生物技术实验—凝集反应 免疫学教研室 刘平
凝集反应 【实验目的】 1．了解凝集反应的原理、基本类型及其临床意义。 2．掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的实验方法和结果分析。
＋ 【概述】 在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。 特异结合 抗原 特异性抗体 在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。 抗原 特异性抗体 特异结合 电解质 ＋ 抗原抗体复合物
凝集反应是一种定性的检测方法，也可以进行半定量检测。由于凝集反应方法简便，目前在临床检验中仍被广泛应用。 凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应。
一、直接凝集反应 细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应 。 常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。
玻片凝集试验——ABO血型鉴定 玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。 此法简便，快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。
【实验原理】 人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。 ABO血型的划分 红细胞表面Ag 血清中Ab A型 A 抗B B型 B 抗A AB型 A、B —、— O型 抗A、抗B
【实验材料】 1．ABO血型鉴定试剂盒 内含抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。 2．一次性采血针1枚、洁净玻片2块、75％酒精、灭菌棉签。
4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。判定结果后把玻片放入消毒液中。 【实验方法】 1．取洁净载玻片1块，并标记（如图） A B 抗A 抗B 2．将抗A、B分型试剂分别加 1滴于标记有A、B的玻片两侧。 3．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。用另一载玻片一端取适量血液加入抗抗A分型试剂，并混匀；用另一端再取适量血液加入抗抗B分型试剂，并混匀。用干棉签止血。 4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。判定结果后把玻片放入消毒液中。
【实验结果】
二、间接凝集反应 将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。 根据载体的不同可将间接凝集反应分为：间接血细胞凝集试验、间接乳胶凝集试验（及间接乳胶凝集抑制试验）和金黄色葡萄球菌协同凝集试验等。
原理 载体 可溶性抗原 致敏颗粒 致敏 NS 凝集颗粒 间接凝集试验示意图
载体种类及其处理方法 红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。 聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒
间接凝集抑制试验——妊娠试验 【实验原理】 可溶性抗原致敏的乳胶颗粒与相应抗体作用可使乳胶颗粒凝集，此为间接乳胶凝集试验。若使抗体先与可溶性抗原作用，再加入该抗原致敏的乳胶颗粒，则乳胶凝集被抑制，此为间接乳胶凝集抑制试验。 孕妇尿中绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。HCG与抗HCG抗体先作用后，再加入HCG致敏的乳胶颗粒，不出现凝集反应，此为妊娠试验阳性；非孕妇尿中HCG含量不足以消耗掉抗HCG抗体，抗体与后加入的HCG致敏乳胶结合呈现凝集现象，则妊娠试验阴性。
抗原抗体复合物 待测抗原 已知抗体 特异结合 ＋ NS 间接凝集抑制试验 致敏颗粒 无凝集颗粒 阳性
抗原抗体分散 待测抗原 已知抗体 ＋ 无结合 NS 间接凝集抑制试验 致敏颗粒 有凝集颗粒 阴性
【实验材料】 1．妊娠诊断试剂盒：内含抗血清（抗HCG）、乳胶抗原（HCG致敏） 各一支 2． 1号尿、 2号尿。 3．有格玻片和毛细吸管等。
【实验方法】 1．在玻片的第1、第2内分别加1滴1号尿、 2号尿。 2．每格内加入妊娠诊断试剂抗血清1滴。轻轻摇动1~2 min使其充分混匀。 3．每格加入乳胶抗原1滴，轻轻摇动玻片3~5 min后观察结果，记录各标本有无凝集现象。
【实验结果】 孕妇尿格呈均匀浑浊乳状液，无凝集，妊娠试验阳性；正常尿格出现白色细小凝集物，随时间延长凝集物变成小块状，妊娠试验阴性。待检尿若为乳状液，妊娠试验阳性；若出现凝集，则妊娠试验阴性。 1 2 孕妇尿 正常尿
【注意事项】 1．试验所用诊断试剂用前应充分摇匀，而且应在有效期内使用。 2．加样用的滴管及混匀用的牙签不能共用。 3．加样不宜太多，玻片应始终保持水平，以防两格之反应液相混。
【实验思考】 1．记录血型鉴定试验、乳胶妊娠诊断试验的材料、方法及结果判定（可用图示或表格方式表示）。 2．直接凝集试验与间接凝集试验有何不同？ 3．在各凝集试验中都设有相应对照，有何意义？若对照出现异常如何分析及解决？