临床寄生虫学和寄生虫学检验 Clinical parasitology And laboratory 牡丹江医学院 临床检验诊断教研室 主讲人：黄永存 消化道寄生虫 人芽囊原虫 贝氏等孢球虫 齿龈内阿米巴 病原检查

其他消化道寄生原虫 人芽囊原虫 人芽囊原虫(Blastocytis hominis)广泛分布于世界各地,我国同样存在该虫的感染 形态与生活史 致病与诊断 流行与防治

人芽囊原虫形态及生活史 形态 碘染后光镜下观察 人芽囊原虫大小差异较大，多为6~15m， 形态结构复杂，在患者粪便及体外培养中空泡型、颗粒型、阿米巴型和复分裂型 碘染后光镜下观察 空泡型虫体呈圆形，直径4-15m，中央见透亮的大空泡 核呈月牙状或块状，可有1-4个不等

人芽囊原虫形态及生活史 感染阶段：空泡型 感染方式：饮食或水源污染 空泡型 阿米巴型 空泡型 寄生于人和其他灵长类动物的回盲部 空泡型也可转变为颗粒型和复分裂型 感染阶段：空泡型 感染方式：饮食或水源污染 寄生于人和其他灵长类动物的回盲部 生殖方式包括：1）二分裂； 2）空泡型 3）内二芽生殖；4）裂体增殖

人芽囊原虫致病与诊断 人芽囊原虫的致病机制尚不清楚,致病力较弱 消化道及全身症状 腹泻、腹痛、腹胀、厌食、嗳气、 恶心、呕吐 发烧、寒战症状可持续或反复出现， 可持续数日、数月，甚至几年 慢性迁延性病程多于急性病程

人芽囊原虫致病与诊断 病原检查 粪便中检获虫体 常用方法 直接涂片法 浓集法 注意与溶组织内阿米巴、哈门氏内阿米巴、微小内蜒阿米巴的包囊及隐孢子虫卵囊甚至真菌相鉴别 粪便中检获虫体 常用方法 直接涂片法 浓集法 碘液染色法 固定染色法(姬氏或瑞氏染色法) 培养法

人芽囊原虫呈世界性分布, 在发展中国家感染率较高国内人群感染率多在10%以下，但有的地区可高达30.4%。平均感染率为1.284% 人芽囊原虫流行与防治 人芽囊原虫呈世界性分布, 在发展中国家感染率较高国内人群感染率多在10%以下，但有的地区可高达30.4%。平均感染率为1.284% 传染源 人芽囊原虫的病人、带虫者或保虫宿主 传播途径 污染水源、食物及用具 人与猪、禽类密切接触 蟑螂和苍蝇是重要的传播媒介 易感人群 人群普遍易感与性别、年龄和种族无关

人芽囊原虫流行与防治 加强卫生宣传教育 注意个人卫生和饮食卫生 作好粪便无害化处理 保护水源，消灭蟑螂和苍蝇 对从事饮食行业人员的定期检查并及时治疗

粪便中人芽囊原虫各种形态

粪便中人芽囊原虫各种形态

水源污染

贝氏等孢球虫 形态与生活史 致病与诊断 流行与防治

贝氏等孢球虫形态与生活史 贝氏等孢球虫(Isospora belli)寄生于人体肠道内 卵囊:呈椭圆形或纺垂形,大小约20-33μm×10-19μm 成熟卵囊:含有2个孢子囊,孢子囊为椭圆形,大小约为9-11μm×7-12μm内含4个腊肠形的子孢子和1个残留体

贝氏等孢球虫形态及生活史 食物或饮水 成熟卵囊 子孢子逸出 体外 肠上皮细胞 肠腔 成熟卵囊 滋养体 卵囊 裂殖体 雌配子体 卵囊 合子 裂殖子 雄配子体 恢复期患者粪便中可持续排出卵囊达120天

贝氏等孢球虫致病与诊断 消化道及全身症状 胃肠道不适或慢性腹泻、腹痛、厌食、倦怠 可引起发热 持续性或脂肪性腹泻甚至可引起死亡 恢复期仍可持续排出卵囊 典型的病理 肠绒毛变平、变短、融合、变粗、萎缩、隐窝增生、肥大延长、肠上皮细胞出现增生

贝氏等孢球虫致病与诊断 病原诊断 流行 粪检卵囊直接涂片或浓集法 抗酸染色法可使卵囊壁轮廓呈现清晰、囊内孢子囊为红色 肠检胶囊法或十二指肠活组织检查 流行 中南美洲、非洲和东南亚多见,随着艾滋病的发病率增多，在艾滋病人或同性恋男性中发病率也在升高

贝氏等孢球虫流行与防治 防治原则及措施 病人及带虫者的治疗 同消化道传染病的防治 注意饮水、饮食卫生和阻断粪-口途径 甲氧苄氨嘧啶 磺胺甲异噁唑 疗程 1个月，用药2天内即可控制腹泻

贝氏等孢子球虫卵囊发育各期形态

齿龈内阿米巴 齿龈内阿米巴(Entamoebagingivalis)为人口腔齿龈部共栖原虫 形态与 生活史 致病与 诊断 流行与 防治

齿龈内阿米巴形态与生活史 齿龈内阿米巴生活史中仅有滋养体而无包囊期 滋养体传播方式 滋养体直径10～30um，活体时可见运动活泼，伪足明显，内外质分明 胞质中常含有一个细胞核，核仁居中而明显，核膜内缘含有大小均匀、排列整齐的核周染色质粒 滋养体传播方式 直接接触或飞沫在人与人之间传播 滋养体 滋养体

该虫为非致病性 齿龈内阿米巴致病与诊断 牙周病、牙周炎等口腔疾患者中感染率较高，尤其在细菌性齿龈病灶的组织中虫体量较多 诊断 虫体也不会侵入组织 牙周病、牙周炎等口腔疾患者中感染率较高，尤其在细菌性齿龈病灶的组织中虫体量较多 诊断 取牙垢或化脓性齿龈病灶的脓液生理盐水直接涂片，亦可作染色检查

齿龈内阿米巴致病 与牙周病的关系 福建医科大学刘光英(2001)研究资料 齿龈内阿米巴感染率调查: 牙周病实验动物模型观察: 正常人39.0%, 口腔科门诊病人59.6%, 牙周病人67.1% 牙周病实验动物模型观察: 齿龈内阿米巴诱导组牙周病发生率94.0% 共生菌诱导组牙周病发生率56.2% 生理盐水对照组牙周病发生率0.6%

齿龈内阿米巴流行与防治 齿龈内阿米巴呈世界性分布 保持良好的口腔卫生 防止与狗、猫等宠物的亲妮 防治 药物为甲硝唑

滋养体 染色标本 结构特点

齿龈内阿米巴 活滋养体 （生理盐水涂片） 齿龈组织切片 （示组织内滋养体） 滋养体 （铁苏木素染色）

消化道寄生虫的病原检查 对消化道寄生虫感染或寄生虫病的病原检查,主要是根据寄生虫排离阶段可随粪便排出体外。所以,采用粪便检查或肛门周围检查寄生虫是对消化道寄生虫检查的主要手段。要取得粪便检查的准确结果

病原检查注意事项 保证粪便新鲜 容器须干燥、洁净,无尿液或水混入,以及药物、泥土和杂质污染 容器外贴有标签 粪量一般为5－10g 镜检时要熟悉各病原体形态特点

消化道寄生虫的病原检查 粪便直接涂片法 粪便虫体检查法 厚涂片透明法 铁苏木素染色法铁苏木素染色法 定量透明法 饱和盐水浮聚法 自然沉淀法 钩蚴培养法 肛门拭子法 粪便虫体检查法 铁苏木素染色法铁苏木素染色法 溶组织内阿米巴培养 隐孢子虫卵囊染色检查

蠕虫卵:滴一滴生理盐水,用竹签挑取米粒大小的粪便,置于生理盐水中混均 检查原虫:可根据原虫不同的排离阶段 粪便直接涂片法 检查蠕虫卵、原虫的包囊和滋养体 蠕虫卵:滴一滴生理盐水,用竹签挑取米粒大小的粪便,置于生理盐水中混均 检查原虫:可根据原虫不同的排离阶段 活滋养体检查:方法同检查蠕虫卵,但涂片要薄而均匀 包囊碘液染色检查:以碘液代替生理盐水滴加于载玻片,加盖玻片

厚涂片透明法 即改良加藤法(modfied Katos thick smear)检查蠕虫卵 用100目/英寸的尼龙网覆盖在粪便标本上 用塑料刮片在网上刮取粪便约50mg，置于载玻片上，用浸透甘油-孔雀绿溶液的玻璃纸片覆于粪便上，以胶塞轻压使粪便展开约20mrn×25mm大小模块 置于30℃～36℃温箱中约30分钟，或25℃约1小时，待粪膜稍干并透明即可镜检

饱和盐水浮聚法(brine floatation) 定量透明法 定量透明法适用于各种粪便内蠕虫卵的检查及计数,可测定人体内蠕虫的感染度(虫荷worm burde),也可判断药物驱虫效果 利用某些蠕虫卵的比重小于饱和盐水,虫卵可浮于水面 饱和盐水浮聚法(brine floatation)

自然沉淀法(nature sedimentation method) 60目铜筛过滤清水洗涤沉淀 钩蚴培养法(hatching test for hookwo。Larvae) 孵育出丝状蚴可作虫种鉴定

肛门拭于法(anal swab)与肛周蛲虫检查法 粪便虫体检查法 淘虫检查法 带绦虫节片检查

铁苏木素染色法铁苏木素染色法 (iron hematoxylin stain) 阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊的染色鉴定 胞质呈灰褐色,胞核、包囊内的拟染色体及溶组织内阿米巴滋养体吞噬的红细胞均被染成墨色，糖原泡则被溶解呈空泡状

溶组织内阿米巴培养 当受检者疑有溶组织内阿米巴感染,而直接粪便检查为阴性时,可作阿米巴人工培养,培养方法有常规培养、有菌培养和无菌培养

常 规 培 养 取脓液、粘液稀便0.5ml,或黄豆大小的成形便,直接接种至试管内与培养液混匀;或将粪便自然沉淀后,取沉淀物 0.5ml接种至试管内 置试管于370C温箱中培养,培养后24h、48h、72h取培养液中的混浊部分涂片镜检,查出虫体可确诊

有菌培养(共生培养) 在含有琼脂斜面的6ml有螺旋盖的培养管加入 米粉 10mg 红霉素液 120μl 4:1混合液 遮盖斜面 4:1混合液 遮盖斜面 邻苯二甲酸氢(pH6.3,115℃20min高压灭菌)和BRS液4:1混合液,加入约50mg粪便、混匀

结肠内阿米巴、微小内蜒阿米巴和哈门氏内阿米巴等多种阿米巴的培养 有菌培养(共生培养) 370C培养24h,倾去培养上清液加入 4:l混合液 适量 米粉 少量 红霉素液 60μl 370C再培养48小时后,取米粉与粪渣混合物,以碘液染色或直接观察有无滋养体 若未发现虫体,再加入米粉后,继续培养24小时 结肠内阿米巴、微小内蜒阿米巴和哈门氏内阿米巴等多种阿米巴的培养

由于虫体对培养基的要求甚高,难度较大,不适于临床检验 无菌培养(纯种培养) 无菌培养主要用于溶组织内阿米巴的克隆培养 在有菌培养的基础上，将虫体转种至无菌培养基中，使其逐渐转为无菌培养，并可进一步克隆化 由于虫体对培养基的要求甚高,难度较大,不适于临床检验

隐孢子虫卵囊染色检查 常用的方法 是金胺-酚改良抗酸染色法 采用金胺-酚染色法和改良抗酸染色法复染，以提高检出率和准确性 新鲜粪便或经10％福尔马林固定保存(4℃1个月内),自然沉淀后用吸管取底部粪便,涂片，晾干用金胺-酚染色,改良抗酸染色法复染

金胺-酚染色法 低倍荧光显微镜下,可见卵囊为一圆形小亮点,呈现乳白色荧光 高倍镜下卵囊呈乳白或带绿色,卵囊壁为一薄层,多数卵囊周围深染,中央淡染,似环状;或深染结构偏位,有些卵囊全部为深染

改良抗酸染色法(modified acidfast stain) 卵囊为玫瑰红色,圆形或卵圆形,背景为绿色 卵囊和子孢子被染成玫瑰红色,子孢子呈月牙形，共4个，其它非特异颗粒则染成蓝黑色

饱和盐水浮聚法

自 然 沉 淀 法

钩蚴培养法 透明胶纸法

人体常见寄生蠕虫（线虫）

常见人体寄生蠕虫(吸虫)

两种带绦虫孕节的比较 牛带绦虫孕节 猪带绦虫孕节