生物系统中目标蛋白分子的定位、分离与纯化、分析与鉴定 蛋白质实验研究技术进展 生物系统中目标蛋白分子的定位、分离与纯化、分析与鉴定
生物系统中目标蛋白分子的定位、分离与纯化、分析与鉴定 蛋白质实验研究技术进展 生物系统中目标蛋白分子的定位、分离与纯化、分析与鉴定
生物系统中目标蛋白分子的定位 三个关键问题: 目标蛋白分子病理条件下的位置变化 避免假阳性 提高检测灵敏度
相关技术： 免疫细胞化学技术 放射自显影技术 X-射线显微摄影术 普通光学显微镜技术 透射电子显微镜技术 扫描电子显微镜技术 荧光显微镜技术 共焦激光扫描显微镜技术
免疫细胞化学技术 荧光素 (fluorescein, FITC, TRITC) 辣根过氧物酶 (horseradish peroxidase, HP) 磷酸酶 (phosphatase) Second antibody-1 Second antibody-2 First antibody Antibody Antigen 直接法（direct method） 间接法（indirect method）
Horseradish peroxidae antibody Second antibody First antibody Antigen 过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物法, PAP （peroxidase-antiperoxidase complex method, PAP）
标记亲和素-生物素法（Labelled Avidin-Biotin method, LAB） Horseradish peroxidae Biotin Horseradish peroxidae Avidin Second antibody Avidin Antibody Biotin First antibody Antigen Antigen direct method indirect method
bridged avidin-biotin method Biotin 桥连亲和素-生物素法, BAB bridged avidin-biotin method Biotin Biotin HP Avidin HP Avidin Second antibody Second antibody First antibody First antibody Antigen Antigen 亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法, ABC avidin-biotin -peroxidase complex method
放射自显影技术(autoradiography, ARG) 制备放射性同位素标记探针 把放射性探针注入动物体内或加入生长在玻片上的细胞的培养液中 一定时间后，杀死动物取材制成切片或从培养液中取出玻片 在黑匣中, 切片或玻片与X-光片或涂有核乳胶的感光干板相贴感光 显影、定影处理 放射性同位素信号定位图像 目标分子定位情况
X-射线显微摄影术（ X-ray microphotography）
Generation of fluorescence Emission light Fluorescence Thermal radiation Red Orange Yellow Green Cyan Blue Violet 2 3 1 Excitation light Ultraviolet （250~400nm）
Fluorescent dye Name Excitation light, nm Emission light, nm Usage Primulin (樱草素) 360 400~500 Cell/Bacteria Thioflavine (硫代黄素) 380 420~550 Coumarin (香豆素) 450 Fluorescein (荧光素) 405 480 Auramine (金胺, 槐黄) 435 490~590 Fluorescein diaceticate (二乙酸荧光素) 460 610 Cell survival
Fluorescent dye, continue Name Excitation light, nm Emission light, nm Usage Rhodamine 123 (罗丹明 123) 560 540~660 Mitochondrion JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethyl benzimidalyl carbocynine iodide) 490 527(low concentration or low poten) /590(high concentration or high poten) DAMP [N-(3-((2,4-dinitrophenyl) amino)propyl)-N-(3-aminopropyl) methy-lamine, dihydrochloride] 346 Lysosome Neutral red (中性红) 541 640 DiOC6 (dihexyloxacarbocyanine iodide) 459 584 Endoplasmic reticulum NBD [Ceramide (6-((N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazolyl)-4- amino) caproyl)sphingosine)] 464 532 Golgi complex
Fluorescent dye, continue Name Excitation light, nm Emission light, nm Usage Coumarin (香豆素) 360 450 Label Antibody Fluorescein isothiocynate, FITC (异硫氰酸荧光素) 488 490~610 Phycoerythrobilin (藻红素) 570 Duochrome (二铬黄) 630 Texas red (德克撒斯红) 600
Fluorescent dye , continue Name Ex. nm Em. nm Usage Hoechst 33258 (赫斯特 33258) 360 505 DNA Mithramycin (光神霉素) 457 570 Ethidium bromide (溴化乙啶) 488 610 Propidium iodide (碘化丙啶) 620 Acridine orange 405 530~640 DNA or RNA Pyroniny (派若宁丫) 580 RNA
Fluorescent dye , continue Name Ex. nm Em. nm Usage Coriphosphine (沉香硫化氢) 458 470~660 Lipids
Fluorescent dye , continue Name Ex. nm Em. nm Usage Indo-1 355 405 Ca2+ (high) Fluo-3 490 525 Ca2+ Calcium green-5N 506 531 Rhod-2 550 575 Calcium orange 554 Calcium Crimson 588 611 Fura-Red 488 660
Fluorescent dye, continue (Usage: pH) Name Ex.peak, Diex.rate, nm Em.peak, Diem.rate, nm BCECF, range: 6.4~7.4 437/508, 490/440 520/531, 530/640 Cl-NERF 503/514, 488/514 540/539 CMHC 327/372, 372/327 470/470 COFDA 450/495, 490/450 520/520, 520 DHPN 380/405, 420/360 453/483, 512/455 DHPDS 405/458, 458/405 465/500, 500/465 DM-NERF 497/510, 488/514 527/535 4-MU 330/360, 365/334 450, 450/550 Pyranine 400/465, 450/400 510/510, 465/510 Quene-1 390 530 SNAFL-2 510/546, 540/480 539/630, 630/520 SNAFL-calcein 506/538 535/620 SNARF-1, range: 6.3~8.6 546/575, 590/500 588/673, 636/568 SNARF-calcein 506(533)/585 580/630