人类伟大工程 ——单克隆抗体技术
单克隆抗体
1 2 3 4 抗原决定簇 单克隆抗体 1 2 3 4 多克隆抗体 抗血清 7 7
单克隆抗体（Mcab） 针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体。
如何获得单克隆抗体？
B细胞 癌细胞
生物法 物理法 化学法 病毒 电刺激 化学融合剂
PEG诱导细胞融合 B 瘤 矿物油 免 疫 骨髓瘤 脾
PEG诱导细胞融合 B 瘤 矿物油 免 疫 骨髓瘤 脾 杂交瘤细胞
选择性培养基筛选 14
HAT筛选杂交瘤细胞 脾脏细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 PEG B m m B B-m 15 B-m m-m B-B B-m B-B B-m
H DNA A T HAT培养基筛选 谷氨酰胺 or 单磷酸尿苷酸 H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶 外源性途径(S) DNA 内源性途径(D) 谷氨酰胺 or 单磷酸尿苷酸 A 外源性途径(S) B淋巴细胞： D+， S+ 存活 骨髓瘤细胞： D+， S- 死亡
m B B-B m-m B-m m B 不能长期存活 不能存活 不能存活 不能长期存活 筛选出
m B B-m B-m B-m B-m 筛选出 筛选出 筛选出 筛选出
有限稀释克隆细胞 19
稀释 ELISA筛选抗体 脾脏细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 PEG B m m B 20 B-m 20 B-m m-m B-B B-m B-m
酶联免疫吸附法(ELISA) 有色产物 酶标仪检测 底物 酶标记二抗 待检杂交瘤培养上清液 抗原
B-m 体外 体内 如何得到大量的单克隆抗体？ 收集、分离并纯化
思考题 阐述两步筛选的目的及原理。 两步筛选在顺序上是否可以颠倒？为什么？
①作为诊断试剂 疾病及病原鉴定
①作为诊断试剂 疾病及病原鉴定 ②疾病定位、分型及诊断 利用同位素标记单抗，在特定组织成像
①作为诊断试剂 疾病及病原鉴定 ②疾病定位、分型及诊断 利用同位素标记单抗，在特定组织成像 ③用于治疗疾病和运载药物 制成生物导弹，靶向给药
生物导弹 单克隆抗体 药物
①作为诊断试剂 ②疾病定位、分型及诊断 ③用于治疗疾病和运载药物 ④用于微量成分测定、分离和纯化 疾病及病原鉴定 利用同位素标记单抗，在特定组织成像 ③用于治疗疾病和运载药物 制成生物导弹，靶向给药 ④用于微量成分测定、分离和纯化 酶类、激素、维生素、药物等
洗脱液
终