酶的分离与纯化 Enzyme Purification
主要内容 二、酶的分离纯化技术 一、绪论 三、实例分析 （一）制酶的要点 （一）酶的特性 （二）酶提纯的步骤与方法 （二）酶的史程 （三）酶的命名与分类 二、酶的分离纯化技术 （一）制酶的要点 （二）酶提纯的步骤与方法 （三）酶活性的保持 （四）酶的质量鉴定 三、实例分析 2019/2/28
一、绪论 （一）酶的特性 反应前后无改变 催化反应条件 催化专一性 催化效率极高 中心构象决定其催化活性 2019/2/28
（二）酶的史程 1964？ 1837年 Berzelius fermentation catalysis 活细胞 一、绪论 （二）酶的史程 1837年 Berzelius fermentation catalysis 活细胞 1857年 Pasteur 酒的发酵 Yeast Cell 1878年 Kuhne Enzyme In Yeast 酵素/酶 1897年 Buchner 酵母汁完成发酵 酶无生命 1913年 Michaelis Menten 1926年 Sumner 脲酶（urase/urease） 1930年 Northrop 胃蛋白酶（pepsin/pepsase） 1964？ 1965年 Blake lysozyme 晶体结构分析 1969年 Gutte&Merrifield 有机合成Ribonuclease 1982年 Cech 核酶（ribozyme） 2019/2/28
（三）酶的命名与分类 俗名（trivial name） Urease/proteinase lactate dehydrogenase 一、绪论 （三）酶的命名与分类 俗名（trivial name） Urease/proteinase lactate dehydrogenase Papain/Trypsin 学名（systematic name） 分类与编号 Oxidoreductase, transferase, hydrolase Lyase, isomerase, ligase/synthetase EC编号：底物.产物.辅酶.性质 目前仍然存在的问题？ 2019/2/28
（一）制酶的要点 4个要点：酶源选择/匀浆方法/分离步骤/结晶方法 二、酶的分离纯化技术 选材 抽提液 粗酶制品 精制 纯酶 亚细胞结构 酶结晶 2019/2/28
（二）酶提纯的步骤与方法 常用的主要方法 酶分子的性质 方法 分离能力 酶源选择、匀浆、分离纯化方法 二、酶的分离纯化技术 2019/2/28
二、酶的分离纯化技术 （三）酶活性的保持 原则：尽量恢复到细胞中原来的天然环境 讨论！ 2019/2/28
活性保持措施 缓冲液和pH值 辅因子 抗氧化剂 金属离子 稳定剂 温度 蛋白水解酶 沉淀与结晶 如何保存 2019/2/28
二、酶的分离纯化技术 （四）酶的质量鉴定 浓度鉴定 纯度鉴定 活性鉴定 比活性的测定与分析 2019/2/28
三、实例分析 见书实验十四：P31-P33 分析与讨论要点： ACP性质 分离纯化方法 保持酶活性的措施 2019/2/28
THE END 2019/2/28