细胞系的生命期

原代培养 Primary culture

原代培养 Primary culture 概念 从体内取出组织细胞开始培养到 第一次进行传代之前的时期，一个特征性的必然的生长阶段。 完成了从体内环境到体外环境的过渡和适应过程，恢复了分裂增殖与生长发育 的能力

含义:包含 ①原代培养实质是初次培养，即培养物接种到培养器皿 中就不再分割，任其生长繁殖 ②原代培养中的“代” 并不是指细胞繁殖的“代”数 ③原代培养过程中不分割培养物 不等于不更换培养液 建立方法: 组织块法,分散(细胞悬液）法 时间: 一般1~4周

特点 (1)性质 ①性状似体内 可表达某些形态、结构、功能,更能 代表活体细胞最接近在体时的情况 ②细胞异质性 细胞成分混杂，除目的细胞之外， 其它各种细胞还存在 ③细胞活跃移动，分裂不旺盛 ④相互依赖性强 独立生存能力差,不易单个培养

特点 (2)发展过程:调整组成 原代培养的产生- -选择 结果:形成相对均一的细胞系 选择第一步:形成原代培养的基础 组织块:能迁移出的 消化分散:操作中能生存、附着 能悬浮生存

特点-发展过程 选择第二步: 时间：数小时后至铺满 (汇合confluence) 变化：数小时后至进一步选择中 3种情况:能增殖 能存活 不能存活 细胞类型,继续改变,至铺满

特点-发展过程 选择第三步: 时间：铺满后 (可用于生长区域已被利用) 变化：通过密度抑制 密度依赖性敏感的细胞(如正常细胞)----- 密度依赖性敏感低的细胞(如永生性细胞)---

特点-发展过程 需及时传代 传不传代及何时传代 根据： 接种的细胞数量 培养瓶皿的大小 培养条件 在一定程度上具有可人为操作的特征

传代期- -细胞系 Subculture - - Cell line

传代期- -细胞系 Cell line 概述 将原代培养物经过分割，重新接种 到两个或两个以上 的器皿内进行培养， 进入传代培养期 整个培养过程的主要时期 原代培养物---------要经过反复传代 传代培养期 并不单指原代培养物经首次传代后 的“第一代”培养过程 而是指由首次传代开始经 反复传代一直到培养物 开始衰退之前的全部时间

经过传代即称为细胞系 细胞系可以继续传代 传代培养期就是 维持细胞系增殖、生长的培养过程 传代培养期的长短： 培养的细胞种类 供体年龄大小 一般是有限细胞系

特点 细胞分裂增殖活动旺盛，细胞生长活跃 细胞群体在调整：每次传代,调整 - 因增殖能力、耐受力差异 原本成分混杂的培养物中， 增殖能力较强的细胞渐处于优势 其它逐渐淘汰 传代培养早期，细胞尚能保持二倍体核型 随着传代次数增加 细胞发生转化的概率增大

能维持的代数 一般是有限细胞系 种族(主要):成纤维细胞 人,50; 猴,40; 鸡,37;鼠,8 部位:人: 胚肺 50±10; 肾8~19 猴: 肺 5; 肾 20; 耳 40 条件:如表皮细胞 +EGF 从50代 增加至150 年龄

传代的频率 原则上 贴壁生长将长满培养罪皿的生长面(器皿的底壁) 悬浮培养下细胞密度足够大 具体时间并没有定时， 根据 具体情况，但提前或过晚 (尤以后者)都不合适 一般:数天~ 一周 因素: 接种细胞数量:量大- 快 接种细胞性质:细胞系比原代- 快 培养液:高血清- 快

意义 生物学意义:形成较均一的细胞 实际意义: 优点:可传代,有特征,数目多,均一性, 可冻存 缺点:遗传学可改变,失去分化

衰退期Senescence phase

衰退期 Senescence phase 概述 仍生存,但基本不增殖- - -衰退,死亡 传代培养到一定的代数时， 细胞的生命活动明显减弱。 细胞虽然生存，但生长缓慢、 很少分裂增殖甚或不再分裂， 即使及时换液也无效 表明培养物已经进入衰退期， 再向前发展，只有退化、死亡

特点: 细胞系的生命期--归宿 有限细胞系: 一般 衰退、死亡 转化:永生化: - -连续细胞系 自发性转化 诱导转化

自发性转化:偶而,个别通过危机- -转化 培养的细胞，由于尚不明确的原因--- 使培养的细胞发生自发的转化 转化细胞的性状可传递给予代细胞 来源细胞:2种可能 转化因素:种族来源 正常细胞:人 0; 鸡 0; 鼠较易 9/11 诱导转化 诱导因素:化学、幅射、病毒等

诱发培养细胞的转化因素 凡能改变DNA (基因)结构的因素 都可能成为诱发细胞转化因素。如 ①化学因素：如MNNG（甲基硝基亚硝基胍） ②物理因素：射线，包括放射性核素等. ③病毒: SV40,逆转录病毒等. ④癌基因: 大多癌基团均有使细胞发生转化的 能力, 但癌基因的转 化必须借助载体和转导辅助因素. 如诱发细细发生恶性转化,单个癌基因尚不足(如ras癌基因等), 常 需一两个以上才能产生这种效应

衰退期不同于每一代培养细胞的停滞期 处于衰退期的细胞以任何方法都不能阻 止 其向死亡方向发展。 可见细胞轮廓增强，细胞质内出现暗的颗粒样结构及空泡状结构胞质 突起回缩,有时可脱落