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第七章 食品常见有 害有毒物质的检测
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内容简介 本章讲述了食品食品中常见 有害有毒物质如有机氯农药、有 机磷农药、黄曲霉毒素等的测定 方法以及各种测定方法的注意事 项。 第七章 食品常见有害有毒物质的检测
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学习目的与要求： 1 、掌握食品常见有害有毒物质如有机氯农药、 有机磷 苯农药残留及黄曲霉毒素 等的测定操作 方法 2 、熟练使用气相色谱和液相色谱仪 第七章 食品常见有害有毒物质的检测
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重点： 有机氯农药、有机磷 苯农药残留 及黄曲霉毒素 等的测定操作方法、气相色 谱和液相色谱仪的使用 难点： 气相色谱和液相色谱仪的使用 第七章 食品常见有害有毒物质的检测
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第一节 有机氯农药残留的测定 第二节 有机磷农药残留的测定 第三节 黄曲霉毒素的测定 本章目录 第七章 食品常见有害有毒物质的检测
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一、定性检验 1 、焰色法 2 、亚铁氨化银试纸法 二、定量检验 采用气相色谱法 第一节 有机氯农药残留的测定
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二、定量检验 1 、农药提取 2 、净化 3 、测定 （ 1 ）气相色谱参考条件 色谱柱：内径 3 ～ 4mm ，长 1.2 ～ 2m 的玻璃柱，内装 涂以 OV-7 （ 15g/L ）和 QF-1 （ 20g/L ）的混合固定液 的 80 ～ 100 目硅藻土。 第一节 有机氯农药残留的测定
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（ 2 ）电子捕获检测器 汽化室温度： 215 ℃；色谱柱温度： 195 ℃；检测器 温度： 225 ℃；载气（氮气）流速： 90ml/min ； （ 3 ）色谱图 （ 4 ）计算 第一节 有机氯农药残留的测定
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一、定性检验 1 、刚果红法 2 、纸上斑点法 二、定量检测 采用气相色谱检测法 第二节 有机磷农药残留的测定
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二、定量检测 1 、标准溶液的配制 2 、试样制备 3 、有机磷农药提取 4 、有机磷农药净化 5 、测定 第二节 有机磷农药残留的测定
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5 、测定 （ 1 ）气相色谱条件； 色谱柱： ①玻璃柱 2.6m×3mm （ i·d ），填装涂有 4.5 ％ DC200 ＋ 2.5 ％ OV － 17 的 ChromosorbWAW DMCS （ 80 ～ 100 目）的担体。 ②玻璃柱 2.6m×3mm （ i·d ），填装涂有 1.5 ％（质量分数） DCOE － 1 的 Chromosorb WAW DMCS （ 60 ～ 80 目） 气体速度：氮气（ N 2 ） 50mL ／ min 、氢气（ H 2 ） 100ml/min 、 空气 50mL ／ min 。 温度：柱温 240 ℃、汽化室 260 ℃、检测器 270 ℃． 第二节 有机磷农药残留的测定
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（ 2 ）测定。吸取 2 ～ 5μL 混合标准液及样品净化液， 注入色谱仪中，以保留时间定性。以试样的峰高或峰 面积与标准比较定量。 6 、结果计算 第二节 有机磷农药残留的测定
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7 、 16 种有机磷农药的色谱图 第二节 有机磷农药残留的测定
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黄曲霉毒素，是一组化学结构类似的化合物。 已分离鉴定出 12 种，包括 B1 、 B2 、 G1 、 G2 、 M1 、 M2 、 P1 、 Q 、 H1 、 GM 、 B2a 和毒醇。 第三节 黄曲霉毒素的测定 黄曲霉毒素 B1 黄曲霉毒素 B2 黄曲霉毒素 B3 黄曲霉毒素 B4 黄曲霉毒素 B5 黄曲霉毒素 B6
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表 1 中国对食品中黄曲霉毒素的最高允许含量 第三节 黄曲霉毒素的测定 食 物 名 称食 物 名 称 最高允许含量 /(ug/kg) 玉米、花生、花生油、坚果和干果 ( 核桃、杏仁 )20( 黄曲霉毒素 B 1 ) 玉米、花生仁制品 ( 按原料折算 )20( 黄曲霉毒素 B 1 ) 大米、其他食用油 ( 香油、菜籽油、大豆油、葵花油、胡麻 油、茶油、麻油、玉米胚芽油、米糠油、棉籽油 ) 10( 黄曲霉毒素 B 1 ) 其他粮食 ( 麦类、面粉、薯干 ) 、发酵食品 ( 酱油、食用醋、豆 豉、腐乳制品 ) 、淀粉类制品 ( 糕点、饼干、面包、裱花蛋糕 ) 5 黄曲霉毒素 B 1 ) 牛乳及其制品 ( 消毒牛奶、新鲜生牛乳、全脂牛奶粉、淡炼 乳、甜炼乳、奶油 ) 、黄油、新鲜猪组织 ( 肝、肾、血、瘦肉 ) 0.5( 黄曲霉毒素 M 1 )
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一、薄层层析法 1 、仪器 小型粉碎机、样筛、电动振荡器、玻璃浓 缩器、玻璃板 5cm×20cm 、薄层板涂布器、展开槽 (25cm×6cm×4cm) 、紫外光灯 100—125W 、波长 365nm 滤光片、微量注射器。 2 、测定方法 ( 一 ) 样品处理 ( 二 ) 黄曲霉毒素提取 第三节 黄曲霉毒素的测定
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( 三 ) 测定 1 ．单向展开法 (1) 薄板制备：称取 3g 硅胶 G ，加 2 ～ 3 倍量的水，研 磨 1 ～ 2min 呈糊状后，倒入涂布器推成 5cm×20cm ， 厚度约 0.25mm 的薄层板 3 块。在空气中干燥 15min ， 在 100 ℃活化 2h ，取出，放干燥器中保存。一般可保 存 2 ～ 3d ，若放置时间较长，可再活化后使。 第三节 黄曲霉毒素的测定
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(2) 点样 在距薄层板下端 3cm 的基线上用微量注射器或血红素 吸管滴加样液。 第一点： 10μl AFTB, 标准使用液 (0.04μg ／ ml) 。 第 二点： 20μl 样液。 第三节： 20μl 样液 +10μL0.04μg ／ ml AFTB1 标准使 用液。 第四点： 20μl 样液 +10μL0.02μg ／ ml AFTB1 标准使 用液。 第三节 黄曲霉毒素的测定
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(3) 展开与观察 在展开槽内加 10mL 无水乙醚，预展 12cm ，取出挥干。再 于另一展开槽内加 10mL 丙酮 — 三氯甲烷 (8+92) ，展开 10 ～ 12cm ，取出，在紫外光下观察结果. 方法如下： a ．由于样液上加滴了 AFTB1 标准，可使 AFTB1 标准点与样液 中 AFTB1 ，荧光点重叠。若样液为阴性，薄板上第三点 AFTB1 为 0.0004μg ，可用作检查样液中 AFTB1 最低检出量是否正常出 现；若样液为阳性；则起定性作用。薄层板上第四点 AFTB1 标 准为 0.002μg ，主要起定位作用。 第三节 黄曲霉毒素的测定
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b ．若第二点与 AFTB1 标准点的相应位置上无蓝色荧光点，则 表示样品中 AFTB1 含量＜ 5μg ／ kg ；若在相应位置上有蓝色荧 光点，则需进行确证试验。 (4) 确证试验：为确认薄层样上样液荧光系由黄曲霉毒素 B1 产 生的，加滴三氟乙酸，产生 AFTB1 的衍生物，展开后此衍生物 的比移值约在 0.1 左右。于薄层板左边依次滴加两个点。 第一点： 10μL 0.04μg ／ mL AFTB1 标准使用液。 第二点： 20μL 样液 第三节 黄曲霉毒素的测定
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于以上两点各加一小滴三氟乙酸盖于其上，反应 5min 后，用吹风机吹热风 2min( 板上温度不高于 40 ℃ ) ， 再于薄层板上滴加以下两点。 第三点： 10μL 0.04μg ／ mL AFTB1 标准使用液。 第四点： 20μL 样液。 按上法展开并观察，样液是否产生与 AFTB1 标准点 相同的衍生物。未加三氟乙酸的三、四两点，可依次 作为标准与标准的衍生物空白对照。 第三节 黄曲霉毒素的测定
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（ 5 ）稀释定量：样液中的 AFTB1 荧光点的荧光强度，如与 AFTB1 标准点最低检出量（ 0.0004μg ）的荧光强度一致，则样 品中 AFTB1 含量为即为 5μg ／ kg 。 若样液中荧光强度比最低检出量强，则根据强度估计，减少 滴加微升数，或将样液稀释后再滴加不同微升数，直至样液的 荧光强度与最低检出量的荧光强度一致为止。滴加式样如下： 第一点： 10μLAFTB1 标准使用液（ 0.04μg ／ mL ）。 第二点；根据情况滴加 10μL 样液。 第三点：根据情况滴加 15μL 样液。 第四点：根据情况滴加 20μL 样液。 第三节 黄曲霉毒素的测定
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（ 6 ）结果计算 第三节 黄曲霉毒素的测定 式中 X—— 样品中 AFTB1 的含量， μy/kg ； V 1 —— 加入苯一乙睛混合液的体积， mL ； V 2 —— 出现最低荧光时滴加样液的体积， mL ； D—— 样液的总稀释倍数； m 1 —— 加入苯一乙腈混合液溶解时相当样品的质量， g ； 0.0004——AFTB1 的最低检出限量， μg 。
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2 ．双向展开法 (1) 点样：取薄层板三块，在距下端 3cm 基线上，在距左边缘 0.8 ～ lcm 处，各滴加 10μLAFTB1(0.04μg ／ mL) 标准液，在距左 边缘 2.8 ～ 3cm 处，各滴加 20μL 样液。然后在第二块板的样液 点上加滴 10μL AFTB1(0.04μg ／ mL) 标准液，在第三块板的样 液点上加滴 10μL AFTB1(0.02μg ／ mL) 标准液。 第三节 黄曲霉毒素的测定
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(2) 展开 a ．横向展开：在展开槽内的长边置一玻璃支架，加 10mL 无水 乙醇，将上述点好的薄层板靠标准点的长边，置于展开槽内展 酗，展至板端后，取出挥干。根据情况，需要时，可再重复 1 ～ 2 次。 b ．纵向展开：挥干的薄层板以丙酮 — 三氯甲烷 (8:92) 展开至 10 ～ l2cm 为止。丙酮与氯甲烷的比例，根据不同条件自行调节。 第三节 黄曲霉毒素的测定
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(3) 观察与评定结果 : a ．在紫外光下观察第一、二块板，若第二块板在 AFTB1 标准 点的相应处出现最低检出量，而在第一板与第二板的相同位置 上未出现荧光，则样品中 AFTB1 含量＜ 5μg ／ kg 。 b ．若第一块板与第二块板的相同位置上出现荧光点，则将第 一块板与第三块板比较，着第三块板上第二点与第一块板上第 二点的相同位置上的荧光点是否与 AFTB1 标准点重叠，如果重 叠，再进行确证试验。在具体测定中，三块板可以同时做，也 可按顺序做。当第一块板出现阴性时，第三块板可以省略，如 第一块板为阳性, 则第二块板可省略，直接做第三块。 第三节 黄曲霉毒素的测定
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(4) 确认试验：另取薄层板二块，于第四、五两板距左边缘 0.8 ～ 1cm 处，各滴加 10μLAFTB1(0.04μg ／ mL) 标准液及 1 小滴 三氟乙酸；在距左边缘 2.8 ～ 3cm 处，于第四板滴加 20μL 样液 及 1 小滴三氟乙酸；于第五板滴加 20μL 样液、 10μLAFTB1 标准 液及 1 小滴三氟乙酸，反应 5min 后，用热风吹 2min （板上温度 不高于 40 ℃）。 再用双向展开法展开后，观察样液是否产生与 AFTB1 标准点 重叠的衍生物。观察时，可将第一板作为样液的衍生物空白板。 若样液 AFTB1 含量较高时，则将样液稀释后，按单向展开法中 （ 4 ）做确认试验。 第三节 黄曲霉毒素的测定
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(5) 稀释定量 若样液中 AFTB1 含量较高，可按单向展开法中（ 5 ）稀释 定量操作。若 AFTB1 含量较低，稀释倍数小，在定量的纵向展 开板上仍有杂质干扰，影响结果判断，可将样液再做双向展开 法测定，以确定含量。 （ 6 ）结果计算：同单向展开法。 第三节 黄曲霉毒素的测定
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