The Lowry Method for Protein Quantitation www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！
www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！ 目的与要求： 掌握改良Lowry氏法测定蛋白质含量的原理及方法； 了解标准曲线在物质定量测定中的应用及绘图要点。 www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！
www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！ 实验原理： 在碱性条件下蛋白质的肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质-铜复合物。（双缩脲反应 Biuret Reaction） 蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成钼蓝-钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量。（还原反应） www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！
www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！ 操作步骤 试剂(mL) 试管号 1 2 3 4 5 测定管 蛋白质标准溶液(0.20mg/ml) 0.10 0.20 0.40 0.60 0.80 生理盐水 1.00 0.90 试剂A www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！
www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！ 混匀后置于37度水浴10分钟。 冷却后各管加入试剂B 0.1mL，室温放置10分钟。 各管接着加入试剂C 3mL，立即混匀，置37度水浴10分钟。 冷却后，以0号管为空白，在分光光度计上以波长650nm比色读取光密度值。 www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！
www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！ 结果与计算： 根据测定管光密度值查标准曲线，由标准曲线计算血清蛋白质含量，再按血清稀释倍数换算为g/L。 www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！
www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！ 注意事项： 各管加酚试剂时必须快速，并立即摇匀，不应出现混浊。 移液管使用前要看清楚刻度和是否写着快、吹，如有则需要用洗耳球吹出剩余液体。 减量法可有效减少误差。 分光光度计使用前需预热，绝对调零和空白管调节透光度为100%。 www.ggene.cn 基因时代，为生命科学提供源动力！