶血：0.48%-0.52% 完全溶血：0.28%-0.32% □ 意义： 脆性增加：遗传型球形红细胞增多症 脆性减低：缺铁性贫血或地中海贫血
NaCl溶液，浓度梯度 配制0.60至0.24，10管 可上下扩展，12管 红细胞开始溶血 红细胞完全溶血
4.红细胞葡萄糖– 6 –磷酸脱氢酶（G–6–PD 酶） 最常见的遗传性红细胞酶缺陷性疾病 发病率：非洲和地中海区域10%，在中国主要见于南方，北方少见 红细胞的氧化性损伤所致 药物、 缺氧、 感染、 发热、 酸中毒或食蚕豆.
G6PD基因定位于Xq28（长臂2区8），伴不完全显性遗传 男性（XY）缺陷者：血中所有RBC都缺陷 女性（XX）缺陷者： 杂合子—50%RBC缺陷，50%正常 纯合子—100%RBC缺陷
G-6PD的实验室检查： G6PD催化G6P转化为6PG时，有NADPH生成，因此NADPH的量反映了G6PD活性。NADPH产生后，在PMS递氢的促进下，将NADPH的H传递给氧化型NBT（黄色），使之转变为还原型NBT（蓝色）。蓝色的深浅与NADPH生成量相一致，用分光光度计650nm比色（S1）。 6PGD也有将NADP→NADPH的作用，目前国内尚没有6PGD缺乏个体报道，所以同法测定6PG生成的NADPH的量（S2），通过S1/S2判断NADPH生成的相对含量
G-6-PD 6-PG G-6-PD缺乏 G-6-PD 6-PG 正常
5.酸溶血试验（ Ham’s 试验）及糖水试验 Ham’s试验（酸化血清溶血试验）：PNH异常红细胞在酸化(pH 6.4~6.5)的正常血清中孵育一定时间后，易于激活补体被溶破。特异性好，敏感性差。 蔗糖溶血试验：PNH异常细胞容易在等渗低离子强度的情况下遭破坏。敏感性高，特异性差。
酸溶血及糖水试验（Ham`s test）
6. 内因子抗体 ◆ 概念：是针对内因子的一种自身抗体，属于IgG型可存在于患者血清，胃液与唾液中。 ◆ 方法：竞争结合免疫法 ◆ 方法：竞争结合免疫法 ◆ 仪器： BackMan Access Ⅱ ◆ 意义：内因子抗体阳性，可引起胃黏膜萎缩， 抑制内因子的活性，从而使维生素B12浓度下降，最终导致恶性贫血及神经系统症状
7.促红细胞生成素（EPO）的检测 概念：是由肾小管间质细胞分泌的,作用于骨髓造血细胞,促进红系祖细胞增生 ,分化最终成熟的糖蛋白激素.对机体供氧状况发挥重要的调控作用 方法：双抗体夹心法 仪器：BackMan Access Ⅱ
意义： EPO下降常见于: 肾衰\晚期肾疾\早期贫血症\甲状腺功能减退贫血症\真性红细胞增多症 EPO升高可见于: ACD(慢性感染\自身免疫疾病贫血\类风湿性关节炎\AIDS\恶性肿瘤) .继发性红细胞增多症.
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