注意事项： 1、穿白大褂，戴手套,不能带食物及水进入 实验室； 2、遵守实验室操作规则和纪律； 3、注意实验室安全； 1、穿白大褂，戴手套,不能带食物及水进入 实验室； 2、遵守实验室操作规则和纪律； 3、注意实验室安全； 4、班长负责安排分组和值日； 5、实验完成收拾台面，保持整洁；

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实验动物的一般操作技术II （兔子、豚鼠） 预防医学系 李霄 551921340@qq.com

一 实验目的 二 实验内容 三 实验报告与讨论

一、实验目的 了解动物实验在毒理学和预防医学中作用和地位 3R原则(refinement, reduction, replacement) 掌握兔、豚鼠实验的基本操作技术（重点） 在理论课上大家已经学习了毒理的一些基本概念。那么什么叫毒理学？（毒理学是研究外源化学物对于机体特别是人体的有害作用及其机制的学科）。随着社会的发展，人们在日常生活中接触到越来越多的外源物质，例如：食品、保健品、化妆品、消毒/洗涤产品、药物，一般来说这些都必须首先进行相关项目的测试，在获得安全、可靠的资料、数据后才能投产和投放市场。而这些可靠的资料和数据主要是通过对动物的实验观察和分析而获得的。因此动物实验是毒理学研究中的重要手段之一。虽然现在的替代实验研究技术越来越成熟（3R原则，那些体外替代实验方法已被承认和应用？），但是还需要动物实验的资料作为验证。

二、实验内容 动物处死和尸体处理 5 实验动物的标记和编号 2 实验动物的染毒方式 3 生物样本的采集 4 实验动物的选取和抓取 1

1.1 动物的选择 一般原则 对毒物代谢及毒效应表现尽可能与人类相似 繁殖生育力较强，保证供应 易于饲养和实验操作 经济易获得 生理状况 1.1 动物的选择 一般原则 对毒物代谢及毒效应表现尽可能与人类相似 繁殖生育力较强，保证供应 易于饲养和实验操作 经济易获得 生理状况 看外观：体形丰满、被毛浓密有光泽紧贴体表、眼睛明亮，反应行动灵活 有无明显疾病症状 年龄、体重

1.1 动物的选择 根据实验目的选择不同实验动物： 不同性别 不同年龄

1.2 动物的抓取 a.兔的抓取 正确地抓取和固定动物是为了在不损害动物健康，不影响观察指标，防止被动物咬伤、抓伤的前提下，确保动物实验顺利进行 从笼内提兔时，轻轻打开笼门，将手伸入笼内，从头前阻拦它跑动，将兔耳放入右掌心内，右手抓兔颈部的皮毛提起，左手托住臀部或腹部，让体重的大部分集中在左手上。防止被蹬。 抓双耳？ 常用兔耳采血、静脉注射，所以家兔的两耳尽量保持不受损伤

常见的错误抓法： 损伤双肾、皮毛出血、损伤双耳 损伤双肾 皮下出血 损伤双耳

b.豚鼠的抓取： 豚鼠胆小易惊，抓取时要稳、快、准，先用手掌迅速扣住豚鼠，抓住其肩胛上方，将手张开，用手指环握住颈部，另一只手托住臀部即可。 一般不要抓腰腹部位，否则易造成肝破裂而引起死亡

1.3 性别的鉴定 辨别要点：生殖器的形态、尿道开口与肛门的距离。 a.豚鼠：主要是通过生殖器形态来判断 ♂在圆孔中露出性器官突起； 1.3 性别的鉴定 辨别要点：生殖器的形态、尿道开口与肛门的距离。 a.豚鼠：主要是通过生殖器形态来判断 ♂在圆孔中露出性器官突起； ♀则出现三角形隙，成年鼠有两个乳头。

幼兔：的鉴别主要以尿道口与肛门之间的距离来判断，雌性＜雄性。 3月龄以上成年兔：形态判读 b.兔： 幼兔：的鉴别主要以尿道口与肛门之间的距离来判断，雌性＜雄性。 3月龄以上成年兔：形态判读 ♂圆孔中露出圆椎形向下弯曲的阴茎，并且两侧有裸露的睾丸； ♀：为一条朝向尾巴的长缝呈椭圆形间隙，有乳头8-12个。 性别鉴定的意义是什么？ ♂：圆孔中露出圆椎形突起，并且两侧有裸露的睾丸。 ♀：为一条朝向尾巴的长缝呈椭圆形间隙

2.1 实验动物的随机分组 同组、同性别动物体重变异系数小于10%，不同组间同性别动物体重变异系数小于5%； 2.1 实验动物的随机分组 目的：各组非处理因素齐同，防止非处理因素干扰处理因素的效应。 同组、同性别动物体重变异系数小于10%，不同组间同性别动物体重变异系数小于5%； 按实验设计要求进行分组。常见的实验设计方案是完全随机分组设计和随机区组设计。随机方法有：随机数字表和随机分组表。 如对性别无特殊要求，宜选用雌雄动物各半分组

2.2 实验动物的标记 染色法：大小鼠 剪缺口法：小型猪 挂牌法：犬、猴、兔等大中动物 烙印法：犬、兔 2.2 实验动物的标记 编号的方法很多，根据动物的种类、数量和观察时间长短等因素来选择合适的标记方法。 染色法：大小鼠 剪缺口法：小型猪 挂牌法：犬、猴、兔等大中动物 烙印法：犬、兔

常用的涂染化学药品有： 红色：0.5％中性红或品红溶液 黄色：3％～5％苦味酸溶液

3.1 动物的染毒 染毒方法多种多样，根据实验目的、实验动物种类，最关键是要参照人接触受试物途径，例如： 经口药品、保健品、食品 经口染毒 3.1 动物的染毒 染毒方法多种多样，根据实验目的、实验动物种类，最关键是要参照人接触受试物途径，例如： 经口药品、保健品、食品 经口染毒 静脉药品 静脉、腹腔染毒 农药、化妆品 经皮染毒 易挥发物质 呼吸道染毒

（1）经口染毒： 喂饲 优点：符合人类接触受试物的实际情况； 缺点：适口性差的受试物，实验动物拒食；易挥发和水解的受试物不适用。 灌胃：适用于小鼠、大鼠、兔等动物。 优点：剂量准确。 缺点：工作量大，并有伤及食管或误入气管的可能。 吞咽胶囊：适用于大动物，如犬等。此法剂量准确，适用于易挥发、易水解和有异味的受试物。

操作：兔子灌胃 a.将兔子固定，锁定固定盒; b.一人用开口器开口，将舌头压在下面（注意胃管与开口器是否匹配）; c.另外一人将胃管一端放入有水的烧杯里，另一端经小孔穿入，沿咽后壁插入食管，遇到阻力即可停止，在此过程中观察烧杯中有无气泡产生，无则可进行灌胃，否则重新插胃管; d.最大灌胃容量10.0ml/Kg。 注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。

（2）经呼吸道染毒 静式吸入染毒：染毒柜 动式吸入染毒：染毒柜、通风系统和配气系统 气管内注入：建立急性中毒模型及尘肺研究

经皮染毒的目的有两种：经皮染毒毒性实验；皮肤刺激和致敏实验。 （3）经皮染毒 经皮染毒的目的有两种：经皮染毒毒性实验；皮肤刺激和致敏实验。 首先备皮，最常用脱毛法： （1）固定后，先用剪刀将动物脊柱两侧背部的长毛剪短，尽量贴着皮肤剪，不能将毛发提起剪，然后用推剪尽量将毛剪短，左右各一块（不超过体表面积10%），一块做测试，另一块做对照。逆着毛的方向剪，剪的毛放在装有水的烧杯里，不要损伤皮肤。

（2）取脱毛剂在剪毛区均匀地涂一薄层，用刮板逆被毛的方向涂匀，让脱毛剂与被毛充分接触，隔5-8分钟，有被毛开始脱落后用纱布沾水轻轻擦洗，并且要清洗干净，因脱毛剂有刺激性。 （3）放置24小时后，观察动物皮肤是否有损伤。

a.寻找静脉：兔耳中央为动脉，耳缘为静脉； （4）注射染毒  静脉注射： 操作：兔耳缘静脉注射 a.寻找静脉：兔耳中央为动脉，耳缘为静脉； b.两人配合操作，一人按住耳根阻止静脉回流使耳缘静脉充盈； c.另一人进行静脉注射，绷紧皮肤，消毒后头皮针先充满生理盐水，持头皮针静脉远端进针，回抽有血，固定针头，缓慢推入生理盐水； d.拔针，棉签压迫数分钟止血。

皮下注射：左手拇指和食指提起皮肤，将连有针头的注射器刺入皮下。注射部位一般在大腿内、外侧，背部、耳根部、腹部。 皮内注射： 肌内注射 腹腔注射：（以大、小鼠为例）

3.2 动物血样采集 1.兔耳缘静脉采血法：（用头皮针，真空采血管）方法同耳缘静脉注射（仅限取少量血，5ml） 3.2 动物血样采集 1.兔耳缘静脉采血法：（用头皮针，真空采血管）方法同耳缘静脉注射（仅限取少量血，5ml） 2.兔耳中央动脉取血：由于兔耳中央动脉容易痉挛，故抽血前必须让兔耳充分充血，采血动作要迅速，采血后应立即压迫止血，此法一次可采血10～15ml。

4 动物处死 1. 麻醉致死法：采用化学物质如氯仿、乙醚、CO2。 2. 麻醉后急性放血法：麻醉后，剪断股动脉，血液大量流出，动物迅速死亡。 4 动物处死 1. 麻醉致死法：采用化学物质如氯仿、乙醚、CO2。 2. 麻醉后急性放血法：麻醉后，剪断股动脉，血液大量流出，动物迅速死亡。 3. 空气栓塞法：适用兔等大动物。用注射器经耳静脉注入10ml空气，几分钟之内兔子死亡。 4. 化学药物致死法： 适用兔、狗、猴等大动物，常用10%KCl或10%甲醛溶液进行静脉注射。 5. 脊椎脱臼法：适用大小鼠和豚鼠，一手按住头颈部，另一手朝上45度角用力猛拉尾部或后肢。

三、实验报告与讨论 实验报告：某公司现研发出一种新型农药要做产品登记，请根据今天所学的内容设计一个简要的一般毒性试验方案（主要是操作思路和关键手法） 1、实验目的 2、实验过程：包括（1）动物的选择；（2）染毒方式；（3）关键的操作步骤 3、实验心得体会：独立思考 4、实验报告周二交至公卫楼923室

注意事项： 1. 注意操作规范，戴手套，不能玩弄动物，防止被动物咬伤、抓伤，受伤后清水冲洗碘伏消毒。 2 注意事项： 1. 注意操作规范，戴手套，不能玩弄动物，防止被动物咬伤、抓伤，受伤后清水冲洗碘伏消毒。 2. 针一定要套上针套，拿针时不能对着其他同学，防止被注射器等锐器刺伤。 3. 垃圾分类：处死后的动物一类，针头（带针套）一类，注射器一类，其他一类 。 4.课件不能用U盘拷，必须用邮箱下载，否则U盘没收。

实验动物和器材 动物：兔子、豚鼠 器材：（1）静脉输液针、采血针，2ml和10ml注 射针 （2）酒精、生理盐水、棉签 （3）扩口器、灌胃管

实践内容

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