生化工程應用 E. coli 大腸桿菌之生長曲線

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生化工程應用 E. coli 大腸桿菌之生長曲線 實驗操作日期:90.12.13 報告者:化工所研一陳克強 黃智銘

實驗流程 挑菌, 培養基選擇 Overnight culture Autoclave Shaking bath 培養 分光光度計測量細菌濃度 數據分析

Autoclave(滅菌)--Autoclave之目的 生物工程的實驗要求精確,稍一點污染便會導致失敗,來自外界無數看不見的菌類,都可能在操作時造成污染,為確保實驗儀器、設備無菌,在使用前必須先加以滅菌。

Autoclave(滅菌) --操作條件 溫度---120~125℃ 壓力---2 atm

Autoclave(滅菌)--操作時間 固體---25~30分鐘 液體---15分鐘

medium(培養基) M9 mediuml: LB medium: Na2HPO4‧7H2O 磷源 KH2PO4 磷源 NaCl NH4Cl 氮源 MgSO4 硫源 CaCl2 glucose 碳源 有時Na、K、Mg、Ca等金屬離子可作為Coemzyme (輔)其所需量很少。 LB medium: Tryptone-b Yeast extract-B NaCl

養菌挑菌 (一) 為避免挑菌時污染菌種,以經滅菌的木棒摘取,為避免木棒受污染,必須小心拿取木棒末端。

養菌挑菌 (二) 以木棒挑取固態培養基上的一個菌落 (E. coli VJS676),置入含有medium的試管中。

Overnight culture 旋轉式震盪機中以37℃、轉速:85 rpm,作隔夜培養,一般培養12-16小時。

三角錐形瓶shaking bath培養 300ml三角錐形瓶中加入30 ml LB medium於shaking bath中,用37℃,108 rpm轉速培養起始濃度設定為0.05(以O.D.值表示),故於Overnight culture所得之菌中,取出0.442ml 菌液,加入錐形瓶中培養。

測量O.D----抽樣 抽樣—每隔30分鐘以滴管吸取樣品1ml於比色槽中。

測量O.D. ----量測 利用分光光度計測量於O.D. 600nm時的吸收度。

圖表.1 Growth curve of cell Time (hr)

圖表.2 Growth curve of cell Time (hr)

計算: Maximum growth rate …………….(1) …….(2) when is constant 由plot log OD vs. t The greatest slope in linear region: 由實驗數據得知:

計算: =doubling time of cells …………….(3) occurs when …………….(4)