临床免疫、分子生物学检验 室内质量控制 湖北省临床检验中心 黄 鹏

一、分析前质量控制 1、培训实验室工作人员； 2、建立临床实验室质量管理体系； 3、实验室规范设置； 4、试剂盒的选择、评价、使用与保存； 5、仪器的校准、评价、维护和保养； 6、标本采集、运输、核收、登记、处置与保存； 7、质控品、校准品的选择、评价和使用。

（一）试剂盒的选择、评价、使用与保存 乙肝等试剂盒： 生产批准文号 生产许可证 经营许可证 药品经营许可证 批批检定合格 贴有防伪标签 未作规定的试剂，应从如下方面进行评价： 灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性等。

试剂的正确使用与保存 按说明书操作，不能想当然。 详实记载----批号、有效期、规格、使用情况及更换试剂记录等。 索要试剂商相关证件并有效保存，特别是批批检定报告书。 实验用试剂 冰箱内？ 使用时？ 多余部分如何处置？ ……

后果是：温育时间不够，对一些弱阳性标本的检测出现假阴性，尤 其是冬天没有空调的环境里。 存在的问题 （1）将试剂盒从冰箱中拿出即用 后果是：温育时间不够，对一些弱阳性标本的检测出现假阴性，尤 其是冬天没有空调的环境里。 要求：试剂盒从冰箱中拿出室温放置20min以上，与室温平衡，然后 再进行测定。 目的：在后面的温育反应中，能使反应孔内的温度较快地达到所要 求的高度，以满足要求。 （2）直接放在水浴箱内的试管架或者托盘上温育。？？？

（3）商品化ELISA试剂盒中,洗板液由所提供的浓缩液稀 释配置而成，故所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。 不同试剂盒洗板液相互混用 ？？？ （4）OPD底物溶液必须在反应显色前临时配制。 加底物后应按规定温育30分钟，阳性对照应大于0.6或 0.8以上。

2、目前临床免疫、分子生物学检验所要控制的仪器 （1）移液器 利用称重法校准：吸取刻度指示量的水，万分之一天平 称重后计算吸量是否正确，一般应在±10%以内。 （2）水浴箱、温箱、冰箱 使用标准温度计，经常检查水浴箱温度计所示的温度与 水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差 。

（3）洗板机 设置洗板后的残留液一般不超过2ul；人工扣板时，垫纸不 湿；定期检查管孔是否堵塞。 （4）酶标仪 经常维护其光学部分，防止滤光片霉变；定期检查校准， 使其保持良好的工作性能。

基因扩增检验相关仪器控制标准 仪器设备 质控方法 频 度 失 控 标 准 全自动扩增仪 仪器校验实验 当仪器移动时 实验失败 热电偶监测温度 频 度 失 控 标 准 全自动扩增仪 仪器校验实验 当仪器移动时 实验失败 热电偶监测温度 每月一次 如靶温度或温度差异超出允许范围 扩增功能检测 每4个月一次 程序打印 每次测定时 待测孔未出现扩增，检测温度打印程序不对 加样器 校准 每年2次 不符合要求 恒温金属浴 温度检测 每年4次 高速冷冻离心机

3、临床标本的收集与保存 免疫试验标本十分广泛， 体 液：如全血或骨髓、血清、血浆、各种积液； 分泌物：如唾液、脑脊液； 排泄物：粪便、尿液； 用于测定其中的抗原或抗体成分，一般使用血清。 临床上使用血清（浆）标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗 原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。 防腐剂、抗凝剂及相关试剂材料：常用有EDTA、枸橼酸盐及肝素。 要求：对检测过程不应造成干扰。 如：全血、骨髓标本必须抗凝，EDTA和枸橼酸盐是首选。 肝素是Taq酶的强抑制剂,且在其后的核酸提取步骤中很难去除。

患者标本中有可能会含有干扰酶免疫测定导致假阳性和假阴性 可能影响测定结果的标本因素 患者标本中有可能会含有干扰酶免疫测定导致假阳性和假阴性 结果的干扰因素，其分为两类： 1、内源性干扰因素：类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免 疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体、因使用鼠抗体治疗或诱导的 抗鼠Ig抗体、交叉反应等。

2、外源性干扰因素：如标本溶血、细菌污染、储存时间过长、标本凝固不全、冷冻保存标本反复冻融等。 （1）尽量避免溶血 红细胞破裂释放出具有过氧化物酶活性物质，增加非特异性显色而成假阳性。 （2）血清标本宜在新鲜时检测 如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性。 （3）尽量不用抗凝血，尤其不能用肝素抗凝血。 抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰也可产生假阳性。 在PCR检测中：肝素是Taq酶的强抑制剂,且在其后的核酸提取步骤中很难去除，故不用。 （4）标本在冰箱中保存不宜过长 易导致血清IgG聚合，使间接法试剂本底加深。 （5）尽量避免污染

基因扩增检验标本采集中的防污染 1、防止混入操作者的头发、表皮细胞、痰液等。 2、玻璃器皿常含有不易失活的RNAase ，使用前必须经高压灭菌。 方法：250 ℃烘烤4小时以上或180 ℃烘烤8小时以上可使之永久性灭活。 0.1%的焦碳酸二乙酯（DEPC：是RNAase的强烈抑制剂)的水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯、试管和其他用品。

标本管理的要求 （1）建立唯一编号识别系统。 （2）接收时应有详细的状态记录。 （3）保证标本在实验室检测全过程中不发生非正常的变质和损坏。 （4）在特定的环境条件下储存或处置的标本，应有维持、监控和记录， 以保护其状态及完整性。

例如：临床基因扩增检验标本的处理 体液标本：-70℃以下； DNA扩增分析样本： 10 mmol/L Tris（三羟甲基氨基甲烷） ；1 mmol/L EDTA （乙二胺四乙酸）（pH7.5-8.0）；4℃保存； RNA扩增分析样本：于上述缓冲液中-80℃或液氮下保存； 核酸的乙醇沉淀物：-20℃下保存。 使用GITC （异硫氰酸胍盐）的标本：室温下稳定约7天。

最重要的一点： “实验室质量管理文件”的书写文件包含：质量手册、程序性文件、作业指导书和相关表格、报告等质量记录。 4、建立临床实验室质量管理体系 最重要的一点： “实验室质量管理文件”的书写文件包含：质量手册、程序性文件、作业指导书和相关表格、报告等质量记录。 程序性文件：包括管理性和技术性文件两种。 作业指导书：包括检测细则、标准操作程序(SOP)。 以文件形式存在，便于查阅，并确保得到实施。

（二）分析中质量控制 1、如何做好免疫类质控物定值的选择？ 2、质控品的正确使用； 3、ELISA、PCR检测方法的注意事项； 4、室内质控的实际操作步骤； 5、相关室内质控的计算及评价方法。

1、如何做好免疫类质控物定值的选择？ 质控物：高值、中值、低值及阴性值； 设置临界于cut-off(CO值)的低值弱阳性质控物是室内质控的关键； 低值弱阳性临界值质控物 是室内质控精密度观察的最敏感的窗口，是提示试验成功与否的最重 要标志； 不是判断阴阳性的标准。

注意事项与使用方法 6个月用量配备；血清保存在–20℃以下，保质期为1年以上，避免 反复冻融和重新分装质控血清样本。 使用时将血清在室温复融，待血清完全融化后平衡至室温并充分混 匀。复融后的血清如果当日未使用完且无污染，可保存在2–8℃，限一 周内用完。 按说明书严格操作，不使用超过保质期的质控品；与患者标本同样 条件下进行测定。 质控血清都经过灭活处理， 但仍应按照有潜在生物传染性样本对 待。 HBsAg、抗HCV、 抗HI V、 梅毒螺旋体抗体的质控血清加样时按待 测病人原始样本对待， 依照试剂盒说明书进行操作。

2、免疫测定用室内质控血清的调整 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、 抗HCV 抗HIV 梅毒螺旋体抗体 临床基因扩增检验 提供不同含量的质控物是为了实验室根据不同试剂的检测值选择合适的质控物，使质控物的检测值（S/CO值）在1.5～4之间。

HBsAg质控血清定值的调整 定值 （调整前） （调整后） 调整原因 0.2IU/ml 用于一些灵敏度较高的试剂 0.5IU/ml 0.5ng/ml 1IU/ml 1ng/ml 2IU/ml 2ng/ml 4IU/ml 5ng/ml 浓度较高 ≥1万ng/ml “钩状效应” HBsAg定值单位改变：2004年，WHO研制了第二代HBsAg标准物质，并将定值单位从ng/ml改为IU/ml。现1IU/ml≈0.5ng/ml

HBsAb室内质控品的选用 定值 适用试剂 10mIU/ml 30mIU/ml 定值未调整 实验室可自己选择任何一个浓度作室内质控

HBeAg质控血清 定值 适用试剂 1NCU/ml 进口的试剂 2NCU/ml 国产试剂 4NCU/ml 国产试剂 定值 适用试剂 1NCU/ml 进口的试剂 2NCU/ml 国产试剂 4NCU/ml 国产试剂 新的4NCU/ml≈原0.25 NCU/ml

HBeAb质控血清 定值 适用试剂 1NCU/ml 进口的试剂 2NCU/ml 进口的试剂 4NCU/ml 国产试剂

HBcAb质控血清 定值 适用试剂 1NCU/ml 进口的试剂 2NCU/ml 进口的试剂 4NCU/ml 国产试剂 定值 适用试剂 1NCU/ml 进口的试剂 2NCU/ml 进口的试剂 4NCU/ml 国产试剂 新的4NCU/ml≈原1 NCU/ml HBc IgM和HAV IgM质控血清定值均未调整

1、HBcAb室内质控血清和室间质量评价样本检测时是否需要1:30稀 常见问题解答 1、HBcAb室内质控血清和室间质量评价样本检测时是否需要1:30稀 释？ 原倍检测，原倍标准判断。 2、HBc IgM和HAV IgM质控室内质控血清和室间质量评价样本检测 时是否需要1:1000稀释？ 不需要，标本已1:1000稀释。 如试剂为检测原倍血清的，则不能使用该室内质控血清，也不能参 加本中心该项目的室间质量评价。

抗HCV质控血清定值的调整及选用 定值 （调整前） （调整后） 适用试剂 1NCU/ml 国产试剂盒（万泰、新创、科华、丽珠……）和DiaSorin的试剂 2NCU/ml Ortho ，Murex等试剂 4NCU/ml 雅培i2000和Axsym检测系统和配套试剂 现1NCU/ml≈0.5NCU/ml

国产试剂盒（万泰、新创、科华、丽珠……） 抗HIV质控血清定值的调整及选用 定值 （调整前） （调整后） 适用试剂 1NCU/ml 国产试剂盒（万泰、新创、科华、丽珠……） 2NCU/ml Bio-Rad等试剂 4NCU/ml 进口试剂及配套仪器 8NCU/ml 现1NCU/ml≈0.5NCU/ml 1NCU/ml的确定：参考国际单位定值方法，采用5种或以上试剂盒，结果63％的试剂盒（按泊松分布计算）检测结果为阳性的值为1NCU/ml。

梅毒螺旋体抗体定值的调整及选用 定值 （调整前） （调整后） 适用试剂 1NCU/ml （特异） 国产试剂盒 2NCU/ml 4NCU/ml 进口试剂及/或配套仪器 （非特异） RPR、TRUST 现1NCU/ml≈0.25NCU/ml

定值质控物不适合评价试剂盒整体性能是否合格,但可用 于试剂的批内、批间变异和测定下限的评价质检。如果需要 对试剂进行比较评价和全面质检请选用相应项目的临床考核 血清盘。

临床考核血清盘 项目 规格 支数/套 HBsAg 0.5ml/支 40 抗HCV 0.25ml/支 梅毒螺旋体抗体

3、 不同检测方法的注意事项  结果判读： 卫药发（1995）第32号及（1996）第25号文要求： 凡开展ELISA检测项目的单位，必须使用酶标仪判读结果，不准使 用目测法。 临床基因扩增检验技术： 《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理 办法》（卫办医政发〔2010〕194号） 《湖北省临床基因扩增检验实 验室评审标准。

 灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要  ELISA测定的“灰区” 是指ELISA测定时，吸光度处于Cut—off值周围的一定区域，其结果应 为“可疑”。需重复实验或换试剂重测以确定其阴、阳性，如仍落在灰区范 围内则报告±值。  灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要 灰区的设置有两种 （1）C.O×（1±CV），CV为该试剂的批内CV（一般在15%--20%间） 。如：HBsAg 1.05 ×（1±18%） （2）C.O±2s，s为实验室做室内质控OCV的s。如：HBsAg 1.05±2 × 0.189

4、室内质控的实际操作步骤 1）设定靶值和控制限 2）特殊情况的处理：如Crubbs氏法 3）更换试剂及质控品： 应在“旧”批号质控品使用结束前与“旧”批号质控品一起测定 ，设立新的靶值和控制限。 4）绘制质控图及记录质控结果：根据质控图的靶值和 控制限绘制Levey---Jennings控制图，将原始质控结果记录在质控 图表上，保留打印的原始质控记录。

5）质控规则的应用： 判断每一分析批是在控还是失控。 6）失控情况处理： 失控----填写失控报告单----交专业室主管（组长）---- 作出 是否发出检验报告的决定。

操作失误、试剂、校准物、质控品的失效，仪器维护不良以及采 7）失控原因分析 操作失误、试剂、校准物、质控品的失效，仪器维护不良以及采 用的质控规则、控制限范围、一次测定的质控标本数等。 失控信号出现：意味着与测定质控品相关的那批病人标本 报告可能作废。 8）查明失控原因：随机挑选5%或10%的患者标本进行重测 ，依既定标准判断先前测定结果是否可接受，对失控做出正确判断。

如何查找失控原因？ 1）立即重测同一质控品 查明是否为人为误差。重测结果是否在允许范围内（在控）。 2）新开一瓶质控品，重测失控项目 查明原质控血清是否过期或在室温放置时间是否过长而变质、或被 污染。 3）新开一批质控品，重测失控项目 查明前批质控血清是否有问题，检查有效期和储存环境，以查明问 题之所在。

4）进行仪器维护，重测失控项目 检查仪器状态，查明光源、比色杯、仪器等是否需要清 洗或更换。检查试剂是否需更换。 5）重新校准，重测失控项目 用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。 6）请专家帮助 如仍未得到在控结果，可能是仪器或试剂的原因，寻求 技术支持。

（三）统计质控方法 1、基线测定： 最佳条件下的变异（OCV）：均值（x）、s和变异系数 （OCV）。所有测定数据不管其是否超出3s，均应用于上述 统计计算。 常规条件下的变异（RCV）：均值（x）、s和变异系数 （RCV）。所有测定数据不管其是否超出3s，均应用于上述

当OCV＜ RCV＜ 2OCV时，RCV可接受，否则，就需要对 常规条件下的操作水平采取措施予以改进。 在进行基线测定时，临床基因扩增检验既可使用质控样 本扩增后的拷贝数/ml或IU/ml来进行统计计算，也可用其 对数值进行。

常用质控规则的符号及定义 12S 13S 22S R4S 31S 41S 7X 7T 8X 9X 10X 定 义 定 义 12S 一个质控测定值超出 x ±2 s控制限。 13S 一个质控测定值超出 x ±3s控制限。 22S 两个连续的质控测定值同时超出 x+2s或 x-2s控制限。 R4S 同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的差值超出4s控制限。 31S 三个连续的质控测定值同时超出 x+1s或 x-1s控制限。 41S 四个连续的质控测定值同时超出 x+1s或 x-1s控制限。 7X 七个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 7T 七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化。 8X 八个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 9X 九个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 10X 十个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。

2、Levey-Jennings质控图方法的基本特点 ①根据RCV计算中的平均值和SD确定质控限，一般以 x±2 s为告警限，x±3 s为失控限； ② x±2 s为失控限，假失控的概率太高，通常不能接 受；以x±3s为失控限，假失控的概率低，但误差检出能 力不强。

举例 Levey-Jennings质控图的使用及分析方法。 下表为一组HBV DNA室内质控血清（含量为2.0×104 IU/ML ）的测定数据，绘制的质控图如下图所示。

Levey-Jennings质控图 +3SD +2SD +1SD Χ -1SD -2SD -3SD 测定批（次） 　测定批（次） 0 1 2 3 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27

HBV DNA定量PCR测定室内质控数据 测 定 批 测 定 结 果 原始数据 （ IU/ML） 对数值 （ IU/ML ） 对数值 基线测定均值 2.3×104 标准差(s) 6.9×104 14 1.6×104 4.20 1 1.8×104 4.26 15 1.5×104 4.18 2 3.4×104 4.53 16 1.1×104 4.04 3 2.0×104 4.30 17 1.7×104 4.23 4 3.0×104 4.48 18 1.0×104 4.00 5 1.7×104 4.23 19 6 2.6×104 4.41 20 3.6×104 4.56 7 3.2×104 4.51 21 1.3×104 4.11 8 1.9×104 4.28 22 4.5×104 4.65 9 23 1.2×104 4.08 10 1.6×104 4.20 24 4.0×104 4.60 11 2.9×104 4.46 25 12 2.2×104 4.34 26 4.1×104 4.61 13 27 5.3×104 4.72

根据上表数据得到的Levey-Jennings质控图 ● 4.37×104+3SD ● ● 3.68×104+2SD ● ● ● ● 2.99×104+1SD ● ● ● ● 2.3×104 Χ ● ● ● ● ● ● ● ● 1.61×104-1SD ● ● ● ● ● ● ● 0.92×104-2SD ● ● 0.23×104-3SD 　测定批（次） 0 1 2 3 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 第1----13批，为正常的波动；第14----19批，可能存在准确性问题，有系统误差存在；第20----第27批，波动幅度过大，精密度不好，存在随机误差，第27批结果甚至超出了3s，处于失控状态。

3、累积和（CUSUM）质控方法 累积和（CUSUM）质控方法于1977年由Westgard等提出， 对系统误差有较好的测出能力。 质控规则是以均值（ x ）和标准差（s）为基础确定，常 用质控规则及其含义，如下表所示。

常用的累积和（CUSUM）质控规则 质控规则 起动累积和计算的阈值（k） 质控限（h） 1.0S 2.7S CS X±1.0S ±2.7S

具体质控步骤如下： ①先求测定均值（x）和标准差（s）； ②计算阈值（k）和质控限（h）； ③确定质控规则； ④绘制质控图； ⑤累积和计算。 ⑥判断是否失控，采取措施予以纠正。 下面以使用质控规则 举例说明。 1.0S 2.7S CS

根据在不同时间10次（批）测定HBV DNA （含量为3.0×104IU／ml）质控血清所得的均值及标准差为： X =2.5×104 S =0.5 × 104 ku =3.0×104 （ ku=x + 1.0s ） kl =2.0×104 （ Kl=x - 1.0s ） h =± 1.35 × 104 （ h= ± 2.7s ） 阈值（k）和质控限（h）；

　　　　　　　　　质控限h=±1.35×104 （h=± 2.7s） X+2.7s(hu) hu=3.85 ×104 （hu=x +h） X+1.0s(Ku) ku上限=3.0×104 （ku=x + 1.0s） X X =2.5×104 S =0.5 × 104 X-1.0s(Kl) kl下限=2.0×104 （Kl=x - 1.0s） X-2.7s(hl) hl=1.15 ×104 （hl=x - h） 　　　 累积和质控图

说明： di： 为第i批质控测定值与k值之差； CSi： 为第i批质控测定时的累积和； ku和kl： 分别为阈值上限和阈值下限，当质控物测定值超出k值时，即开始累积和计算。

HBV DNA定量PCR测定累积和（CUSUM）质控 测定批 测定值 *104 di Csi 结果解释 1 2.8 11 1.5 -0.5 -0.7 2 2.1 12 0.8 0.1 停止累积和计算 3 2.6 13 2.3 4 3.3 0.3 起始累积和计算 14 2.9 5 3.6 0.6 0.9 15 3.8 6 3.1 1.0 16 3.4 0.4 1.2 7 1.9 -1.1 -0.1 17 8 18 9 19 10 1.8 -0.2 20 失控 （X =2.5×104, s=0.5×104, ku上限=3.0×104, k1下限=2.0×104, 质控限h=±1.35×104)

4、即刻法质控的计算及评价方法 1）依据：美国CLIA’88关于《临床实验室（定量测 定）室内质控工作指南》。 2）适用于： 不是每天开展且标本量少的项目； 试剂盒有效期较短； 各级各类医院实验室，特别是基层卫生院。

3）方法：只需连续测定3次，即可对第三次检验结果进 行检验和控制。 A、 从测定值中，找出 最大值和最小值； B、 计算测定均值 χ和s。 C、计算SI上限值和SI下限值，见公式 SI上限= （ 最大值χ）/ s ； SI下限= （ χ 最小值）/ s D、 将SI上限、SI下限值与SI值表中的数字比较。

当SI上限值和SI下限值n2s时，表示在控； 当SI上限和SI下限有一值处于n2s和n3s值之间时， 处于“告警”状态； 当SI上限值和SI下限值n3s时，说明该值已在3s范 围之外，属“失控”。 当检测的数字超过20次以后，可转入使用常规质控 方法进行质控。

即刻法质控原始数据记录表（资料参考） 单位名称: 湖北省临床检验中心 质控项目: HBsAg 试剂来源: 厦门新创 单位名称: 湖北省临床检验中心 质控项目: HBsAg 试剂来源: 厦门新创 试剂批号: 20130205 仪器型号: 美国伯乐550 使用波长: 490nm 质控物来源: 部临检中心 质控物批号及含量: 20130201；１IU/ml

日期 次数 n n 2s n 3s S/CO x s SI上 限 值 SI 下 结果 1/4 1 1.71 2/4 2 1.81 3/4 3 1.15 1.90 0.10 0.9 1.0 √ 4/4 4 1.49 1.46 0.08 1.13 1.25 7/4 5 1.75 1.67 1.09 1.66 0.33 0.73 1.73 ╳ 6 2.10 1.87 0.15 1.53 1.07 8/4 7 1.94 1.82 1.43 1.79 0.22 1.41 1.64 9/4 8 1.62 1.77 0.21 1.57 10/4 9 2.22 2.03 2.14 0.24 1.35 1.60 11/4 10 2.32 2.11 0.26 1.42

日期 次数 n n 2s n 3s S/CO x s SI上 限值 SI下 结 果 14 11 10 2.41 2.18 1.90 1.78 0.24 1.50 1.79 √ 15 12 2.48 2.23 1.35 1.74 0.27 1.48 1.59 16 13 2.55 2.29 2.00 1.77 0.26 1.42 1.62 17 2.61 2.33 1.52 1.75 1.54 18 2.66 2.37 1.71 0.25 1.60 1.56 --- ------ -------- ---- 24 19 2.82 2.50 1.68 25 20 2.85 2.53 1.43 28 21 2.88 2.56 1.76 1.64

20次在控数据测定为： X = 1.76 s=0.25 cv= 14.2% 说明： 1、S为样本测定OD值，CO为Cut--off值，X为均值，s为标准差。 2、结果在控以“√”表示；失控“ ╳ ”表示。 3、失控数据及原因要填写“室内质控失控报告单”。 4、当获取20个在控数据以后，可将X = 1.76作为常用靶值，s=0.25作为常用控制限作图。质控规则主要采用2S、3S规则。 5、具体作图方法参照《全国临床检验操作规程》（第二版）P316页。

绘制质控图（利用20次在控数据作X--S图） X = 1.76 s=0.25 cv%= 14.2% 质控规则 ①    2s： 1质控点落在±2s之外； ②    R 4s： 连续2个质控点相差超出4s范围； ③    4 1s： 连续4个质控点落在同一侧±1s之外； ④ 7 χ： 连续7个质控点落在均值之一侧； ⑤ 7 ↑/↓：连续7个质控点呈连续上升或下降；或周期性波动变化。 S/co值 2.51 2.26 ● 2.01 ● ● ● ● ● ● 1.76 ● ● ● ● ● ● ● ● 1.51 ● ● ● ● ● 1.26 ● 1.01 ● 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 次数 本日期段的X：1.78 SD：0.23 CV：15.2%

编号： 单位名称： 日期： 试验项目： 方法： 测定仪器： 使用波长： 试剂厂家、批号及失效期： 质控物生产单位： 批号失效期： 临床免疫学检验室内质控失控报告单 编号： 单位名称： 日期： 试验项目： 方法： 测定仪器： 使用波长： 试剂厂家、批号及失效期： 质控物生产单位： 批号失效期： 失控质控物批号： 当日测试质控次数： 次 ； 当日第 次失控 失控原因：   失控处理及结果： 操作者签名： 质量负责人签名：    

2）质控物更换了批号如何操作？即刻法前3个点是怎样做出来的？ 5、几点说明 1）开展室内质控的前提条件是什么？ 试剂：同一厂家，同一批号； 质控物：同一含量，同一厂家，同一批号 2）质控物更换了批号如何操作？即刻法前3个点是怎样做出来的？ 应将“新”批号质控品在“旧”批号质控品使用结束前与“旧”批号质控品一起测定， “新”批号质控品的3个在控测定数据为即刻法前3个质控点，且3个测定点的变异系数必须小于30%，再用这3个点来控制“新”批号质控品所发生的数据。 3）试剂更换了批号如何操作？ 将“新”批号试剂测定的质控值标于“旧”批号试剂框架图，看其有无系统误差。如没有，则继续使用原框架；如有，计算“新”批号试剂测定质控值的x与s，再在原框架基础上移动横轴即可。

6、室内质量控制数据实验室间比对评价 同一批号 组织者 不同实验室 质控物 分析比较 检测并提交 每月原始 室内质控数据 评价结果相同方法、不同方法 不准确度和不精密度

方法： 1、汇总所有数据或单个数据点,剔除显著性离群值。 2、对每一批号质控物、每一项目、使用每一分析方法的 所有实验室计算其平均值、中位数、标准差和变异系数。 3、每月定期评价，对于相同方法组可评价自己方法的不 准确度和不精密度。

比对计划对每一分析项目和每一批号质控物提供下列信息： 1、当前月份：均值、标准差（s）和结果个数（N）。 2、计划开始至现在该质控物的累积：均值、s、N。 3、相同方法组：方法均值、s（或CV）和实验室个数。 4、每一分析项目所有实验室：所有实验室均值、s（或 CV）、实验室个数。 5、本方法组SDI=(本室均值-本方法组均值)/本方法组s 6、全部实验室SDI=(本室均值-全部实验室均值)/全部实 验室s SDI在±2之间是“可接受的”

7、本方法组CVI=本室s /本方法组s =本室CV/本方法 ● SDI和CVI是表示方法不准确度和不精密度的指标。 ● SDI是本室均值与相同方法均值比较其接近程度的指 标。

HBV DNA定量PCR室内质控数据实验室间比对的统计量实例 项目 本室 本方法组 全部实验室 对数均值 3.53 3.65 3.72 标准差 0.54 0.64 0.72 变异系数 15.3% 17.5% 19.4% 结果或实验室数 50 45 120 本方法SDI （3.53-3.65）/0.64= -0.19 接受 所有实验室SDI （3.53-3.72）/0.72=-0.26 本方法CVI 0.54/0.64= 0.84 所有实验室CVI 0.54/0.72= 0.75

1、与相同方法实验室的比对 该比对可看出总的分析过程及评价特定的仪器是否准确 如果本室的均值显著性地偏离相同方法组的均值，需要 检查或校准特定的试剂批号、仪器设置或分析过程的其它部 分。

HBV DNA定量PCR室内质控数据实验室间比对的统计量实例 项目 本室 本方法组 全部实验室 对数均值 3.25 5.97 标准差 0.48 1.31 0.92 变异系数 14.7% 21.9% 28.4% 结果或实验室数 50 45 120 本方法SDI （3.25-5.97）/1.31= -2.08 不接受 所有实验室SDI （3.25-3.25）/0.92= 0 接受 本方法CVI 0.48/1.31= 0.37 所有实验室CVI 0.48/0.92= 0.52

2、与所有实验室的比对 上表显示HBV DNA本方法SDI（-2.08） < -2.0 实验室 间比对报告的实例。 注意：本实验室均值与所有实验室均值一样，但是与相 同方法组均值比较不太好，这样，我们需要问两个问题： 1、是否我们报告了正确的方法；我们是否是处在正确 的方法组？ 2、同方法组比对数据是否有效？有多少实验室报告？ 是否可能由于一个或两个异常结果使得数据发生偏离？

HBV DNA定量PCR室内质控数据实验室间比对的统计量实例 项目 本室 本方法组 全部实验室 对数均值 5.39 5.42 3.21 标准差 0.79 1.18 0.56 变异系数 14.7% 21.9% 17.4% 结果或实验室数 50 45 120 本方法SDI （5.39-5.42）/1.18=-0.03 接受 所有实验室SDI （5.39-3.21）/0.56= 3.89 不接受 本方法CVI 0.79/1.18= 0.67 所有实验室CVI 0.79/0.56= 1.41

表显示：本室HBV DNA相对所有实验室SDI为3.89，高于 所有实验室均值2倍标准差以上。 如果本室均值与使用同一方法的实验室比较一致，但是 与所有实验室的均值有差异，这种方法偏倚可能是由于质控 样本产生的缘故。 在这种实例中，当只与使用特定方法的实验室相比对 时，有关质控物的性能会显示很好的一致。 使用本方法的所有实验室的结果可不同于所有组的均 值，是因为质控物的基质效应或本分析过程固有的特征所引 起。

比对评价——运行方式(湖北） 开始时间：2013年3月 比对材料：使用统一质控物 专用的CLInet-IQC系统软件（基于web方式室内质控数据实时监控系统（北 京科临易检）） 通过互联网交换数据 评价方式：每月一次，一年十二次。 评价项目：乙肝五项、丙肝抗体、艾滋病抗体及梅毒抗体。 参加单位数：142家

１、原始记录 （三）分析后质量控制 （1）分类别、客观、如实、准确、及时登记，项目齐全、书写清 晰、规范； （2）阴、阳性与可疑结果不能用“ +、- 、±”表示，必须用汉 字书写或盖印章； （3）ELISA试验每次检测必须有原始酶标仪打印结果，其S/co值应 与原始登记结果一一对应； （4）定量试验结果必须采用法定的国际计量单位； （5）PCR结果报告：定量单位为IU/ml,如果为copies/ml，请换算 为IU/ml。

（6）应有所用试剂厂家名称、批号、有效期；质控血清批 号、有效期、含量；检测仪器名称、型号；检测日期；检测人 、审核人签名等； （7）原始记录如需更改，更改权只能是测试人员，更改处 必须杠改加盖章；原始记录不许带出实验室放在个人手里。

2、实验结果报告 （1）统一的报告形式，包含必要的信息，应有核对制 度，当天的报告应由主管或主管委托人审核，签字或盖章后 方能发出。 （2）各项目原始数据及测定结果应保存3—10年，便于 查询。 （3）如遇危及生命的“紧急值”，应立即通知临床诊治 医师予以处置。

3、室内质控数据的的评价 举例：临床基因扩增检验 1、弱阳性质控常见的失控原因： ①核酸提取中的随机误差：核酸提取的丢失；有机溶 剂去除不彻底；标本中扩增抑制物的残留。 ②仪器的问题：扩增仪孔间温度的不均一；孔内温度 与所示温度的不一致等。 ③试剂的问题：Taq酶和/或反转录酶的失活；探针的 纯度；标记效率和核酸提取试剂的效率等。

2、阴性质控常见失控原因： ① 以前扩增产物的“污染”； ② 核酸提取过程中标本间的交叉“污染”； ③ 试剂的污染。

4、室内质控数据管理 （1）每月室内质控数据处理； （2）每月室内质控数据保存； （3）每月上报的室内质控数据图表。

附件一、试剂盒的评价方法

试剂盒的评价 真实性和可靠性 1、真实性：指测量值与实际值符合的程度（诊断试验应 能提供哪些人确实有病（真阳性）和哪些人确实无病（真阴性 ）的指标）。 评价指标 相对灵敏度：是试验检出有病（即阳性）的人数占患者总 数的比例，即真阳性率。相对灵敏度是衡量真阳性率的尺度。 相对特异性：是试验检出无病（即阴性）的人数占无病者 总数的比例，即真阴性率。相对特异性是衡量真阴性率的尺度 。

评价试剂盒相关指标一览表 试验 有病 （真阳性） 无病 （真阴性） 合 并 阳性 TP FP TP + FP 阴性 FN TN FN +TN 总数 TP + FN FP + TN TP + FP + FN +TN

相对灵敏度= TP /(TP + FN)； 相对特异性= TN/(FP + TN)； 相对符合率=(TP + TN)/(TP + FP + FN +TN)。 2、可靠性：是指在相同条件下重复试验获得相同结果 的稳定程度。如试验结果为均数，可用变异系数表示。 公式为：CV= s/x × 100% S为标准差，x 为平均值。

列举范例（资料参考） （1）标准品来源：中国药品生物制品检定所。 （2）标准品模式： 抗HCV预期阳性100份,预期阴性98份。 （4）在一次对丙肝试剂评价试验中，通过使用该试剂对 198份标准品进行检测，发现抗HCV预期阳性100份标本中，检 出阳性98份、阴性2份：预期阴性98份标本中，检出阴性96份 ，阳性2份。

评价丙肝试剂盒相关指标一览表 试验 有病 （真阳性） 无病 （真阴性） 合 并 阳性 （TP） 98份 （FP） 2份 TP+FP= 合 并 阳性 （TP） 98份 （FP） 2份 TP+FP= 100份 阴性 （FN） （TN） 96份 FN+TN= 总数 TP + FN= FP+TN= TP + FP + FN +TN =198份

经分析： 相对灵敏度 = TP /(TP + FN) =98/100=98% 经分析：  相对灵敏度 = TP /(TP + FN) =98/100=98% 相对特异性 = TN/(FP + TN) =96/98=97.96% 相对符合率 = (TP + TN)/(TP + FP + FN +TN) =98+96/198=97.98%

附件二、酶标仪的自检方法

酶标仪的自检方法 A、外观 酶标仪上应有仪器名称、型号、编号、生产厂家、出 厂日期和电源电压；各调节旋钮、按键和开关均能正常工 作,外表面无明显机械损伤；显示文字应清楚完整。经常维 护其光学部分，防止滤光片霉变。  

B、酶标仪的稳定性(漂移) 选用492nm波大,在吸光度0.OA处,测定标称值为1.OA 的光谱中性滤光片（测定操作按仪器说明进行）,记录仪 器示值或均值,10分钟后再次记录仪器示值或均值,前后 两次测定值之差不应超过±0.005A。

C、吸光度测定的准确度 选用405，492和62Onm波长,以空气为参比,分别测定标准 值为0.5和1.0A的光谱中性玻璃滤光片,用专用测试板代替酶 标板,按仪器说明连续测定3次,按下式计算准确度: ΔA=1/3（A1+ A2+A3）- As (As为标准值)

D、吸光度测定的重复性 波长选择同(3)，在酶标板第一排加注空白溶液,第二 排加入浓度为200μg/m1的重络酸钾溶液,重复测定5次，记 录每次测定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值与 各次对应孔吸光度值，按下式汁算重复性: A= max|Ai-1/5(A1+A2+A3+A4+A5)| × 100% 1/5(A1+A2+A3+A4+A5)

E、酶标仪的线性 选用540nm波长,将标称值0.5,1.OA中性滤光片分别放入专用测试 板样本位置中，以空气为参比,各重复测定3次；然后将以上两片中性 滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中,重复测定3次，线性误差 为： аA =（A1+A2-A1.2）/（A1+A2）×100% 式中A1为第一片中性滤光片吸光度均值； A2为第二片中性滤光片吸光度均值； A1、A2为两片中性滤光片叠加后的吸光度均值；  

F、测定速度的检定 选用492nm波长，放入96孔酶标板进行测定,用秒表 计测仪器的打印出全部数据的时间。 酶标仪除了在选购时,应尽可能自检外,在使用中 也应定期检定,以保证酶标仪测定的有效性。

附：200ug/ml重络酸钾溶液的配制 将重铬酸钾固体试剂放入称量瓶中(去盖)置于烘箱中, 在105士5℃下烘2小时后,置于干燥器内冷却30分钟，在分析 天平上准确称取0.2829g,置于100ml烧杯中,用0.05mol/L稀 硫酸溶解后,移入500ml容量瓶中，以少量0.05mol/L稀硫酸 洗烧杯3次，洗液并入容量瓶中,用0.05mol/L稀硫酸稀释至 刻度线,摇匀。

谢谢大家！！！