项目四 培养基配制 没涉及的问题，可参考GB 4789.28-2013

培养基：用人工方法，将多种物质按照各类微生物生长繁殖需要而配制成的混合营养料。 蜡样芽胞杆菌显色培养基，用于蜡样芽孢杆菌的显色培养，蜡样芽孢杆菌显蓝绿色，http://www.longrunbio.com/cp/wsw/peiyangji/203.html

根据营养成分划分，培养基可以分为天然培养基、合成培养基、 半合成培养基。 1，实际是培养蘑菇的 2，蜡样芽胞杆菌显色培养基，用于蜡样芽孢杆菌的显色培养，蜡样芽孢杆菌显蓝绿色，http://www.longrunbio.com/cp/wsw/peiyangji/203.html 天然培养基 合成培养基 半合成培养基

培养基的种类（根据营养成分划分） 名称 天然培养基 合成培养基 半合成培养基 成分 天然有机物 化学试剂 用途 异养微生物培养大规模培养 实验室研究 菌种选育 工业生产 优点 配制方便 营养全面丰富 价格低廉 成分精确 重复性强 部分成分精确 应用广泛 缺点 成分复杂 产品不稳定 配制复杂 生长慢，成本高

根据物理状态划分，培养基可以分为液体培养基、固体培养基、 半固体培养基。 2，蜡样芽胞杆菌显色培养基，用于蜡样芽孢杆菌的显色培养，蜡样芽孢杆菌显蓝绿色，http://www.longrunbio.com/cp/wsw/peiyangji/203.html 3，细菌动力试验http://www.goepe.com/apollo/offer-bjznta88-3242704.html 液体培养基 固体培养基 半固体培养基

实验室中观察、分离、鉴定、计数、保藏微生物 培养基的种类（根据物理状态划分） 名称 液体培养基 固体培养基 半固体培养基 状态 液态 固态 半固体 琼脂含量 1.5%~2.0% 0.5%~0.8% 用途 工业化生产 生长特征观察 应用研究 实验室中观察、分离、鉴定、计数、保藏微生物 微生物动力观察 保藏菌种

培养基的种类（根据用途划分） 基础培养基：在一定条件下含有某一类微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基。 如营养琼脂 选择培养基：杀死或抑制不需要的菌种生长。 在营养琼脂中加入青霉素，就是选择培养基了。

培养基的种类（根据用途划分） 增殖培养基：加入某些成分，使需要的菌种生长快速。 鉴别培养基：微生物经培养后出现某种明显特征。 如大肠杆菌大肠菌群用显色培养基（右下） 如EMB培养基 http://www.seikonet.cn/page.php?act=products&id=105&idd=512，大肠杆菌：蓝色（蓝～蓝紫）的菌落，大肠菌群：赤色（粉红～红紫）的菌落

培养基的成分 水 营养物质 蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麦芽汁、肉浸汁、糖类、血液、血清、无机盐、维生素等 凝固剂 琼脂、明胶等 其他成分 抑制剂、指示剂等

培养基配制步骤 准备 称量 溶解 调节pH 分装 培养基配制基本步骤如图，但根据实际作调整。 灭菌 LAB METHODS IN MICROBIOLOGY，http://wcis.mdc.edu/egines/BSC2943L_THE%20BIOSCIENCE%20INTERNSHIP/MICROBIOLOGY%20TECHNIQUES/ASEPTIC%20TECH_SIMPLE%20STAIN.pdf 培养基配制基本步骤如图，但根据实际作调整。 灭菌

1. 配置前的准备 了解培养基要求，根据配方进行计算，清洗玻璃器皿，准备试剂药品。 LAB METHODS IN MICROBIOLOGY，http://wcis.mdc.edu/egines/BSC2943L_THE%20BIOSCIENCE%20INTERNSHIP/MICROBIOLOGY%20TECHNIQUES/ASEPTIC%20TECH_SIMPLE%20STAIN.pdf

2. 称量 根据配方，称取所需药品。 注意少量、微量物质的称量方法。 LAB METHODS IN MICROBIOLOGY，http://wcis.mdc.edu/egines/BSC2943L_THE%20BIOSCIENCE%20INTERNSHIP/MICROBIOLOGY%20TECHNIQUES/ASEPTIC%20TECH_SIMPLE%20STAIN.pdf

在容器中加入2/3的水，（加热）溶解药品，加水至量。 3. 溶解 在容器中加入2/3的水，（加热）溶解药品，加水至量。 顺序：先加缓冲化合物，再加大量元素，再加微量元素。一般无机物应该先少量水溶解再加进去。不能把所有的药品称好后一起加进去溶解！ LAB METHODS IN MICROBIOLOGY，http://wcis.mdc.edu/egines/BSC2943L_THE%20BIOSCIENCE%20INTERNSHIP/MICROBIOLOGY%20TECHNIQUES/ASEPTIC%20TECH_SIMPLE%20STAIN.pdf

4. 调节pH 使用pH试纸/pH计测定其pH，根据需要用盐酸或者氢氧化钠调节，直至达到所需值。 LAB METHODS IN MICROBIOLOGY，http://wcis.mdc.edu/egines/BSC2943L_THE%20BIOSCIENCE%20INTERNSHIP/MICROBIOLOGY%20TECHNIQUES/ASEPTIC%20TECH_SIMPLE%20STAIN.pdf

根据实际需要，将培养分装至锥形瓶、试管等容器。 5. 分装 根据实际需要，将培养分装至锥形瓶、试管等容器。 液体分装量为试管高度的1/4左右 固体分装量为试管高度的1/5左右 半固体分装量为试管高度的1/3左右 分装三角瓶以不超过容积的1/2为宜 LAB METHODS IN MICROBIOLOGY，http://wcis.mdc.edu/egines/BSC2943L_THE%20BIOSCIENCE%20INTERNSHIP/MICROBIOLOGY%20TECHNIQUES/ASEPTIC%20TECH_SIMPLE%20STAIN.pdf

6. 灭菌 根据培养基的要求，进行灭菌。 不同培养的的灭菌可能有所不同，需要注意。如成分中含有乳糖，则可能灭菌温度在115℃。 LAB METHODS IN MICROBIOLOGY，http://wcis.mdc.edu/egines/BSC2943L_THE%20BIOSCIENCE%20INTERNSHIP/MICROBIOLOGY%20TECHNIQUES/ASEPTIC%20TECH_SIMPLE%20STAIN.pdf

固体培养基配制步骤？ 准备 称量 溶解 调节pH 分装 固体培养基需要加入琼脂作为凝固剂，可在其他试剂溶解后加入再煮沸溶解，再进行余下步骤。 LAB METHODS IN MICROBIOLOGY，http://wcis.mdc.edu/egines/BSC2943L_THE%20BIOSCIENCE%20INTERNSHIP/MICROBIOLOGY%20TECHNIQUES/ASEPTIC%20TECH_SIMPLE%20STAIN.pdf 固体培养基需要加入琼脂作为凝固剂，可在其他试剂溶解后加入再煮沸溶解，再进行余下步骤。 灭菌

斜面制作 培养基在灭菌后立即摆放待凝固。 斜面长度不得超过试管长度的1/2，以形成2/3底层、1/3斜面为宜。 下图，三糖铁，http://www.uaz.edu.mx/histo/pathology/ed/ch_9b/path/triple.htm

无菌检查 培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。 可以预先准备一管培养基，灭菌后用这管培养基进行无菌试验。