酵素产品酶活性的检测方法 齐鲁工业大学 生物工程学院 岳秋林 博士
主要内容 酶催化反应原理 酵素产品部分酶活性的检测
一、酶催化反应原理
把催化反应转化成可测量的模式 Juang RH (2005) EPA
测量酶催化活性应注意的事项 酶活性的检测通常是指催化活性的检测,建立活性检测步骤时,应注意: 1.测定生成物的产生量比测定反应物的消失量更方便,且灵敏。 2.复杂的反应,可能生成意外的生成物(或pH改变),回馈抑制酶反应。 3.反应条件应有利于指定反应方向的进行,可以移除生成物,或接上耦合反应。
二、酶活性的检测方法 直接测定生成物 光谱学检测法 HPLC检测法 耦合反应法 (可耦合脱氢酶反应) 化学测定法 电极检测法
酶活性检测的具体方法 (一) 光谱学检测法 生成物有特定的紫外或荧光吸收
木聚糖酶、纤维素酶活性检测: 木聚糖酶 木聚糖 DNS 还原糖 显色反应 比色法 纤维素酶 羧甲基纤维素
蔗糖转化酶的活性检测: 光谱学检测
蛋白酶活性的检测: BBA - Proteins and Proteomics, 1864 (1), 2016, 130-142
酶活性的检测方法 (二) HPLC检测法
植酸酶的活性检测方法: (植酸酶催化的脱磷酸反应的探针)
Soil Biology & Biochemistry 41 (2009) 192-200
酶活性的检测方法 (三) 化学测定法 如果生成物不具有光谱学特性,可以通过化学反应使之转化成具有特定光谱吸收的物质,进而进行测定。 葡萄糖醛酸酶(GUS)
酶活性的检测方法 (四) 电极检测法
淀粉酶的活性检测 Biosensors and Bioelectronics 20 (2004) 240-245
酶活性的检测方法
酶活性的检测方法 (五) 耦合反应法(可耦合脱氢酶反应) 脱氢酶以NADH/NADPH为辅酶 NADH/NADPH的转换可耦合340nm吸光度变化:
酶活性的检测方法 葡萄糖激酶的活性检测: