实验四 血清谷丙转氨酶（ALT）活性测定
实验目的 掌握测定血清谷丙转氨酶的原理 熟悉测定血清谷丙转氨酶的方法 了解测定血清谷丙转氨酶的临床意义
实验原理 谷丙转氨酶 （ALT） 丙氨酸+α-酮戊二酸 丙酮酸+L-谷氨酸
丙酮酸-2,4-二硝基苯腙在碱性溶液中呈现棕红色，吸收峰在510nm处。颜色深浅与丙酮酸含量成正比。
实验试剂与器材 小试管，微量移液器，恒温水浴箱，分光光度计 基质液（pH 7.4） 显色液（2, 4-二硝基苯肼液） 标准液100u/L (3.0mmol/L) 0.4mol/LNaOH
实验步骤 取9支小试管按下表依次加入以下试剂： 空白管 1 2 3 标准管 4 5 6 样品管 7 8 9 37℃水浴保温 30 min 1 2 3 标准管 4 5 6 样品管 7 8 9 样品（μl） —— 50 标准液（μl） 蒸馏水（μl） 基质液（μl） 250 37℃水浴保温 30 min 显色剂（μl） 37℃水浴保温 20 min 0.4M NaOH（ml） 2.5 静置3min后，在510nm波长处测其吸光值
注意事项 标准液防止污染，2~8℃密封保存。 每次测定时都需用试剂空白液调零，不能用蒸馏水代替。
结果计算 朗伯比尔定律： A=εc l A：物质的吸光度 ε：摩尔吸光系数 l：液层的厚度 c：溶液的浓度
C样 = A样 / A标 × C标 （C标：100u/L） 正常参考范围：0～40 u/L
临床意义 谷丙转氨酶显著升高，见于各种肝炎急性期，药物中毒性肝细胞坏死； 中度增高见于肝癌，肝硬化，慢性肝炎及心肌梗死； 轻度增加见于阻塞性黄疸及胆道炎症等疾患。 GPT主要存在于肝细胞浆内，其细胞内浓度高于血清中1000-3000倍。只要有1%的肝细胞坏死，就可以使血清酶增高一倍。因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。根据肝炎诊断标准，对于慢性乙肝患者病情的严重程度，可以按照轻、中、重度划分，如果谷丙转氨酶40—120单位/升，称为轻度乙肝；谷丙转氨酶120—400单位/升，称为中度乙肝；谷丙转氨酶大于400单位升，成为重度乙肝
思考题 1.血清谷丙转氨酶活性测定的原理是什么? 2. 谷丙转氨酶在机体中哪些组织中活力最强？ 3.血清谷丙转氨酶测定的临床意义？