实验三十七 胰岛素、肾上腺素 对血糖浓度的影响(p102)
血糖及正常血糖水平: 血糖:指血液中的葡萄糖。 血糖水平即血糖浓度。 正常血糖浓度: 空腹血糖3.89~6.11mmol/L (葡萄糖氧化酶法)
血糖水平恒定的生理意义 保证重要组织器官的能量供应,特别是某些依赖葡萄糖供能的组织器官。 脑组织不能利用脂酸,正常情况下主要依赖葡萄糖供能; 红细胞没有线粒体,完全通过糖酵解获能; 骨髓及神经组织代谢活跃,经常利用葡萄糖供能。
血糖 一、血糖的来源、去路 食物糖 CO2 + H2O 肝(肌)糖原 肝糖原 其它糖 非糖物质 脂肪、氨基酸 氧化分解 消化,吸收 糖原合成 磷酸戊糖途径等 其它糖 非糖物质 糖异生 脂类、氨基酸合成代谢 脂肪、氨基酸
二、血糖水平的调节 主要依靠激素的调节 降低血糖:胰岛素(insulin) 主要调节激素 升高血糖:胰高血糖素(glucagon)、糖皮质激素、肾上腺素
[原理] 1. 分别注射胰岛素和肾上腺素,通过测定血糖含量,观察注射前后血糖浓度变化,从而了解激素对血糖浓度的影响。 2. 葡萄糖氧化酶法(P100): 葡萄糖氧化酶 葡萄糖 + O2 + H2O 葡萄糖酸 + H2O2 过氧化物酶 H2O2 +苯酚+ 4-氨基安替比林 红色化合物 + H2O
[操作] 1. 动物准备 选取家兔两只,实验前预先饥饿 16h,称体重。 2. 注射激素前取血 从耳缘静脉取血:小烧杯盛水,棉签沾水后擦拭耳缘静脉并弹敲,使血管充盈,用注射器取1-2ml血,缓慢放至5ml塑料离心管中,37 ℃水浴10min,3500rpm离心3min。 注:取血完毕后,用干棉签压迫血管止血。
[操作] 3. 注射激素 一只兔子注射胰岛素:皮下注射,剂量为0.75U/kg体重。另一只兔子注射肾上腺素:皮下注射,剂量为0.2mg/kg体重。记录注射时间。 4. 注射激素后取血 方法同前。 取血时间:肾上腺素、胰岛素均在注射后30min。
[操作] 5. 测定血糖 分别测定各血清的葡萄糖含量,具体操作见实验三十六(P100)。 取试管3支,编号,按下表操作 (用量:ml) 试 剂 测定管 标准管 空白管 待测血清 0.02 — 葡萄糖标准液(5.55mmol/L) 酶酚混合液 3.0 A505 将各管分别混合,置37℃水浴中保温20min,取出冷却至室温后以505nm波长测定吸光度值。
[计算] 测定管吸光度 葡萄糖含量= ×5.55 (mmol/L) 标准管吸光度 ΔBS 血糖改变百分率= ×100% (%) 注射前BS 葡萄糖含量= ×5.55 (mmol/L) 测定管吸光度 标准管吸光度 血糖改变百分率= ×100% (%) ΔBS 注射前BS △BS=注射后BS-注射前BS; “+”值表示BS升高;“-”值表示BS降低。
表4-3 胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的实验结果 表4-3 胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的实验结果 实验兔子 1号兔注射胰岛素 2号兔注射肾上腺素 血糖值(mmol/L) 注射前血糖 注射30min后血糖 注射前后差值 血糖改变百分率(%)
[要求] 分成两大组,一组注射胰岛素,另一组注射肾上腺素,做好标记,各组管好自己的兔子。 需要测定注射激素前、后的血糖含量,要用同一台分光光度计测定,1份/人。 根据兔子体重计算出注射激素量。 安全第一,抓兔子、注射器取血操作一定要注意安全,戴上帆布手套。防止注射器针头堵塞。不允许戏弄动物,要帮兔子止血。 空白管共用,每台分光光度计做一份空白。
实验三十七 尿糖的定性检测(p106)
尿糖:主要指尿液中的葡萄糖。 健康人排出量 :微量,0.1~0.3g/24h 出现糖尿的3个因素: 血糖浓度 肾小管对糖的重吸收能力 肾血流量 血糖浓度的高低决定着是否形成糖尿,血糖浓度很高,尤其是糖尿病患者,肯定会出现糖尿,所以对糖尿病患者,平时可以自己检测尿糖来了解病情的变化,接下来的问题是怎么测定尿糖?
[方法] 班氏试剂法(铜还原法) [原理] 葡萄糖属还原糖 G+Cu2+ 葡萄糖酸+Cu2O↓(砖红色) OH- △
[操作] 1. 大试管中加1ml班氏试剂,酒精灯加热至沸,应无沉淀出现 2. 加入待测尿液3~4滴,加热至沸,观察其变化。自然冷却后观察结果。 3. 结果判断指标 (-)不变色(尿中无糖或极微量) (微量)显绿色,但无沉淀(含糖约1g/L) (+)有少量绿色沉淀(含糖约1~5g/L) (+ +)煮沸1min内即出现少量黄绿色沉殿(含糖5~14g/L) (+ + +)煮沸10~15s即出现土黄色沉淀(含糖15~20g/L) (+ + + +)煮沸立即出现黄色并逐步转为砖红色沉淀(含糖>20g/L)。
[要求] 每人做1份。 煮沸后计时。 使用酒精灯时要避免被烫伤或烧伤。