项目八 稀释平板计数法-增.

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1 项目八 稀释平板计数法-增

2 稀释平板计数法的应用范围 应用比较广泛，包括食品、药品、化妆品、水等等行业的检测中。

3 稀释平板计数法的应用范围 食品方面： 在GB 4789系列标准（食品安全国家标准 食品微生物学检验）中就存在多个标准采用稀释平板计数法。
GBT 蜡样芽胞杆菌检验 GB 霉菌和酵母计数 GB 双歧杆菌的鉴定 GB 乳酸菌检验 GB 大肠埃希氏菌计数

4 稀释平板计数法的应用范围 药品方面： 饮用水： 中国药典2010版 细菌、霉菌及酵母菌计数
化妆品方面： GB 化妆品微生物检验标准方法 细菌总数测定 饮用水： GB/T 生活饮用水标准检验方法 微生物指标 其他方面： GB/T 公共场所茶具 细菌总数测定

5 是否各个标准的稀释平板计数法都一样？ 需要注意的是，尽管上述标准都是使用稀释平板计数法，但可能有较大差异。
如培养基、接种量、加样法、培养温度、培养时间、计数规则等方面。 项目 菌落总数 霉菌酵母 金黄色葡萄球菌 乳酸菌 接种量mL/皿 1 0.3、0.3、0.4 0.1 加入法 混菌 涂布 培养 条件 36℃ 48h 28℃ 5d 36℃ h 36℃ 48h 有效 平皿 30-300 10-150 三皿 20-200 如菌落总数是每个稀释度2皿，每皿1mL，混菌法；金黄色葡萄球菌每个稀释度3皿，1mL分为0.3mL、0.3mL、0.4mL三皿，混菌法；乳酸菌每个稀释度2皿，每皿0.1mL涂布法。 霉菌、酵母28℃培养 5d；大肠菌群37℃ 18-24h；菌落总数37℃培养48h；金黄色葡萄球菌37℃培养45-48h；大肠埃希菌37℃培养18-24h。 霉菌、酵母（10-150）、金黄色葡萄球菌（三皿20-200）、大肠埃希菌（10-100）和菌落总数（30-300）有效平皿的判断标准不一样。 计算和报告规则也有不同，如菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母、金黄色葡萄球菌等等。 也见于USDA Laboratory Guidebook Notice of Change ，

6 稀释平板计数法的稀释度怎么选择？何为适宜的稀释度？
1.如果要测定某个样品微生物数目 初次测定某样品在没有信息情况下，可同时选取4-5个连续稀释度。以后测定同样样品时，可以根据该结果进行选择。

7 稀释平板计数法的稀释度怎么选择？何为适宜的稀释度？
2.如果全部平板菌落数都大于300 平板菌落过多，会造成结果偏低。因为有些菌被抑制长不出来。 1）如果想检出菌数，那么应该增加稀释； 2）如果结果足以判断，那么可以接受。

8 稀释平板计数法的稀释度怎么选择？何为适宜的稀释度？
3.如果全部平板菌落数都小于30 平板菌落过少，结果可能较难判断（特别是被污染时）。 1）如果想检出更准确的菌数，那么应该减少稀释；如是-1、-2、-3，那么可以直接报告。 2）如果结果足以判断（合格），那么可以接受。

9 稀释平板计数法的稀释度怎么选择？何为适宜的稀释度？
4. 如果全部平板菌落数都为0 按规则此时报告结果<1×最小稀释倍数，但仍要注意： 1）若所选稀释度太大的话，无实际意义，如-5、-6、-7。因此要看是否应该用更小的稀释度。 2）若所选稀释度是-1、-2、-3，那么不需要继续考虑了，可以直接报告。

10 稀释平板计数法的稀释度怎么选择？何为适宜的稀释度？
5.何为适宜的稀释度？ 所以，适宜的稀释度就是，选择了它，可得出合理的检测结果。 1）对于定性判断样品，结果数据能判断样品合格/不合格就可以； 2）对于需要准确数据的样品，那么结果数据有进一步要求。

11 为什么水产品的培养温度和时间不同？ 一般样品36 ±1 ℃培养 48 h±2 h； 水产品 30 ±1 ℃培养 72 h±3 h。
因水温一般较低，检测时也给予相对低的温度培养。但温度低时微生物生长就慢，所以时间需要增加。

12 为什么有效平板的菌落数是30-300？ 实际上，不同的稀释平板法的有效平板菌落数的范围不尽相同。 设定一个菌落数范围的原因：
菌落过多时，有些菌被抑制不能长出来，且难数清； 菌落过少时，会造成较大误差，特别是有污染时； 如果菌落大，则要求菌落不能太多，例如霉菌的。

13 菌落总数中到底包不包括酵母菌与霉菌？ 菌落总数检测，计数时应数包括细菌、霉菌、酵母等所有菌落。因标准里面的定义就没有排除任意一种。
但要注意的是，同一个样品进行菌落总数测定和霉菌、酵母测定的话，某种菌的数目很可能差别很大，这和培养基培养条件都有关系。 食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL） 检样中形成的微生物菌落总数

14 计算问题，如果只有一个稀释度的一个平板在有效范围
应该怎么算，这个有些争议。 按照标准里面的7.1.1条款，似乎是要算平均数。 但有经验的老师和参与建立标准的老师都说只要范围内的那个平板。 附，FDA方法似乎是只用范围内的那个平板

15 菌落总数测定时平板上的菌落大小 同种微生物： 不同微生物：
一般表面长的菌落较大，因表面无空间限制，且氧气充足。培养基内部的菌落较小，因受空间限制和氧气限制；通常呈橄榄核状，这是因它一般在某个平面进行类似飞碟形生长，调整视线角度可看到近圆形。 不同微生物： 在大小、颜色等各方面可能有很大差别。

16 菌落总数测定时平板上的菌落蔓延生长怎么办？
菌落蔓延生长计数和报告 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以 2，代表一个平板菌落数。 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。

17 菌落总数测定时平板上的菌落蔓延生长怎么办？
菌落蔓延生长有三种不同类型： 一是链状菌落，菌落之间没有明显界线。这些菌落是当琼脂和试验物混合时，一个细菌块被分散所致； 二是在琼脂和平皿底之间形成的水膜样菌落； 三是在平皿边缘或琼脂表面形成的水膜样菌落。

18 菌落总数测定时平板上的菌落蔓延生长怎么办？
菌落蔓延生长的避免办法 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 mL），凝固后翻转平板，按 条件进行培养。 另，加入TTC、用陶瓦盖也有不错效果。

19 菌落总数测定时平板上的菌落蔓延生长怎么办？
菌落蔓延生长的原因分析 培养基表面有水（倒培养基温度高，然后盖皿盖后，皿盖上很多冷凝水，滴到培养基上），然后细菌会随着水分散在水迹范围。同理，培养基边缘有一圈细菌也是这个原因。 微生物有动力。如芽孢杆菌常蔓延生长。 培养基琼脂含量太低。

20 菌落总数测定的结果怎么判断？ 空白长菌，检测结果无效； 实验结果（指报告值） 单个测定内的梯度关系，是否接近十倍？
与参考值比较，用critical difference判断，大约是（1/1.8报告值--1.8报告值）的范围； 实验室能力认可认证的实验结果判断，用稳健统计方法计算z值，再判断。 单个测定内的梯度关系，是否接近十倍？ 单个测定内的平行度，两数是否接近（有效菌落数范围） 实验结果与参考值，用critical difference， ISO 4833:2003 实验内的梯度关系，卡方测验，《食品微生物实验室质量管理手册（彩色）》 实验内平行度，卡方测验，《食品微生物实验室质量管理手册（彩色）》

21 稀释度越大的平板，菌落数越多，什么原因？
这是可能存在的，最常见于高渗透压类产品、含防腐剂等微生物抑制剂较高的产品。 稀释度较低时，抑制微生物的作用较强，菌落较少；而稀释度较高时，抑制作用变小，菌落增多。 解决办法1，增大稀释度，直到出现约10倍递减的梯度，可能出现的困难是稀释度大了，菌落可能过少。 解决办法2，如果是醋类纯液体，可以考虑用滤膜法。 实验结果与参考值，用critical difference， ISO 4833:2003 实验内的梯度关系，卡方测验，《食品微生物实验室质量管理手册（彩色）》 实验内平行度，卡方测验，《食品微生物实验室质量管理手册（彩色）》

22 某水样的的菌落总数检测的平板